في السنوات الأخيرة، استمر تطوير وتطبيق تقنية mRNA في جذب الانتباه. تتضمن عقاقير mRNA تطعيم mRNA الذي يشفر بروتينات المستضد في جسم الإنسان. من خلال الاستفادة من المادة الوراثية داخل الخلايا البشرية، فإنها تعبر عن بروتينات المستضد وتوليفها. تحفز هذه العملية وتنشط جهاز المناعة في الجسم من خلال بروتينات المستضد، بهدف الوقاية من الأمراض وعلاجها. تتمتع عقاقير mRNA بمزايا مثل السلامة والكفاءة ودورة قصيرة. يمكنها تحفيز المناعة الخلطية والخلوية في وقت واحد وتم تطبيقها في مؤشرات مختلفة، بما في ذلك الأورام والأمراض المعدية والأمراض النادرة وأمراض القلب والأوعية الدموية والمزيد.
يمكن تقسيم العملية الكاملة لتطوير دواء mRNA تقريبًا إلى عدة خطوات:
تحديد التسلسل وتصميمه - نسخ mRNA في المختبر - تحضير التغليف
ال عادي تتضمن خطوات نسخ mRNA في المختبر (IVT) ما يلي:
استخراج الحمض النووي البلازميدي وتقسيمه خطيًا—تنقية الحمض النووي البلازميدي—النسخ في المختبر (التغطية النسخية المشتركة) —التنقية —محلول مخزون mRNA
ال وعاء واحد تشمل عملية نسخ mRNA في المختبر (IVT) ما يلي:
استخراج الحمض النووي البلازميدي وتقسيمه خطيًا—النسخ في المختبر (التغطية النسخية المشتركة) - التنقية - محلول مخزون mRNA
حاليًا، تتضمن معظم العمليات الحالية خطوة تنقية واحدة للحمض النووي البلازميدي بعد الانقسام الأنزيمي قبل خطوة IVT. طورت شركة Yeasen Biotechlogy، استنادًا إلى مركز تطوير تطبيقات mRNA الناضج، عملية "Onepot mRNA Transcription". في هذه العملية، لا يتم تنقية الحمض النووي البلازميدي الدائري بعد الانقسام الأنزيمي؛ بدلاً من ذلك، يتم استخدامه مباشرة للنسخ في المختبر، مما يؤدي إلى الحصول على محلول مخزون mRNA عالي الجودة. تعمل هذه العملية بالكامل، مع ضمان جودة المنتج والعملية، على تقصير مدة العملية الحالية.
مزايا العملية:
- تحسين العملية، وتقليل خطوات IVT لتسهيل التشغيل.
- انخفاض تكاليف المواد، مما يلغي الحاجة إلى التنقية بعد الانشطار وفحص الجودة.
- الحفاظ على جودة mRNA والإنتاجية.
بيانات:
1. العائدات و نزاهة:
استخدام باستخدام 1 ميكروجرام من البلازميدات الخطية 2K و4K و9K، يمكن لعملية الوعاء الواحد أن تولد 150-200 ميكروجرام من mRNA.
| طول | العائدات | نزاهة |
| 2 كيلو | 200 ميكروجرام | 94.00% |
| 4ك | 185 ميكروجرام | 92.20% |
| 9 كيلو | 150 ميكروجرام | 87.50% |
تم إجراء اختبار السلامة باستخدام الرحلان الكهربائي الشعري (CE) لتقييم سلامة الشظايا ذات أطوال 2K و4K و9K. كانت سلامة شظايا 2K و4K >92٪، وكانت سلامة شظايا 9K >87٪.
2. الكشف عن كفاءة تغطية mRNA
تم استخدام LC-MS لتقييم كفاءة التغطية لتسلسل 2K، حيث كشف عن كفاءة تغطية بنسبة 99.5٪.
الصورة العلوية: كروماتوغرام الأشعة فوق البنفسجية HPLC
الصورة السفلية: طيف الوزن الجزيئي المفكك
3. الكشف عن كفاءة تعدد الأدينيلات في mRNA
تم استخدام LC-MS للكشف عن كفاءة البولي أدينيلات للعينات، مما أظهر توزيع النتائج بشكل طبيعي.
الصورة العلوية: كروماتوغرافيا سائلة كروماتوغرافيا TIC
الصورة السفلية: طيف الوزن الجزيئي المفكك
4.التعبير عن mRNA فحص
نقل خلايا 293T بمنتجات mRNA المصنعة باستخدام كل من عادي عملية (يسار، البلازميدات الخطية و(التطهير) ولم تظهر عملية الوعاء الواحد (على اليمين، البلازميدات الخطية بدون تنقية) أي فرق في التعبير عن البروتين الفلوري بعد 24 ساعة من الثقافة.
معلومات الطلب