إن جوهر تحديد كمية مكتبة NGS هو تحديد كمية الأحماض النووية (DNA أو RNA). يعد التحليل الدقيق لتحديد كمية مكتبة NGS أمرًا بالغ الأهمية للحصول على بيانات تسلسل عالية الجودة. إذا كان التركيز الكمي لمكتبة NGS مرتفعًا، فقد يكون إنتاج بيانات التسلسل منخفضًا بسبب عدم كفاية التجميع. ومع ذلك، قد يتسبب التركيز الكمي المنخفض في حدوث تداخل في الإشارة بين المجموعات لإنتاج بيانات منخفضة الجودة، بل وحتى يؤدي إلى فشل التسلسل. بالإضافة إلى ذلك، مع زيادة تدفق تسلسل أجهزة التسلسل، غالبًا ما يتم دمج مكتبات NGS المتعددة للتسلسل. وفقًا لمتطلبات حجم بيانات التسلسل، يتم خلط مكتبات NGS بكميات مولية مقابلة بناءً على النتائج الكمية لتثبيت ناتج حجم بيانات كل عينة. لذلك، يعد تحديد كمية مكتبات NGS الدقيقة أمرًا بالغ الأهمية.

في الوقت الحاضر، هناك طريقتان رئيسيتان لقياس كمية مكتبة NGS، طريقة امتصاص الأشعة فوق البنفسجية، وطريقة الصبغة الفلورية. NanoDrop هو جهاز لقياس كمية الحمض النووي مصمم بناءً على مبدأ امتصاص الأشعة فوق البنفسجية؛ Qubit هو جهاز لقياس كمية الحمض النووي تم تطويره وفقًا لمبدأ الصبغة الفلورية. الدقة الكمية وتكلفة هاتين الطريقتين مختلفتان. يوصى هنا بشكل أساسي بطريقة qubit. فلماذا نوصيك بـ qubit؟ ما هي خصائص منتجات Qubit التي توفرها Yeasen؟ يرجى الاستمرار في القراءة...

1. لماذا نوصيك بـQubit؟

2. ما هي خصائص منتجات Qubit التي تقدمها Yeasen؟

• كيف يعمل كيوبت؟
• منتج شعبي مقدم من شركة Yeasen
• مميزات المنتج

3. كيفية اختيار Qubit للعينات المختلفة؟

1. لماذا نوصيك بـQubit؟

لا شك أن كيوبت أفضل من نانودروب. فلماذا يكون كيوبت أفضل من نانودروب؟ ما الفرق بين كيوبت ونانودروب؟ أولاً، كما ذكرنا من قبل، يختلفان في مبدأ تحديد كمية الحمض النووي، تم تصميم نانودروب على أساس امتصاص الأشعة فوق البنفسجية. مبدأ طريقة امتصاص الأشعة فوق البنفسجية هو وجود قواعد البيورين والبيريميدين في مكونات الحمض النووي، وهذه القواعد لها روابط مزدوجة مترافقة. يوجد امتصاص قوي للضوء عند 250-280 نانومتر في منطقة الأشعة فوق البنفسجية، وقيمة الامتصاص القصوى حوالي 260 نانومتر. لذلك، يمكن استخدام امتصاص الأشعة فوق البنفسجية للحمض النووي لتحديد كمية التركيز. نانودروب بسيط وسريع التشغيل، لكنه لا يستطيع التمييز بين الحمض النووي والحمض النووي الريبي والأحماض النووية المتحللة والنوكليوتيدات الحرة والشوائب الأخرى. إنه غير مناسب للحصول على بيانات كمية دقيقة للمكتبة. لكن، يعد تحديد الكميات باستخدام البت الكمومي الخيار الأفضل لتحديد الكميات الدقيقة لمكتبة الجيل التالي من السلاسل، وخاصة لتحديد الكميات باستخدام الحمض النووي. إذن، ما هي ميزات تحديد الكميات باستخدام البت الكمومي للحمض النووي؟ يُرجى الاطلاع على الجدول التالي:

2. ما هي خصائص منتجات Qubit التي تقدمها Yeasen؟

قبل تقديم خصائص منتجات Qubit التي تقدمها Yeasen، دعونا نفهم كيفية عملها.

2.1 كيف يعمل Qubit؟

مبدأ Qubit هو استخدام الصبغات الفلورية للارتباط بجزيئات الحمض النووي لإصدار الفلورسنت، ثم قياس شدة الفلورسنت للحصول على تركيز الحمض النووي. تتألق الصبغات الفلورية فقط بعد الارتباط بسلسلة الحمض النووي المزدوجة، والفلورسنت الناتج يتناسب مع تركيز الحمض النووي.

2.2 المنتج الشعبي الذي توفره شركة Yeasen

ال مجموعة اختبار 1×dsDNA HS لـ Qubit® (رقم القطعة: 12642ES)، تم تطويرها على أساس مجموعة اختبار dsDNA HS لمجموعة Qubit® (رقم الكتالوج: 12640ES)، عبارة عن محلول مسبق الخلط من Qubit® جاهز للاستخدام لتخفيف الأصباغ المركزة في المجموعة الأصلية مسبقًا إلى محلول عامل. عند التشغيل، تحتاج فقط إلى خلط السائل العامل بالعينة المراد اختبارها لتحديد تركيز العينة بواسطة مقياس الفلورسنت Qubit®، وهو أكثر ملاءمة للاستخدام.

2.3 ميزات المنتج

بسيطة وسهلة التشغيل: سائل مختلط جاهز للاستخدام، لا حاجة لتحضير سائل العمل، تشغيل بسيط، كمية أكبر من الوقت الموفر؛

الشكل 1. عمليات مجموعة اختبار dsDNA HS لـ Qubit

حساسية عالية للغاية: تقدير دقيق للتخفيف التدرجي 64x، 0.2-100 نانوجرام من dsDNA له علاقة خطية جيدة؛

خصوصية فائقة: الكشف النوعي عن dsDNA، يتمتع بتحمل ممتاز لبعض الملوثات التقليدية؛

سرعة ربط الصبغة السريعة: يمكن الوصول إلى التشبع في غضون دقيقتين، لذلك ليست هناك حاجة إلى الانتظار للحصول على قراءة سريعة للنتائج الكمية الدقيقة؛

استقرار عالي: استمرت إشارة الفلورسنت لمدة 3 ساعات، ولم تتأثر الدقة الكمية بعد 20 يومًا في درجة حرارة الغرفة.

الشكل 1. اختبار استقرار المنتج. تظهر النتائج أنه يظل مستقرة بعد تخزينها في درجة حرارة الغرفة لمدة أسبوعين (كان الانحراف بين القيمة المقاسة والقيمة النظرية <10%)

ملاحظة: تم اختيار تركيزين من dsDNA، وتم استخدام Thermo#Q33230 المخزن عند 4 درجات مئوية، وYeasen#12642 المخزن عند 4 درجات مئوية، وYeasen#12642 المخزن في درجة حرارة الغرفة (حوالي 25 درجة مئوية) لتحديد قيم التركيز في أوقات مختلفة، وتم حساب معدل الانحراف بين كل قياس والأول (المشار إليه بـ 0d).

الشكل 2. اختبار استقرار المنتج. ثبات فائق، وأهمية عالية لنتائج الاختبار خلال فترة الصلاحية

3. كيفية اختيار Qubit للعينات المختلفة؟

Qubit، قياس سريع! إن استخدام Qubit لقياس المكتبات له العديد من المزايا. فعملية الكشف الخاصة به سريعة وفعالة.يمكن الحصول على نتائج التسلسل في غضون ثوانٍ قليلة لعينة واحدة ويمكن إخراج التركيز مباشرة، وهو أمر بديهي للغاية. في الوقت نفسه، يمكن أن يكون متوافقًا أيضًا مع معظم أدوات تسمية الإنزيم لقياس كمية العينة الدفعية، وهو الخيار الأول لقياس الكميات التقليدية للمكتبات وتقدير كمية dsDNA.