Hvad er et sekundært antistof?
Et sekundært antistof er et antistof, der kan binde til et primært antistof. Det bruges hovedsageligt til at påvise tilstedeværelsen af det primære antistof. Det primære antistof binder specifikt til antigenet, og det sekundære antistof binder specifikt til det primære antistof. Med andre ord kan Fc-regionen eller Fab-fragmentet af det primære antistof fungere som et antigen til at stimulere kroppen til at producere antistoffer. Det vil sige, at det primære antistof hovedsageligt er IgG klasse immunoglobuliner, så det sekundære antistof er et anti-IgG antistof.
Rollen af sekundære antistoffer
Det primære antistof binder sig specifikt til målproteinet, og det primære antistof skal mærkes med et selvlysende stof eller en kromogen gruppe. Det er ikke muligt at se med det blotte øje, om det primære antistof binde proteinet. Det primære antistof er imidlertid relativt specifikt, og hvert af dem er mærket til en høj pris. Det er almindeligt at bruge et mærket sekundært antistof, der kan binde til det primære antistof og har en påviselig mærkning (såsom en fluorescerende, radioaktiv, kemiluminescerende eller chromogen gruppe). Så det nuværende design har generelt det sekundære antistof med et detekterbart mærke til at detektere det primære antistof, mens det primære antistof genkender substratet. På denne måde, når det primære antistof binder til substratet, kan det påvises gennem det sekundære antistof.
For eksempel ECL-luminescensprincippet: I ECL-substratet er der H2O2 og luminol (og dets derivater), som udsender fluorescens under påvirkning af HRP (peberrodsperoxidase).
Nøglepunkter for brug af sekundære antistoffer
Det sekundære antistof er et antistof, der produceres ved at immunisere pattedyr (normalt immunisering af geder, heste, æsler, muldyr og marsvin osv.) med immunglobulin IgG fra en bestemt undertype af den primære antistofart (såsom kaniner, mus), så det sekundære antistof kun binder sig til en specifik art og undertype af det primære antistof. For eksempel vil får anti-mus (sekundært antistof) specifikt binde til mus monoklonalt (primært antistof) og vil ikke binde til kanin polyklonalt eller rotte monoklonalt.
Koblingsmærker af sekundære antistoffer
Forskellige eksperimentelle metoder vil resultere i forskellige koblingsgrupper for sekundære antistoffer, som hovedsageligt er enzymer (peberrodsperoxidase/HRP og alkalisk phosphatase/AP), fluorescerende grupper (FITC, Rhodamine, PE, Dylight, Alexa Fluor, cy3, etc.), biotin, guldpartikler osv. Generelt anbefales HRP-antistoffer, som HRP-antistoffer. ELISA, IHC og biotin-mærkede sekundære antistoffer anbefales til IHC, mens fluorescerende mærker som Alexa Fluor 488, FITC, PE bruges til IF, FC osv.
Sådan vælger du det rigtige sekundære antistof
en. Immunblotting (WB)
Vælg et sekundært antistof mærket med peberrodsperoxidase eller alkalisk phosphatase til traditionel Western blotting; vælg et sekundært antistof mærket med den tilsvarende fluorofor til fluorescerende Western blotting.
b. Immunhistokemi (IHC/ICC)
B. For ICC (Immunocytokemi), vælg et sekundært antistof mærket med Biotin.
C. Immunfluorescens (IHF/ICF)
Immunpræcipitation tillader ofte valget af at anvende et sekundært antistof, der er enten Fc- eller Fab-specifikt. Sådanne sekundære antistoffer kan undgå interferens fra den tunge kæde (molekylvægt 55 kDa) eller den lette kæde (molekylvægt 25 kDa).
Anbefalet produktinformation
| Etiketgruppe | Produktnummer | Produktnavn |
| Umarkeret | 34850ES | Ged Anti-kanin lgG(H+L) |
| 34851ES | Gede Anti-Mosue lgG(H+L) | |
| 34847ES | Æsel Anti-Human IgG(H+L) | |
| HRP | 33101ES | Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) |
| 33201ES | Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 33301ES | Peroxidase AffiniPure ged anti-rotte IgG (H+L) | |
| 33401ES | Peroxidase AffiniPure ged anti-marsvin IgG(H+L) | |
| 33501ES | Peberrod Peroxidase Ged Anti-Human IgG (H+L) | |
| 33701ES | Peroxidase AffiniPure Rabbit Anti-Gede IgG (H+L) | |
| 33801ES | Peroxidase AffiniPure Rabbit Anti-Sheep IgG (H+L) | |
| 34201ES | Peroxidase AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L) | |
| 34101ES | Peroxidase AffiniPure Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 34301ES | Peroxidase AffiniPure Æsel Anti-ged IgG (H+L) | |
| 33101ES | Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | |
| Grøn Fluorescens | 33106ES | YSFluor™ 488 gede anti-kanin IgG (H+L) |
| 33126ES | YSFluor™ 488 Gede Anti-Human IgG (H+L) | |
| 33206ES | YSFluor™488 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 33306ES | YSFluor™ 488 ged Anti-Bovin IgG (H+L) | |
| 33406ES | YSFluor™ 488 gede anti-marsvin IgG (H+L) | |
| 33706ES | YSFluor™488 kanin anti-ged IgG (H+L) | |
| 33906ES | YSFluor™ 488 kanin anti-mus IgG (H+L) | |
| 34906ES | YSFluor™488 Æsel Anti-Får IgG (H+L) | |
| 34106ES | YSFluor™488 Æsel Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 34206ES | YSFluor™488 Æsel Anti-kanin IgG (H+L) | |
| 34306ES | YSFluor™ 488 æsel anti-ged IgG (H+L) | |
| 34406ES | YSFluor™ 488 æsel anti-rotte IgG (H+L) | |
| 34506ES | YSFluor™488 æsel Anti-marsvin IgG (H+L) | |
| 34606ES | YSFluor™488 æsel Anti-kylling IgG (H+L) | |
| 34706ES | YSFluor™488 kanin anti-kylling IgY(H+L) | |
| 34806ES | YSFluor™488 Æsel Anti-Human IgG (H+L) | |
| 34856ES | FITC AffiniPure Goat Anti-Human IgG(H+L) | |
| 33107ES | FITC-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) | |
| 33207ES | FITC-AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 33307ES | FITC-AffiniPure ged anti-rotte IgG (H+L) | |
| 33707ES | FITC-AffiniPure kanin anti-ged IgG (H+L) | |
| 33807ES | FITC-AffiniPure Rabbit Anti-Sheep IgG (H+L) | |
| Rhodamin | 33109ES | Rhodamin (TRITC) gede anti-kanin IgG (H+L) |
| 33209ES | Rhodamin (TRITC) gede anti-mus IgG (H+L) | |
| 33709ES | Rhodamine(TRITC) AffiniPure kanin anti-ged IgG (H+L) | |
| 33210ES | Rhodamine Red-X (RRX) gede anti-mus IgG (H+L) | |
| Orange fluorescens | 33112ES | YSFluor™594 AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) |
| 33212ES | YSFluor™ 594 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 33222ES | YSFluor™ 594 Gede Anti-Human IgG (H+L) | |
| 33412ES | YSFluor™594 ged anti-marsvin IgG (H+L) | |
| 33312ES | YSFluor™ 594 ged Anti-Bovin IgG (H+L) | |
| 33712ES | YSFluor™594 kanin anti-ged IgG (H+L) | |
| 33812ES | YSFluor™ 594 kanin anti-får IgG (H+L) | |
| 33912ES | YSFluor™594 kanin anti-mus IgG (H+L) | |
| 34712ES | YSFluor™594 kanin anti-kylling IgY (H+L) | |
| 34112ES | YSFluor™ 594 Æsel Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 34212ES | YSFluor™594 Æsel Anti-kanin IgG (H+L) | |
| 34312ES | YSFluor™ 594 Æsel Anti-ged IgG (H+L) | |
| 34412ES | YSFluor™ 594 Æsel Anti-rotte IgG (H+L) | |
| 34512ES | YSFluor™594 æsel Anti-marsvin IgG (H+L) | |
| 34612ES | YSFluor™594 æsel Anti-kylling IgG (H+L) | |
| 34812ES | YSFluor™594 Æsel Anti-Human IgG (H+L) | |
| 34912ES | YSFluor™594 Æsel Anti-Får IgG (H+L) | |
| 33208ES | Cy3-AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 33308ES | Cy3-AffiniPure ged anti-rotte IgG (H+L) | |
| 33708ES | Cy3-AffiniPure kanin anti-ged IgG (H+L) | |
| 33808ES | Cy3-AffiniPure Rabbit Anti-Sheep IgG (H+L) | |
| 34855ES | Cy3-AffiniPure Æsel Anti-ged IgG(H+L) | |
| Rød Fluorescens | 33113ES | YSFluor™647 ged anti-kanin IgG (H+L) |
| 33213ES | YSFluor™ 647 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 33223ES | YSFluor™647 Gede Anti-Human IgG (H+L) | |
| 33313ES | YSFluor™ 647 ged Anti-Bovin IgG (H+L) | |
| 33413ES | YSFluor™ 647 gede anti-marsvin IgG (H+L) | |
| 33713ES | YSFluor™ 647 kanin anti-ged IgG (H+L) | |
| 33813ES | YSFluor™647 kanin anti-får IgG (H+L) | |
| 33913ES | YSFluor™ 647 kanin anti-mus IgG (H+L) | |
| 34713ES | YSFluor™647 kanin anti-kylling IgY (H+L) | |
| 34113ES | YSFluor™ 647 Donkey Anti-Mouse IgG (H+L) | |
| 34213ES | YSFluor™ 647 æsel anti-kanin IgG (H+L) | |
| 34413ES | YSFluor™ 647 Æsel Anti-rotte IgG (H+L) | |
| 34813ES | YSFluor™647 Æsel Anti-Human IgG (H+L) | |
| 34913ES | YSFluor™647 Æsel Anti-Får IgG (H+L) |
Referencer
[1]Zhang B, Wang H, Liao Z, et al.EGFP-EGF1-konjugerede nanopartikler til målretning af både neovaskulære og gliomceller i terapi af hjernegliom [J]. Biomaterials, 2014, 35(13): 4133-4145. IF: 8,387[2]Yu X, Wang J, Liu J, et al. Et multimodalt Pepstatin A peptidbaseret nanomiddel til molekylær billeddannelse af P-glycoprotein i hjernen hos epilepsirotter[J]. Biomaterials, 2016, 76: 173-186. IF:8.402
[3]Liu J, He Y, Zhang J, et al. Funktionaliseret nanocarrier kombineret anfaldsspecifik vektor med P-glycoprotein-modulationsegenskab til antiepileptisk lægemiddellevering[J]. Biomaterials, 2016, 74: 64-76. IF:8.402
[4]Ma Y, Ji Y, You M, et al. Mærkning og langtidssporing af knoglemarvs mesenkymale stamceller in vitro ved hjælp af NaYF 4: Yb 3+, Er 3+ opkonverteringsnanopartikler[J]. Acta biomaterialia, 2016, 42: 199-208. IF: 6,638
[5]Wang Y, Lin YX, Qiao SL, et al. Polymere nanopartikler muliggør reversering af makrofager i tumormikromiljø til immunterapi[J]. Biomaterials, 2017, 112(15): 3e163. IF:8.806
[6] Liu C, He X, Liu W, et al. Bi-alleliske mutationer i TTC29 forårsager mandlig subfertilitet med Asthenoteratospermi hos mennesker og mus [J]. American Journal of Human Genetics, 2019, 105(6): 1168-1181. 34106ES60 IF: 9,924
[7]Xu T, Ding W, Ao X, et al. ARC regulerer programmeret nekrose og myokardieiskæmi/reperfusionsskade gennem inhibering af mPTP-åbning[J]. Redox biology, 2019, 20: 414-426.IF（7.126）（Alexa Fluor 488）
[8] Tan T, Wang Y, Wang J, et al. Målretning af peptid-dekorerede biomimetiske lipoproteiner forbedrer dyb penetration og kræftcellers tilgængelighed i solid tumor. Acta Pharm Sin B. 2020;10(3):529-545. Alexa Fluor 488 mærket IgG (H+L)IF: 7.097
[9] En Photoclick Hydrogel til Enhanced Single〤Tell Immunoblotting[J]. Avancerede funktionelle materialer, 2020, 30.33112ES60 IF: 16.836
[10] Bingcheng Yi a,b,1, Lei Yuc,1, Han Tanga, et al. Lysin-doteret polydopamin belægning forbedrer antitrombogenicitet og endotelisering af en elektrospundet, fifibrøs vaskulær graft.. Anvendte materialer i dag, 2021. 33207ES60 IF:10.041