1 Virkningsmekanismen af ​​Blasticidin S

Blasticidin S er et nukleosid-antibiotikum ekstraheret fra Streptomyces griseochromogenes, som specifikt hæmmer proteinsyntesen i prokaryote og eukaryote celler ved at interferere med dannelsen af ​​peptidbindinger i ribosomet. Dens virkningsmekanisme omfatter blokering af hydrolysen af ​​peptidyl-tRNA induceret af frigivelsesfaktorer og forøgelse af bindingen af ​​tRNA til den store ribosomale underenhed, hvorved dannelsen af ​​peptidbindinger til en vis grad hæmmes.

Blasticidin S har en hurtig og potent virkningsmekanisme, og meget lave antibiotikakoncentrationer kan føre til hurtig celledød. Det har ikke kun en betydelig hæmning af proteinsyntese i bakterier og eukaryoter, men også aktivitet mod svampe, nematoder og tumorceller. Pltocidin S bruges ofte til at screene transficerede celler, der bærer bsr- eller BSD-gener.

2 Anvendelse af Blasticidin S

2.1 Cellekultur og screening

• Pattedyrceller: Blast S bruges ofte til at screene transficerede celler, der bærer bsr- eller BSD-gener. Disse resistensgener, henholdsvis fra B. cereus og Aspergillus, var i stand til at omdanne murancidin til avirulente derivater, hvilket muliggjorde selektivt drab af celler uden at bære resistensgener, med arbejdskoncentrationer af Blasticidin S i pattedyrsceller i området fra 1 til 50 μg/mL.

Cell	Genus	Ororganisering	Ckulturmedium	Blasticidin S-koncentrationen (μg/mL)
HeLa	Human	Livmoder	DMEM	3-10
HEK293	Human	Nyre	DMEM	3-10
B16	Mus	Melanom	RPMI	3-10
PC1.0	Hamster	Adenocarcinom	RPMI	10-30
CHO	Hamster	Ovarie	DMEM	5-15

• Bakterieselektion: I bakteriekultur kan den anbefalede koncentration på 25-100 µg/mL hurtigt forårsage cellers død uden resistensgener.

E.coli er lidt mindre følsom over for Blasticidin S, men transformanter er tolerante over for Blasticidin S og kan screenes med lavsalt LB-medium (pH 8) i et koncentrationsområde på 50-100 μg/mL Blasticidin S, og høj pH forbedrer Blasticidin S-aktivitet.

• Planteceller: også anvendelig til genoverførselsforsøg i planteceller, bsr og BSD bruges almindeligvis som screeningsmarkører.

2.2 Forskning i proteinsyntese

• Blasticidin Swas bruges til at studere proteinsynteseprocessen på niveauet af peptidbindingsdannelse, især i HEK293-T-celler og HEK-D5-celler af TLR-2-konstruktioner.

2.3 Antifungale egenskaber

• Det har også en vis svampedræbende aktivitet, som kan bruges til forebyggelse og behandling af risblast. Dens bakteriedræbende virkning er hovedsageligt at påvirke proteinsyntesen og kan hæmme sporespiring, hyfeudvikling og sporedannelse.

2.4 Andre applikationer

• Blasticidin Shas er også blevet brugt til at studere den hæmmende virkning af tumorceller.
• Det fungerer også som et selektionsmiddel for transformerede celler, der indeholder resistensgenet bls, bsr eller BSD.

3 Eksperimentelle procedurer relateret til Blasticidin S (screening af pattedyr stabile transfektanter)

1) Blasticidin S anvendes typisk i en koncentration på 10 μg/mL. Celler transficeres med plasmider, der bærer bsr- eller BSD-genet og inkuberes i normalt vækstmedium indeholdende Blasticidin S for at selektere for stabile transfektanter.

2) 48 timer efter transfektion passerer cellerne i frisk medium indeholdende en passende koncentration af Blasticidin S (Bemærk: Antibiotika virker bedst, når celler er i en aktiv delingsfase. Effektiviteten af ​​antibiotika falder, hvis celletætheden er for høj. Ved spaltning af celler bør sammenløbet ikke overstige 25%).

3) Hver 3.-4. dag, fjern det brugte medium og tilsæt frisk medium indeholdende antibiotika.

4) Efter 7 dage skal du kontrollere for dannelsen af ​​cellekolonier. Afhængigt af værtscelletypen og transfektion/selektionseffektivitet kan kolonidannelse kræve en ekstra uge eller længere.

5) Overfør 5-10 resistente kloner til 35 mm cellekulturskåle og oprethold i selektivt medium i 7 dage. Udfør derefter cytotoksicitetsassays til testning.

4 Produktanbefaling

Yeasen Biotech's Blasticidin S (60218ES) fås i to former: pulver (1 g) og opløsning (10 mg/ml).

Produktnavn	Kat#	Specifikation	Udseende
Blasticidin S CAS：3513-03-9	60218ES10	10 mg	Opløsning (10 mg/ml) i HEPES Buffer，pH 7,5）
	60218ES50	5×10 mg
	60218ES60	10×10 mg
	60218ES80	1 g	Pulver（Forbered en stamopløsning på 5-10 mg/ml med sterilt vand eller buffer, når du bruger）

5 Udgivet artikler med vores reagenser

[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y. Terapeutisk rettet mod den onkogene driver EWSR1::FLI1 i Ewing-sarkom gennem hæmning af FACT-komplekset. Onkogen. 2023 Jan;42(1):11-25. doi: 10.1038/s41388-022-02533-1. Epub 2022 10. november. PMID: 36357572. (HVIS:8,0)

[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. SMAD9-MYCN positiv feedback loop repræsenterer en unik afhængighed for MYCN-amplificeret neuroblastom. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Dec 20;41(1):352. doi: 10.1186/s13046-022-02563-3. PMID: 36539767; PMCID: PMC9764568.(HVIS:11.3)

6 Relaterede produkter

Produktnavn	Kat#	Specifikation
Ciprofloxacin hydrochlorid	60201ES05/25/60	5/25/100g
Ampicillin, natriumsalt	60203ES10/60	10/100 g
Doxycyclinhyklat	60204ES03/08/25	1/5/25 g
Chloramphenicol, USP-grad	60205ES08/25/60	5/25/100g
Kanamycinsulfat	60206ES10/60	10/100 g
Tetracyclin HCl Tetracyclin hydrochlorid (USP)	60212ES25/60	25/100g
Vancomycin hydrochlorid	60213ES60/80/90	100mg/1g/5g
Gentamycin sulfat salt	60214ES03/08/25	1/5/25 g
Spectinomycin hydrochlorid	60215ES08	5g
Phleomycin (20 mg/ml i opløsning)	60217ES20/60	20/5×20mg
Blasticidin S (Blasticidin)	60218ES10/60	10/10×10mg
Nystatin	60219ES08	5g
G418 Sulfat (Geneticin)	60220ES03/08	1/5 g
Puromycin (opløsning 10 mg/ml)	60209ES10/50/60/76	1 × 1 / 5 × 1 / 1 0 × 1 / 50 × 1 ml
Puromycin dihydrochlorid	60210ES25/60/72/76/80	25/100/250/500 mg / 1 g
Hygromycin B (50 mg/ml)	60224ES03	1 g (20 ml)/10×1 g (20 ml)
Hygromycin B	60225ES03/10	1/10 g
Erythromycin	60228ES08/25	5/25 g
Timentin	60230ES07/32	3,2/10×3.2g
Aureobasidin A (AbA)	60231ES03/08/10	1/5×1/10×1 mg
Polymyxin B Sulfat	60242ES03/10	1/10 MU