Produktintroduktion
Kollagenase er en klasse af endonukleaser, der specifikt kan genkende Pro-X-Gly-Pro-sekvensen (som forekommer hyppigt i kollagen og sjældent findes i andre proteiner), og spalte peptidbindingen mellem den neutrale aminosyre (X) og glycin (Gly) i denne sekvens, og kan hydrolysere kollagen i bindevæv.
Mange proteaser er i stand til at hydrolysere enkeltstrengede og denaturerede kollagenpeptider, men kollagenase er den eneste protease, der kan nedbryde naturlige kollagenfibre med en trestrenget supersnoet struktur og findes i vid udstrækning i bindevæv, hvoraf den mest potente er den "rå" kollagenase, der udskilles af den anaerobe histolytiske bakterie Clostridium .
Yeasen collagenase er afledt af Clostridium histolyticum, som er et enzym "grovt" ekstrakt, som ikke kun indeholder kollagenase, der kan nedbryde naturligt kollagen og retikulære fibre, men også indeholder nogle andre proteaser såsom polysaccharidaser, lipaser osv., som effektivt kan hydrolysere andre proteiner og polysaccharider i vævet, polysaccharid og ekstracellulære matrix. epitelvæv, så det er mere velegnet til vævsfordøjelse.
På nuværende tidspunkt er den bakterielle kollagenase på markedet hovedsageligt opdelt i fem typer i henhold til forskellen i aktiviteten af kollagenase: kollagenase type I, type II, type III, type IV og type V.
Valg af kollagenase
Produktnavn | Udseende | Enzym aktivitet | Anvendelsesområde |
Type I kollagenase) | Brunt eller gyldenbrunt krystallinsk pulver | ≥250 U/mg fast stof | Indeholder (collagenase, caseinase, clostridia og trypsin) aktivitet til isolering af epitel-, lunge-, fedt- og binyrevævsceller. |
Type II kollagenase) | Brunt eller gyldenbrunt krystallinsk pulver | ≥125 U/mg fast stof | Indeholder mere clostridaseaktivitet og er velegnet til isolering af lever-, knogle-, skjoldbruskkirtel-, hjerte- og spytkirtelvævsceller |
Type III kollagenase) | Brunt eller gyldenbrunt krystallinsk pulver | ≥100 U/mg fast stof | Den indeholder lav proteolytisk aktivitet, som er effektiv til forbindelsesdelen af fordøjelsesvæv, og bruges ofte til dissociering af pattedyrvævsceller |
Type IV kollagenase) | Brunt eller gyldenbrunt krystallinsk pulver | ≥125 CDU/mg fast* | Indeholder lav trypsinaktivitet og bruges almindeligvis til celleforberedelse til ø- og receptorintegritet |
Type V kollagenase) | Brunt eller gyldenbrunt krystallinsk pulver | ≥125 CDU/mg faststof* | Indeholder mindst 7 proteasekomponenter, som kan bruges til isolering af pancreas-øvæv og adskillelse af bindevæv i enkeltceller |
*CDU = kollagenfordøjelsesenheder
Produktegenskaber
- Høj fordøjelseseffektivitet: Det rå enzymekstrakt af Clostridium histolyticum har høj fordøjelseseffektivitet for væv.
- Afhængig af aktivatorer: kollagenase skal stole på aktiviteten af aktiverende enzymer såsom divalente kationer såsom Ca2+og Zn2+.
- Påvirket af inhibitorer: inhibitorer af collagenase inkluderer EDTA, EGTA, etc.; den anden er tungmetalioner (Hg2+, Pb2+, Cd2+); Der er også nogle kemiske midler som Cystein, histidin, DTT, 2-mercaptoethanol, o-phenanthrolin osv., som også har hæmmende virkninger på kollagenase.
- Stærk interferensresistens: kollagen vil ikke blive påvirket af det serum, der bruges til at dyrke celler.
Forholdsregler ved brug
- Anvendelse: Opløses i Hank's, Earle's eller andre afbalancerede saltopløsninger, den anbefalede arbejdskoncentration er 0,05% ~0,5% (w/v)
- Opbevaringstemperatur: 2-8°C
- Forslag til brug:
(1) Til studiet af kollagenstruktur og biosyntese anvendes ofte collagenasepræparater med højere renhed, og ingen andre proteolytiske aktiviteter anvendes.
(2) Til vævsdissociation anvendes ofte rå kollagenasepræparater, såsom elastase, trypsin eller papain.
FAQ
- Dårlig fordøjelse under forsøget
(1) Hvis det er forårsaget af svag enzymaktivitet eller utilstrækkelige calciumioner, skal kollagenase opbevares under lave temperaturer og tørre forhold, og kollagenaseopløsning skal fryses efter alikvotering
(2) Hvis det er forårsaget af utilstrækkelige calciumioner, bør koncentrationen af calciumioner i kollagenaseopløsningen være 5 mM
- Celledød opstår under brug
(1) Hvis der er et overskud af protease, skal proteasekontakttiden reduceres, eller albumin eller inaktiveret serum skal tilsættes
(2) Hvis pH ændres, skal der anvendes en buffer (f.eks. HBSS); Tjek og juster din pH ofte
(3) Hvis der er for lidt ilt, skal fordøjelsesopløsningen ventileres med steril luft
- Celler blev beskadiget under forsøget
Hvis det er forårsaget af for meget protease, skal mængden af protease reduceres, eller albumin eller inaktiveret serum skal tilsættes
Bestilling
Katalognummer | Produktnavn | Størrelse |
40507ES60 | Kollagenase I | 100 mg, 1 g |
40508ES60 | Collagenase II | 100 mg, 1 g |
40509ES60 | Kollagenase III | 100 mg |
40510ES60 | Kollagenase IV | 100 mg, 1 g |
40511ES60 | Kollagenase V | 100 mg |
Relaterede produktanbefalinger
Katalognummer | Produktnavn | Størrelse |
40123ES60 | PerfCel™l Trypsin-EDTA (0,25%), phenolrød | 100 ml |
40124ES60 | PerfCell™ Trypsin-ingen EDTA (0.25%), ingen phenolrød | 100 ml |
40126ES60 | PerfCell™ Trypsin (0,25%), phenolrød | 100 ml |
40127ES60 | PerfCell™ Trypsin-EDTA (0,25%), phenolrød | 100 ml |
40101ES25 | Trypsin 1:250 (pulver) | 25 g |
40512ES10/60 | PerfCell™ rekombinant trypsin(pulver) | 10 mg/100 mg |
20416ES60 | Rekombinant trypsin(MS-SAFE) | 100 µg |
40134ES60 | PerfCell Tryzyme™Express | 100 ml |
40135ES60 | PerfCell Tryzyme™Express | 100 ml |
40506ES60 | ACCUTASE | 100 ml |
40104ES60/80 | Dispase II | 100 mg/1 g |