Baggrund – Hvad er ROS
Reaktive oxygenarter (ROS) er et normalt produkt af cellemetabolisme - et oxygenholdigt bioaktivt molekyle, herunder peroxid, superoxid, hydroxylradikal, singlet oxygen og α-oxygen osv., som spiller en vigtig regulerende rolle i cellesignalveje og transkription, såsom apoptose, autofagi, aldring, cancer osv.
Effekt af ROS-koncentration på celler – hvorfor opdage ROS?
Ved lave niveauer af reaktive oxygenarter er ROS involveret i intracellulær signalering og regulering som "redox-budbringere". Men under miljøbelastninger (f.eks. ioniserende stråling, varmeeksponering, ultraviolette stråler, hypoxi osv.), stiger ROS-niveauer dramatisk, hvilket kan forårsage DNA-skade, hæmme genekspression, føre til proteinfejlfoldning og endda påvirke proteinsyntesen, hvilket forårsager alvorlig skade på cellulære strukturer, som er kendt som oxidativt stress.
Når ROS-niveauer overstiger kapaciteten af endogene antioxidantforsvar, bliver redoxbalancen forstyrret, hvilket fører til strukturelle eller konformationelle ændringer i DNA, lipider, proteiner og i sidste ende celledød.
ROS-niveau er et vigtigt signal om celleskade forårsaget af normale fysiologiske funktioner og miljøfaktorer, og påvisningen af intracellulært ROS-niveau er af stor betydning for forståelsen af signalvejene og potentielle virkningsmekanismer for nogle lægemidler. Derfor spiller udvælgelsen af passende prober til påvisning af ROS en vigtig rolle i sygdomsmekanismeforskning og lægemiddelscreening.
Hvordan fungerer ROS-detektion?
De Reactive Oxygen Species Assay Kit (CAT# 50101ES01) er den mest almindeligt anvendte metode til at kvantificere niveauer af intracellulære reaktive oxygenarter baseret på ændringer i fluorescensintensiteten af det fluorescerende farvestof DCFH-DA (2,7-Dichlorodi-hydrofluoresceindiacetat).
DCFH-DA i sig selv har ingen fluorescens og kan frit passere gennem cellemembranen, og efter at den er kommet ind i cellen, kan den hydrolyseres af intracellulære esteraser for at producere DCFH. DCFH kan dog ikke trænge ind i cellemembranen, hvilket gør det let for proben at blive mærket og aggregeret i cellen. Intracellulære reaktive oxygenarter er i stand til at oxidere ikke-fluorescerende DCFH for at danne fluorescerende DCF. Intensiteten af DCF grøn fluorescens er direkte proportional med niveauet af intracellulære reaktive oxygenarter, og niveauet af intracellulære reaktive oxygenarter kan kendes ved at detektere fluorescensen af DCF.
Under betingelserne med excitationsbølgelængde på 488 nm og emissionsbølgelængde på 525 nm blev DCF-fluorescens detekteret med fluorescensmikroskop, laserkonfokalmikroskop, fluorescensspektrofotometer, fluorescensmikropladelæser, flowcytometer osv., for at bestemme det intracellulære reaktive oxygenniveau.
Litteratur udgivet af kunder, der bruger dette produkt (nogle eksempler)
Fra september 2022 er i alt 164 artikler blevet publiceret i ROS reactive oxygen species detection kit (50101ES01), med en total impact factor på 913,72.
Effekt af ROS-produktion på makrofagpolarisering og tumorcelledrab （PMID: 35665496; PMID: 35301299; PMCID: PMC8931093PMCID: PMC9353410.
FAQ
Q1: Hvilke prøver er egnede til ROS-test?
A1: Det bruges generelt til påvisning af pattedyrsceller og er kun egnet til påvisning af reaktive oxygenarter i levende celler eller in vivo.
Q2: Er ROS-testsættet egnet til påvisning i serum eller plasma?
A2: Ikke egnet til påvisning af ROS i serum eller vævshomogenat. Frisk væv fremstillet enkeltcellesuspensioner kan prøves.
Q3: Kan planter eller bakterier påvises?
A3: Den er kun egnet til påvisning af reaktive oxygenarter i levende celler eller in vivo, fordi halveringstiden for hydroxylradikaler og superoxidradikaler af oxygen er meget kort, og den er kun egnet til påvisning af levende celler. Planter eller bakterier, som kan bruges til påvisning efter fremstilling af protoplaster, kan dette kit ikke påvise ROS in vivo.
Q4: Hvordan kan jeg undgå overdreven fluorescensbaggrund?
A4: Efter probeinkubation skal du sørge for at vaske eventuelle resterende prober væk, som ikke er kommet ind i cellen.
Q5: Kan jeg registrere mængden af ROS i normale celler?
A5: Indholdet af reaktive oxygenarter i normale celler er meget lavt, og detektionseffekten er muligvis ikke særlig god.
Q6: De negative og positive fluorescensværdier er de samme, hvad sker der?
A6: Det kan skyldes, at koncentrationen af den tilsatte probe er for stor, det anbefales at reducere probekoncentrationen med 5-7,5 μM og inkubationstiden: 15-20 min.
Q7: Fluorescensen af den positive kontrol er svag, hvad sker der?
A7: Den positive kontrol Rosup var sædvanligvis koncentreret ved 100 μM, og en signifikant stigning i reaktive oxygenarter blev observeret 30 min-4 timer efter stimulering. Effekten af den positive kontrol af reaktive oxygenarter kan variere meget mellem forskellige celler. Hvis stigningen i ROS ikke observeres inden for 30 minutter efter stimulering, kan induktionstiden forlænges, eller koncentrationen af Rosup kan øges passende.
A8: Den samme sonde, ikke opdelt, de første 5 gange er effekten meget god, denne gang er den ikke farvet, hvad er der i vejen?
Q8: 1. Celletilstanden er ikke god, hvilket resulterer i lav farvningseffektivitet; 2. Induktionstiden for positivt lægemiddel er for kort, og niveauet af reaktive oxygenarter kan øges signifikant ved at inkubere ved 37°C i mørke i 30 min-4 timer; 3. Proben er blevet frosset og optøet mere end 4 gange, farvningseffektiviteten er reduceret, og fluorescenssignalet er ustabilt (nogle gange stærkt, nogle gange svagt og let at slukke). Det anbefales, at proberne uddeles i portioner og opbevares i en -20°C fryser beskyttet mod lys for at undgå gentagne fryse-tø-cyklusser.
Q9: Hvilke instrumenter kan bruges til test?
A9: Fluorescensmikroskop, laserkonfokalmikroskop, fluorescensspektrofotometer, fluorescensmikropladelæser, flowcytometer osv. kan detektere fluorescensværdier.
Videnskabelige forskningspublikationer udgivet af kunder, der bruger dette produkt (delvis)
[1] Zhong D, Jin K, Wang R, Chen B, Zhang J, Ren C, Chen X, Lu J, Zhou M. Mikroalge-baseret hydrogel til inflammatorisk tarmsygdom og dens associerede angst og depression. Adv Mater. 2024 26. januar: e2312275. doi: 10.1002/adma.202312275. Epub forud for tryk. PMID: 38277492. HVIS: 29,4
[2] Zhang M, et al. Indkaldelse af immunceller ved lysaktiverbar dæmpende NK-afledt exosom (LASNEO) til synergetisk tumorudryddelse. Adv Sci (Weinh). Aug. 2022; 9(22): e2201135. doi: 10.1002/advs.202201135. Epub 2022 4. juni. IF: 16.806
[3] Zhang D, et al. Mikroalgebaserede orale mikrobærere til tarmmikrobiotahomeostase og tarmbeskyttelse ved cancer strålebehandling. Nat Commun. 2022 Mar 17;13(1):1413. doi: 10.1038/s41467-022-28744-4. PMID: 35301299. IF: 14.919
[4] Jiao D, et al.Biokompatible reduceret grafenoxid-stimulerede BMSC'er inducerer acceleration af knogleombygning og ortodontisk tandbevægelse gennem fremme af osteoklastogenese og angiogenese. Bioact Mater. 2022 6. feb; 15:409-425. doi: 10.1016/j.bioactmat.2022.01.021. PMID: 35386350; PMCID: PMC8958387. IF: 14.593
[5] Guo G, et al. Rumselektiv kemodynamisk terapi af CuFe5O8 nanokuber til implantat-relaterede infektioner. ACS Nano. 2020 27. oktober;14(10):13391-13405. doi: 10.1021/acsnano.0c05255. Epub 2020 22. september. PMID: 32931252. IF: 14.588
[6] Yang C, et al. Rødt fosfor-dekoreret TiO2 Nanorod-medieret fotodynamisk og fototermisk terapi for nyrecellekarcinom. Lille. Jul 2021;17(30): e2101837. doi: 10.1002/smll.202101837. Epub 2021 19. juni. PMID: 34145768. IF：13.281
[7] Xiaolu Chen, et al. Metal-phenol-netværk-indkapslede kaskade amplifikation levering nanopartikler overvinde cancer lægemiddelresistens via kombineret sult/kemodynamisk/kemoterapi. Chemical Engineering Journal. 2022 aug; 442:136221. IF: 13.273
[8] Hao Ding et al. Mesenkymale stamceller indkapslet i en reaktiv oxygenarter-fjernende og O2-genererende injicerbar hydrogel til myokardieinfarktbehandling. Chemical Engineering Journal. 2022.133511:1385-8947. IF: 13.273
[9] Yu H, et al. Tredobbelt kaskade nanokatalysator med laseraktiverbar O2-forsyning og fototermisk forbedring til effektiv katalytisk terapi mod hypoxisk tumor. Biomaterialer. 2022 Jan; 280:121308. PMID: 34896860. IF: 12.479
[10] Sun D, et al. En cyclodextrin-baseret nanoformulering opnår samtidig levering af ginsenosid Rg3 og quercetin til kemo-immunterapi ved kolorektal cancer. Acta Pharm Sin B. 2022 Jan;12(1):378-393. PMID: 35127393. IF: 11.614
[11] Xiong Y, et al. Tumorspecifikke aktiverbare biopolymer nanopartikler stabiliseret af hydroxyethylstivelse prodrug til selvforstærket kooperativ cancerterapi. Teranostik. 1. januar 2022;12(2):944-962. PMID: 34976222. IF: 11.556
[12] Gao J, et al. Mitokondrion-målrettet supramolekylær "nano-båd", der samtidigt hæmmer dobbelt energimetabolisme til tumorselektiv og synergistisk kemo-strålebehandling. Teranostik. 2022 1. januar;12(3):1286-1302. PMID: 35154487. IF: 11.556
[13] Zhong D, et al. Calciumphosphat konstruerede fotosyntetiske mikroalger til at bekæmpe hypoxisk tumor ved in-situ modulerende hypoxi og kaskade radiofototerapi. Teranostik. 2021 Jan 22;11(8):3580-3594. PMID: 33664849. IF: 11.556
[14] Sun J, et al. Cytotoksicitet af stabiliseret/størknet flyveaske ved forbrænding af kommunalt fast affald. J Hazard Mater. 2022 15. februar;424(Pt A):127369. doi: 10.1016/j.jhazmat.2021.127369. Epub 2021 29. september. PMID: 34879564. IF: 10.588
[15] Zhu C, et al. Multifunktionel termofølsom hydrogel til modulering af mikromiljøet ved slidgigt ved at polarisere makrofager og fjerne RONS. J Nanobioteknologi. 7. maj 2022;20(1):221. IF: 10.435
[16] Pan X, et al. Zinkoxid nanosfære til hydrogensulfidopfangning og ferroptose af tyktarmskræft. J Nanobioteknologi. 2021 Nov 27;19(1):392. doi: 10.1186/s12951-021-01069-y. PMID: 34838036; PMCID: PMC8626909. IF: 10.435
[17] Han J, et al. Guld-sølv nanoskaller fremmer sårheling fra lægemiddelresistent bakterieinfektion og muliggør overvågning via overfladeforstærket Raman-spredningsbilleddannelse. Biomaterialer. marts 2020; 234:119763. PMID: 31978871. IF: 10.317
[18] Cheng Q, et al. Nanoterapeutika forstyrrer cellulær redox-homeostase for stærkt forbedret fotodynamisk terapi. Biomaterialer. 2019 dec; 224:119500. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119500. Epub 2019 17. sep. PMID: 31557591. IF: 10,273
[19] Zhong D, et al. Laser-udløst aggregeret kubisk α-Fe2O3@Au nanokompositter til magnetisk resonansbilleddannelse og fototermisk/forstærket strålingssynergistisk terapi. Biomaterialer. oktober 2019; 219:119369. PMID: 31351244. IF: 10,273
[20] Sun C, et al. Selenoxideliminering manipulerer det oxidative stress for at forbedre antitumoreffektiviteten. Biomaterialer. 2019 dec; 225:119514. doi: 10.1016/j.biomaterials.2019.119514. Epub 2019 24. sep. PMID: 31569018. IF: 10,273
Anbefalede produkter
| Produktnavn | Katalognummer | Størrelse |
| 50101ES01 | 1 sæt (1000 tests) |