I processen med cellekultur er cellefordøjelse ofte påkrævet, så trypsinet, der bruges til at fordøje celler, vil være uundværligt for cellekultur, og det er også meget vigtigt, hvilket vil påvirke cellernes væksttilstand.

Trypsin kan bredt opdeles i to typer, den ene er rekombinant trypsin og den anden er ikke-rekombinant trypsin.

• Ikke-rekombinant trypsin er afledt af dyreekstraktion, med animalsk oprindelse, og er også den traditionelle anvendelse af trypsin, som er almindeligt forekommende i dyrenes fordøjelsessystem og udvindes direkte fra bugspytkirtelvævet hos kvæg eller svin.
• Rekombinant trypsin fremstilles ved hjælp af genetisk rekombinant teknologi og er ikke af animalsk oprindelse.

Produktintroduktion og anvendelse

Ikke-rekombinant trypsin (dyreafledt)

Produktegenskaber:

Ikke-rekombinant trypsin (også kendt som trypsin) er et serin proteolytisk enzym ekstraheret fra bugspytkirtlen hos kvæg, får og svin, som specifikt kan spalte carboxylterminalen af ​​positivt ladet lysin og arginin, oprenset ved multipel krystallisation og yderligere fremstillet ved kromatografi og ultrafiltreringsteknologi.

Fordi bugspytkirtelenzymer kan virke på transmembrane proteiner og proteiner i den ekstracellulære matrix, såsom cadherin, integrin osv., bruges de nu almindeligvis til at adskille væv og monolagsceller. Selvom trypsin kan hydrolysere proteolysen mellem celler til adskilte celler, er reaktionen af ​​forskellige væv eller celler til trypsin forskellig, og aktiviteten af ​​dispergerede celler er også relateret til koncentrationen af ​​trypsin, reaktionstemperatur og tid, og trypsins evne til at sprede celler er stærkest under betingelserne for pH på 7-9 og temperatur på 37°C. Tilsætningen af ​​EDTA til trypsinopløsning som et chelateringsmiddel binder calcium og magnesium til en sekstandsstruktur, som kan svække celle-celleadhæsion og forbedre trypsins erhvervelse af hydrolyserede målrettede peptidbindinger.

Den vigtigste anvendelse af trypsin i de tidlige dage i det biofarmaceutiske område var produktionen af ​​insulin, og snart blev det også brugt i andre cellekulturområder. Animalske bugspytkirtelenzymer er almindeligt anvendt i serumkultur, og sammensætningen og koncentrationen af ​​trypsin tilsat forskellige celler er forskellig.

Ansøgninger

1. produktion af insulin og inaktiverede vacciner;
2. Isolering og dyrkning af vævsceller;
3. Klinisk og kirurgisk brug;
4. Forarbejdningshjælpemidler i fødevareindustrien;

Rekombinant trypsin (fri fra animalsk oprindelse)

Produktegenskaber

Rekombinant trypsin er et enzym fremstillet ved hjælp af genteknologi, som har fordelene ved god stabilitet, høj renhed og ingen animalsk oprindelse. I produktionsprocessen af ​​moderne biofarmaceutiske produkter kan brugen af ​​råvarer, der indeholder animalsk oprindelse, bringe potentielle viruskilder, der forårsager zoonotiske sygdomme, ind i produktet, såsom BSE af kogalskab, mund- og klovesygevirus osv., for at reducere forureningskilden, syntetiseres trypsin gennem genteknologi, som løser risikoen for forurening af porcinvirus eller bovineps.

Rekombinant trypsin er for det meste rekombinant udtrykt af rekombinant E. coli eller gærsystem og oprenset ved flertrinskromatografi uden heterozymkontamination såsom chymotrypsin. Rekombinant trypsin har de samme egenskaber som naturligt ekstraheret trypsin med en aminosyresekvens homolog med svinetrypsinsekvens, som specifikt spalter carboxylgrupperne i lysin- og argininrester i polypeptidkæden.På grund af dens ikke-animalske forurening og høje renhed har den en bred vifte af applikationer inden for farmaceutisk udvikling, biokemisk forskning, proteomik og andre områder.

Det almindelige rekombinante trypsin på markedet er et rekombinant svinetrypsin udtrykt i Escherichia coli eller gær ved hjælp af DNA rekombinant teknologi, og dets aminosyresekvens er fuldstændig i overensstemmelse med svinetrypsin med samme aktivitet og specificitet som naturlig trypsin. Den er sammensat af 223 aminosyrer og indeholder 6 par disulfidbindinger. Enzymet indeholder to aktive former for trypsin: α-trypsin og β-trypsin. Dets aktivitet hæmmes af serinproteasehæmmere såsom PMSF og TLCK, metalionchelatorer såsom EDTA osv. Rekombinant trypsin anvendes i serumfri kultur, og ligesom trypsin tilsættes forskellige celler med forskellige komponenter og koncentrationer af trypsin.

Ansøgninger

1. vaccine og rekombinant insulinproduktion;
2. Forberedelse af vævsprøver til celleanalyse;
3. Immuncelleterapi;
4. Biofarmaceutisk produktion;
5. Forskning i proteinsekvens, struktur og omics

Detaljeret sammenligning af produkter

produkter	Ikke-rekombinant trypsin (dyreafledt)	Rekombinant trypsin (fri fra animalsk oprindelse)
Punkt	40123ES（phenolrød(-),EDTA(+)） 40124ES（phenolrød(-),EDTA(-)） 40126ES（phenolrød(+),EDTA(-)） 40127ES（phenolrød(+),EDTA(+)）	40512ES 20416ES（MS-SAFE）
Kilde	Taget fra bugspytkirtlen hos kvæg, svin og får	colibacillus（40512ES） Pichia pastoris（20416ES）
Sikkerhed	Kontaminering med potentielle patogener	Ingen eksogen viral kontaminering
Renhed	Mere end 90 % af 1:250 trypsinopløsningen er urenhed	Høj renhed (β-trypsin≥ 70 %, α-trypsin≤20%）
Fordøjelsescelletype	De fleste sammenhængende stærkt klæbende cellelinjer	De fleste sammenhængende stærkt klæbende cellelinjer
Chymotrypsin grænse	Ikke mere end 50 enheder chymotrypsin pr. 2500 enheder trypsin.	Ingen myrosinase og anden forurening af enzymer med urenheder
Specifik aktivitet	≥2500 USP-enheder/mg protein	≥3800 USP-enheder/mg protein
Fordøjelseseffekt	ustabilitet	Stærk fordøjelse og lav mængde enzymer
Selvskæringshastighed	Det er nemt at selvskære og producere selvskærende fragmenter, hvilket påvirker resultaterne af massespektrometrianalyse	Det er nemt at selvskære og producere selvskærende fragmenter, hvilket påvirker resultaterne af massespektrometrianalyse
Opløst væske	HBSS-opløsning med eller uden Ca2+, Mg2+	HBSS-opløsning med eller uden Ca2+ og Mg2+ (40512ES); 1 mM HCL（20416ES）
Celleoverlevelse	Normal	Normal
Om fryse-optøning er påkrævet	Ja	Ja

Ud over det mest almindelige trypsin, der bruges til cellefordøjelse, er der mange andre typer fordøjelsesenzymprodukter, som også kan bruges, såsom følger.

Om anvendelsesområdet for kollagenase

Collagenase er en peptidase-endonuklease, der specifikt kan genkende Pro-X-Gly-Pro-sekvensen og spalte peptidbindingen mellem den neutrale aminosyre (X) og glycin (Gly) i sekvensen, collagenase er den eneste protease, der kan nedbryde de naturlige kollagenfibriller med en trestrenget supercoiled struktur, og effektivt kan indebære, hydrolysere andre matrixaccharider og andre makulære proteiner. af bindevæv og epitelvæv, hvilket gør dette produkt meget velegnet til vævsfordøjelse.

1. Collagenase I., almindeligvis anvendt som et præparat af epitelceller, lever-, lunge-, fedt- og binyrevævsceller;
2. Collagenase II, som anvendes til fremstilling af vævs-afledte celler såsom hjerte, knogler, muskler, lever, skjoldbruskkirtel og brusk;
3. Collagenase III, almindeligvis anvendt til fremstilling af brystceller;
4. Collagenase IV, som almindeligvis anvendes til fremstilling af pancreas-ø-celler, eller til celleforberedelsesforsøg, hvor receptorintegritet skal opretholdes.
5. Collagenase V., velegnet til isolering af pancreas-ø-celler og bindevævsceller.

Om anvendelsesområdet for sammensat trypsin

Accutase er en cellefordøjelse, der indeholder proteolytisk og kollagenaseaktivitet, og er en perfekt erstatning for trypsin-EDTA-fordøjelser til fordøjelse af celler fra konventionelle vævskulturkar og vedhæftede dyrkningskar. Accutase er velegnet til vævsdissociation og celleisolering, da de isolerede celler bevarer intakte overfladeantigener og ikke indeholder nogen dyre- eller bakterieafledte komponenter, som kan opfylde kravene i efterfølgende eksperimenter såsom celleoverflademærkning, viral vækstanalyse, flowcytometri og bioreaktor-relaterede assays.

Anvendelsesområder for bugspytkirtelenzymerstatninger

PerfCell Tryzyme™ Express enzymprodukter er meget rene, har ringe celleskade, er milde i fordøjelsen og kan opbevares stabilt ved stuetemperatur, hvilket gør dem til et ideelt fordøjelsesenzym til forskellige cellelinjekulturer. Denne type produkt kræver ikke brug af trypsinhæmmere til inaktivering og indeholder ikke animalsk oprindelse, hvilket er mere venligt for nogle serumfrie vækstadhærente celleforsøg.

Om dispasens anvendelsesområde

Dispase II dispase II, en ikke-specifik metalloproteinase, bruges almindeligvis i cellebiologi til at isolere enkelte celler fra forskellige væv eller organer og bruges i efterfølgende cellekulturer, såsom isolering af primære celler, cellepassage osv., og kan også bruges til at eliminere celleaggregering, der opstår under suspensionscellekultur. Sammenlignet med andre proteaser, der almindeligvis anvendes i cellebiologi (f.eks. trypsin, collagenase, pronase osv.), har dette enzym følgende fordele:

1. Hurtige, effektive og skånsomme cellefordøjelsesenzymer, med lille skade på celler, og kan opretholde integriteten af ​​cellemembraner;
2. Afledt af bakterier, ingen mycoplasma eller anden animalsk viruskontamination;
3. Stærk stabilitet, ikke påvirket af temperatur, pH og serumkomponenter;
4. Det kan bruges til isolering af forskellige typer væv og celler.

Relaterede produktanbefalinger

Katalognummer	Produktnavn	Størrelse
40123ES60	PerfCel™l Trypsin-EDTA (0,25%), phenolrød	100 ml
40124ES60	PerfCell™ Trypsin-ingen EDTA (0,25%), ingen phenolrød	100 ml
40126ES60	PerfCell™ Trypsin (0,25%), phenolrød	100 ml
40127ES60	PerfCell™ Trypsin-EDTA (0,25%), phenolrød	100 ml
40101ES25	Trypsin 1:250 (pulver)	25 g
40512ES10/60	PerfCell™ rekombinant trypsin（pulver）	10 mg/100 mg
20416ES60	Rekombinant trypsin（MS-SAFE）	100 µg
40134ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 ml
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 ml
40506ES60	ACCUTASE	100 ml
40104ES60/80	Dispase II	100 mg/1 g