--Yeasen TUNEL assay kit viser smukkere fluorescens

Bindingen af ​​Fluorescein-dUTP til nicked DNA af TdT-transferase er en af ​​de mest almindelige metoder til påvisning af apoptose, f.eks. er In Situ Cell Death Kit fra Roche baseret på dette princip. TdT-transferaseaktiviteten i produktet påvirker direkte mærkningseffektiviteten. Yeasen Biologicals, baseret på enzymproduktion, stræber efter at udvikle højkvalitetsprodukter baseret på enzymer, og har lanceret tre fluorescein-mærkede (Alexa Fluor 640, Alexa Fluor 488 og FITC)-mærkede Tunel-assays for at imødekomme vores kunders høje kvalitetskrav.

I øjeblikket bruger mere end 120 forskergrupper dette produkt og har publiceret mange engelske artikler i autoritative tidsskrifter, såsom Theranostics og EMBO Molecular Medicine.

Detektionsmekanisme

I det sene stadie af apoptose producerer kromosomale DNA-dobbeltstrengede brud eller enkeltstrengede brud et stort antal klæbrige 3-OH-ender, og under påvirkning af deoxyribonukleotidterminaloverførsel (TdT) bindes fluorescein/enzymmærket dUTP til den 3-terminale ende af DNA'et, således at påvisning af DNA'et kan udføres påvisning af detektionen. fluorescens, som omtales som den deoxyribonukleotid-terminale transferase-medierede nick-end-mærkning. Denne metode kaldes Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase Mediated Nick End Labeling (TUNEL), og princippet er vist i figur 1.

Figur 1: Skematisk diagram af Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase-medieret Nick End Labeling (TUNEL)

Produktegenskaber

  • Bredt anvendelsesområde

Kan bruges til paraffinindlejrede vævssnit, frosne vævssnit, dyrkede celler og celler isoleret fra væv.

  • Høj detektionsfølsomhed

Meget lille mængde apoptotiske celler kan påvises.

  • Lav baggrundsinterferens

Højt signal-støj-forhold.

  • Observations-alsidighed

Fluorescensmikroskopi observation, flow-through detektion.

Datapræsentation

1、Muse-præadipocyt (3T3-L) Tunel-assay

Figur 2: Muse-preadipocyt 3T3-L-apoptosepåvisning. Den første række repræsenterer negativ kontrol, og den anden række repræsenterer positiv kontrol. Detektionsreagens: Kat. nr. 40306 TUNEL Apoptose Detection Kit (FITC)

2、Tunnelpåvisning af paraffinsektionsprøver

Figur 3: LY3009120 alene eller i kombination med Vemurafenib og Obatoclax forsinkede effektivt skjoldbruskkirtelkræft i en subkutan grafttumormodel. HVIS=8,8. Prøvetype: paraffinindlejret tumorvæv (taget fra nøgne mus). Detektionsreagens: Kat. nr. 40307 TUNEL Apoptose Detection Kit (Alexa Fluor 488).

3、Tunneldetektion af cellegennemgang

Figur 4: Effekt af zinksulfat på apoptose af endotelceller i forskellige undergrupper. Prøvetype: HUVEC (humane umbilical vene endothelial celler). Detektionsreagens: Kat. nr. 40308 TUNEL Apoptose Detection Kit (Alexa Fluor 640)

4、Flowcytometri for at detektere apoptose

Figur 5: PA-behandling kan effektivt reducere forekomsten af ​​apoptose under omprogrammering. HVIS=3,7. Prøvetype: iPS-celler. Detektionsreagens: Kat. nr. 40307 TUNEL Apoptose Detection Kit (Alexa Fluor 488).

Litteraturcitat

[1] Li C, Wang Q, Gu X, et al. Porøs Se@ SiO2 nanokomposit fremmer migration og osteogen differentiering af rotteknoglemarvs mesenkymale stamceller for at fremskynde heling af knoglebrud i en rottemodel[J].International Journal of Nanomedicine, 2019, 14: 3845. (IF 4,76)

[2] Miao T, Qian L, Yu F, et al. Beskyttende virkninger af hydroxysafflor gul og på højoxideret lavdensitetslipoprotein-induceret humane koronararterie-endotelcelleskader[J]. Udvikling, 2019, 22: 581-589.(IF 6.208 )

[3] Wen Y, Liu G, Zhang Y, et al. MicroRNA-205 er forbundet med diabetes mellitus-induceret erektil dysfunktion via nedregulering af androgenreceptoren [J]. Journal of cellular and molecular medicine, 2019, 23(5): 3257-3270.(IF 4,41)

[4] Xu T, Ding W, Ao X, et al. ARC regulerer programmeret nekrose og myokardieiskæmi/reperfusionsskade gennem inhibering af mPTP-åbning[J]. Redox Biology, 2019, 20: 414-426.(IF 8,37)

[5] Li P, Hao L, Guo YY, et al. Chloroquin hæmmer autofagi og forværrer mitokondriel dysfunktion og apoptose i hypoxiske rotteneuroner [J]. Life Sciences, 2018, 202: 70-77.(HVIS 3,40)

[6] Chen H, Guan B, Chen X, et al. Baicalin dæmper blod-hjernebarriereafbrydelse og hæmoragisk transformation og forbedrer det neurologiske resultat hos iskæmiske slagtilfælde-rotter med forsinket t-PA-behandling: involvering af ONOO--MMP-9-vejen [J]. Translational Stroke Research, 2018, 9(5): 515-529.(HVIS 4,87)

[7] Liu Q, Qian Y, Li P, et al. De kombinerede terapeutiske virkninger af 131jod-mærkede multifunktionelle kobbersulfid-fyldte mikrosfærer til behandling af brystkræft[J]. Acta Pharmaceutica Sinica B, 2018, 8(3): 371-380.(IF 6,88)

[8] Han YQ, Ming SL, Wu HT, et al. Myostatin knockout inducerer apoptose i humane livmoderhalskræftceller via forhøjet generering af reaktive oxygenarter[J]. Redox Biology, 2018, 19: 412-428.(HVIS 8,37)
[9] Wang S, Xu Y, Weng Y, et al. Astilbin forbedrer cisplatin-induceret nefrotoksicitet ved at reducere oxidativt stress og inflammation[J]. Food and Chemical Toxicology, 2018, 114: 227-236.(HVIS 3,78)

[10] Liu L, Pang XL, Shang WJ, et al. Overudtrykt microRNA-181a reducerer glomerulær sklerose og renal tubulær epitelskade hos rotter med kronisk nyresygdom via nedregulering af TLR/NF-KB-vejen ved binding til CRY1[J]. Molecular Medicine, 2018, 24(1): 49.(HVIS 3,46)

[11] Li G, Yin Q, Ji H, et al. En undersøgelse af screening og antitumoreffekt af CD55-specifikt ligandpeptid i livmoderhalskræftceller[J]. Lægemiddeldesign, udvikling og terapi, 2018, 12: 3899.(HVIS 3,27)

[12] Qian Y, Wang Y, Jia F, et al. Tumor-mikromiljøkontrollerede nanomiceller med AIE-egenskaber til at booste cancerterapi og apoptoseovervågning[J]. Biomaterialer, 2019, 188: 96-106.(HVIS 9,85)

[13] Li Z, Li D, Li Q, et al. In situ lav-immunogen albumin-konjugerende-corona-styrende nanopartikler til tumor-målrettet kemoterapi [J]. Biomaterials Science, 2018, 6(10): 2681-2693.(IF 5,31)

[14] Liu Y, Zhi X, Hou W, et al. Gd3+-ion-inducerede carbon-dots selvsamlende aggregater fyldt med en fotosensibilisator til forbedret fluorescens/MRI dobbelt billeddannelse og antitumorterapi[J]. Nanoskala, 2018, 10(40): 19052-19063.(HVIS 7,17)
[15] Liu Q, Qian Y, Li P, et al. 131 I-mærkede kobbersulfid-ladede mikrosfærer til behandling af levertumorer via hepatisk arterie-embolisering[J]. Theranostics, 2018, 8(3): 785.(HVIS 8.12)

Ofte stillede spørgsmål

Q: Udseende af uspecifik fluorescerende mærkning?

1) Selve vævet/cellerne har høje niveauer af nuklease- eller polymeraseaktivitet, hvilket let kan føre til fremkomsten af ​​ikke-specifik fluorescerende mærkning, såsom glatte muskelceller. Løsningen er at fiksere cellerne eller vævene umiddelbart efter at have taget dem og at fiksere dem tilstrækkeligt til at forhindre disse enzymer i at forårsage falske positiver.

2) Brugen af ​​uhensigtsmæssige fikseringsmidler, såsom nogle sure fikseringsmidler, fører til falske positiver. Frisklavet 4% neutralt paraformaldehydfikseringsmiddel anbefales.

3) Ikke-specifik fluorescens kan også forekomme, når reaktionstiden for TUNEL-analysen er for lang, og celle- eller vævsoverfladen ikke kan holdes våd. Sørg for at kontrollere reaktionstiden, og sørg for, at TUNEL-analysereaktionsopløsningen dækker prøvebrønden.

Q: Er fluorescensbaggrunden meget høj?

1) Celler, der deler sig og prolifererer i høj hastighed, med høje niveauer af transskription, viser nogle gange også DNA-brud i kernen.

2) Langvarig eksponering for excitationslys fører til falske positiver.

Q: Lav mærkningseffektivitet?

1) Fiksering med ethanol eller methanol fører til lav mærkningseffektivitet.

2) Fikseringstiden er for lang, hvilket resulterer i en for høj grad af tværbinding. Det er tilrådeligt at reducere fikseringstiden.

3) Vævssektionen er for tyk, hvilket gør fikseringseffekten utilfredsstillende, og det er bedre at kontrollere inden for 10 μm.

(4) Fluorescensslukning: Fluorescens vil blive alvorligt slukket i 10 minutter med normalt lys. Løsningen er at undgå let drift.

Produktdetaljer

Produktnavn

Varenr.

Specifikation

Annexin V-FITC/7-AAD Apoptose Detection Kit

40311ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-FITC/PI Apoptose Detection Kit

40302ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-PE/7-AAD Apoptose Detection Kit

40310ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-EGFP/PI Apoptose Detection Kit

40303ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD Apoptose Detection Kit

40313ES60

100T

Annexin V-YSFluor™ 488/PI Apoptose Detection Kit

40305ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-YSFluor™ 647/PI Apoptose Detection Kit

40304ES20/50/60

20T/50T/100T

Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD Apoptose Detection Kit

40312ES20/50/60

20T/50T/100T

TUNEL Apoptose Detection Kit (FITC)

40306ES20/50/60

20T/50T/100T

TUNEL Apoptose Detection Kit (YSFluor™ 488)

40307ES20/50/60

20T/50T/100T

TUNEL Apoptose Detection Kit (YSFluor™ 640)

40308ES20/50/60

20T/50T/100T

Forespørgsel