Mitokondrier
Mitokondrier er cellens energifabrikker, hovedstedet for intracellulær oxidativ phosphorylering og syntese af adenosintrifosfat (ATP), som giver energi til cellulære aktiviteter. 95% af den energi, der kræves til cellulære livsaktiviteter, kommer fra mitokondrier. Ud over at levere energi til celler, er mitokondrier også involveret i processer som celledifferentiering, cellulær informationsoverførsel og apoptose og besidder evnen til at regulere cellevækst og cellecyklus. Derfor er assays såsom mitokondrier og mitokondrielle membraner en væsentlig del af studiet af celler.
Definition og betydning af mitokondrielt membranpotentiale
Mitokondriel membranpotentiale er resultatet af ladningsfordeling på begge sider af den indre mitokondrielle membran og er en nøglefaktor i opretholdelsen af normal mitokondriel funktion. I mitokondrier genererer elektrontransportkæden en protongradient gennem redoxreaktioner, der driver ATP-syntese. Stabiliteten af mitokondriemembranpotentialet er direkte relateret til cellens energiforsyning og dens overlevelsesstatus. Et stort antal undersøgelser har vist, at mitokondrier er tæt beslægtet med apoptose, hvor faldet i mitokondrielt transmembranpotentiale anses for at være en af de tidligste begivenheder i den apoptotiske kaskadereaktionsproces. Det forekommer før fremkomsten af apoptotiske træk (kromatinkondensation, DNA-brud) i kernen, og når mitokondrielle transmembranpotentiale kollapser, er apoptose irreversibel. Faldet i mitokondrielt membranpotentiale er således en kendetegnende begivenhed i de tidlige stadier af apoptose.
Arbejdsprincip for JC-1 sonde
JC-1 er et kationisk lipidfluorescerende farvestof, som kan bruges som en indikator for mitokondrielt transmembranpotentiale. JC-1 findes i to tilstande, monomer og multimer. Ved lav koncentration eksisterer den som en monomer, og grøn fluorescens kan påvises, og når den påvises ved gennemstrømningsanalyse, er den normalt i FL-1-kanalen (samme kanal som FITC). Ved høj koncentration eksisterer den som en multimer, og rødt lys kan detekteres, og når det påvises ved gennemstrømningsassay, er det sædvanligvis i FL-2-kanalen (samme kanal som PE). JC-1 kan også bruges som et kationisk lipidfluorescerende farvestof og kan bruges som en mitokondriel transmembranpotentialeindikator. og PE samme kanal). På grund af ændringen af JC-1-koncentrationen dannes en reversibel overgangsproces mellem monomer og multimer.
I normale celler, når membranpotentialet er normalt, går JC-1 ind i mitokondrierne gennem mitokondriemembranens polaritet og danner røde fluorescerende multimerer på grund af stigningen i koncentrationen, mens det i apoptotiske celler depolariseres mitokondrielle transmembranpotentiale, og JC-1 frigives fra mitokondrierne til den grønne koncentration og reverseres til den grønne monomere form. Derfor kan ændringer i mitokondriemembranpotentialet detekteres ved at detektere grøn og rød fluorescens.
Bemærk: Billeder citeret fra internettet
JC-10 sonde
JC-10, et derivat af JC-1, er en potentialafhængig probe, der bruges til at bestemme mitokondrielt transmembranpotentiale ved flowcytometri, fluorescensmikroskopi og mikrotiterpladebaserede fluorescensassays. I raske celler akkumuleres JC-10 selektivt i mitokondrier og genererer røde aggregater, der udviser et bredt excitationsspektrum og udsender store værdier ved 590 nm.I apoptotiske og nekrotiske celler med lavt mitokondrielt transmembranpotentiale diffunderer JC-10 imidlertid ud af mitokondrierne og producerer JC-10-monomerer, hvilket resulterer i et skift mod grøn emission (525 nm). Det er med succes blevet brugt som en indikator for mitokondrielt transmembranpotentiale i en række prøvetyper, herunder myocytter, neuroner, intakt væv og isolerede mitokondrier.
JC-10--Erstatning for JC-1
- Stabilitet: JC-10 har mindre detektionsbias, fordi det har højere opløselighed og højere følsomhed i vandige medier.
- Forbedret signal: JC-10 har et højere signal-til-baggrundsforhold end JC-1.
- Forbedret følsomhed: JC-10 er i stand til at detektere subtile ændringer i mitokondrielt transmembranpotentialetab bedre end JC-1 i alle testede cellelinjer.
- Bred anvendelse: JC-10 kan bruges i primære rottehepatocytter.
- Praktisk: JC-10 er kompatibel med fluorescerende enzymmarkører, cellebilleder og flowcytometre.
Bemærkninger:. Mitokondrielle membranpotentiale ændringer induceret af komedoner blev målt i Jurkat-celler med JC-10 og JC-1. Efter behandling af Jurkat-celler med camptothecin (10 mM) i 4 timer, blev JC-1- og JC-10-farveopsamplingsopløsninger tilsat til brøndene og inkuberet i 30 minutter. Fluorescensintensiteten af de aggregerede og monomere former af JC-1 og JC-10 blev målt ved Ex/Em = 490/525 nm og 490/590 nm under anvendelse af en NOVOstar-enzymmærker (BMG Labtech).
Analyse af resultater
Ved detektering af JC-1-monomer kan excitationslyset indstilles til 490 nm, og emissionslyset kan indstilles til 530 nm; ved detektering af JC-1-polymer kan excitationslyset indstilles til 525 nm, og emissionslyset kan indstilles til 590 nm. Apoptose blev detekteret ved flowcytometri, grøn fluorescens blev detekteret gennem FL-1-kanalen, og rød fluorescens blev detekteret gennem FL-2-kanalen. FL-1+, FL-2+ er normale celler og FL-1+, FL-2- er apoptotiske celler.
Bemærk: Billedkilden er China Streamline Associations webstedsfora
Kør uden tvivl
Sp.: JC-1 Mitokondriel membranpotential fluorescerende sonde, kan dette produkt bruges til at farve vævssnit?
A: Fordøj det levende væv til individuelle celler for at sikre cellernes aktivitet før farvning.
Spørgsmål: Kan jeg fikse cellerne før farvning med JC-1?
A: Nej. JC-1 farvestof akkumuleres i mitokondrier på en potentialafhængig måde og kan bruges til at detektere celler, væv eller oprensede mitokondrielle membranpotentialer. Immobilisering forstyrrer det elektriske potentiale, hvilket resulterer i sondens manglende evne til at akkumulere på mitokondrierne og tab af specificitet.
Q: Der er aggregerede partikler i JC-1 arbejdsopløsningen, og jeg planlægger at fjerne dem ved centrifugering før farvning, er der nogen anbefalede parametre for centrifugering?
A: JC-1 arbejdsopløsningen kan centrifugeres ved 13.000 g i ca. 1-2 minutter.
Bestillingsinformation
| Produktnavn | Varenr. | Specifikation |
| 40705ES03/08 | 1 mg/5 mg | |
| 40707ES03/08 | 1 mg/5 mg |