Mycoplasma påvisning, forebyggelse og fjernelse - alt i ét trin!

Mycoplasma

Mycoplasma, også kendt som mycoplasma, er den mindste og enkleste prokaryot, der er opdaget til dato, med en diameter på 0,1 til 0,3 μm. Det kan passere gennem filtre og udviser høj pleomorfisme, der optræder i forskellige former, såsom sfærisk, stavformet, filamentøs og forgrenet. I laboratorier og biofarmaceutisk produktion er cellekulturer tilbøjelige til mycoplasma-kontamination. Ifølge litteraturen er forekomsten af ​​mycoplasma-kontamination i lagrede cellelinjer ca. 15%-35%, og i den biofarmaceutiske industri varierer den fra 0,44%-6,70%. ^[1].

Figur 1: Morfologi af Mycoplasma

Virkningen af ​​Mycoplasma-kontamination

Bakterie- og svampekontaminering er relativt lette at opdage, forebygge og fjerne, men mycoplasma-kontamination er svær at bemærke. Selv ved væksttætheder så høje som 10^7-10^9 CFU/ml er der muligvis ingen tydelige tegn på forurening (såsom turbiditet eller pH-ændringer). Mycoplasma-kontamination kan føre til forskellige ændringer i celler (se figur 2).

Figur 2: Ændringer i celletilstande efter mycoplasma-kontamination

Anvendelsesscenarier til Mycoplasma-detektion

Typiske kilder til mycoplasma-kontamination

• Krydskontaminering mellem celler;
• Forurening af arbejdsmiljøet eller eksperimentelt udstyr;
• Dårlig aseptisk teknik af forsøgslederen;
• Kontaminering af dyrkningsmedier eller andre reagenser;
• Kontaminering af det oprindelige væv eller organ, der anvendes til celleforberedelse.

Hvad skal man gøre, når cellekulturer støder på mycoplasma-kontamination

Figur 3: Total opløsning til mycoplasma-kontamination

Tre-i-en-løsning til mycoplasma-kontamination i celler

1. Mycoplasma-påvisning

Et-trins isotermisk mycoplasma-detektion:

Yeasens et-trins isotermiske mycoplasma-detektionsreagens bruger unik isotermisk amplifikationsteknologi, der tilbyder stærkere farvediskrimination – fra blå-lilla (negativ) til himmelblå (positiv) – hvilket gør det nemmere for visuel identifikation. Det inkluderer anti-kontamineringskomponenter for at eliminere falske positiver.

Figur 4: Operationsproces for One-Step Mycoplasma Detektion

PCR-baseret mycoplasma-detektion:

Yeasens PCR-mycoplasma-detektionsmetode adskiller sig fra konventionel et-trins PCR ved at bruge tre par primere i stedet for én, målrettet mod de 16S- og 23S-konserverede områder af mycoplasma til indlejret PCR-amplifikation. Dette forbedrer følsomheden markant, mens det reducerer ikke-specificitet og detekterer så lavt som en enkelt kopi af mycoplasma.

Figur 5: Gelelektroforesebillede af PCR-amplifikation af prøver med forskellige mycoplasmakoncentrationer

Figur 6: Gelelektroforesebillede af PCR-amplifikation af prøver med forskellige mycoplasmakoncentrationer

Tabel 1: Typer af mycoplasma, der kan påvises af Yeasens et-trins isotermiske mycoplasma-detektionsreagens

Bemærk: Det blå afsnit angiver mycoplasmatyper, der kan påvises ved både et-trins isotermisk detektion og PCR-metoder.

2. MycAway Mycoplasma Elimination Reagent (1000×)

MycAway Mycoplasma Elimination Reagent (1000×) er en blandet formulering, der effektivt eliminerer mycoplasma ved at hæmme DNA og essentiel proteinsyntese, der er nødvendig for mycoplasma-vækst, uden at skade cellerne. Det redder maksimalt dine celler og reducerer tab på grund af mycoplasma-kontamination.

Figur 7: Demonstration af celleelimineringseffekt

Funktioner af Mycoplasma Elimination Reagens:

• Lav toksicitet: Minimal cytotoksicitet, påvirker ikke efterfølgende celleforsøg såsom cellelevedygtighedstestning og transfektion;
• Høj stabilitet: Kan opbevares ved -20°C i længere perioder, mens effektiviteten bevares;
• Nem at bruge: Tilføj blot produktet til det mycoplasma-kontaminerede dyrkningsmedium og inkuber;
• Hurtigt virkende: Synlige resultater på så lidt som 3 dage;
• Bredt spektrum: Effektiv mod de fleste laboratoriemycoplasmatyper.

Figur 8: Cytotoksicitetstestdiagram af mycoplasma-elimineringsreagens

3. Forebyggelse af mycoplasma

Produkt Information

kategori	Produktnavn	Kat nr.	Specifikationer
Opdagelse	MycAway™ -Color One-Step Mycoplasma Detection Kit Hot	40612ES25/60	25/100 T
	MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit Hot	40618ES25/60	25/100 T
	GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit	40601ES10/20	10/20 analyser
Fjernelse	MycAway™ Spray (klar til brug)	40605ES02/03	1/2×500 ml
	MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent	40607ES03/08	1/5×1 ml
Forebyggelse	MycAway™ Profylaktisk (2000×)-Mycoplasma-forebyggelsesreagens	40608ES03/08	1/5×1 ml
	MycGuard™ -1-løsning (100×)	40609ES60	100 ml
	MycGuard™-2-løsning (500×)	40610ES60	100 ml