Isotermisk nukleinsyreamplifikationsteknologi kan opdeles i mange kategorier efter forskellige amplifikationsprincipper. På nuværende tidspunkt er den mest almindelige og mest anvendte loop-medierede isotermiske amplifikationsteknologi (LAMP) udviklet af den japanske lærde Notomi et al. i 2000. Bst DNA-polymerase er kerneenzymet i isotermisk amplifikationsteknologi. Hvad er funktionen og ydeevnen af ​​Bst DNA polymerase i LAMP?

1. Hvordan spiller Bst DNA-polymerase en rolle i LAMP?
2. Hvad er Lyofiliseret Bst Plus DNA-polymerase?
3. Hvad er produktets egenskab af Lyofiliseret Bst Plus DNA Polymerase (14405ES)?
4. Hvad er produktets ydeevne af Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase (14405ES)?
5. Relaterede produkter
6. Vedrørende læsning

1. Hvordan spiller Bst DNA-polymerase en rolle i LAMP?

Den tekniske egenskab ved LAMP er at designe fire primere til seks regioner af målgenet og udføre amplifikationsreaktionen ved hjælp af BST DNA-polymerase under konstant temperaturforhold på 60~65 ℃, hvilket opnår 109-1010 gange amplifikation inden for 15-60 minutter. Bst DNA-polymerase har stærk termisk stabilitet, strengforskydningsaktivitet og polymeraseaktivitet. Det kan være en hurtig, effektiv og specifik amplifikationsskabelon under konstante temperaturforhold uden PCR termisk denatureringsamplifikationscyklus og fuldføre hele LAMP-eksperimentet inden for 1 time.

2. Hvad er lyofiliseret Bst Plus DNA-polymerase?

Lyofiliseret Bst Plus DNA-polymerase bruges til at fryse glycerolfri Bst Plus DNA-polymerase, som løser problemet med glycerolfri Bst-enzym-ustabilitet. Samtidig har dette produkt en stærk 5 '- 3' DNA-polymeraseaktivitet, strengforskydningsaktivitet og dUTP-tolerance, som er mere egnet til anti-forurenings isotermisk amplifikationsreaktion, Det er praktisk for kunder at bruge i produktionen af ​​frysetørrede produkter.

Figur 1: 14405ES-lyofiliseret Bst Plus DNA-polymerase (60 U/μL, Glycerol-fri)

3. Hvad er produktegenskaben ved Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase (14405ES)?

• Det glycerolfrie enzym, velegnet til lyofilisering
• Transport ved normal temperatur for at reducere omkostningerne
• Stærk trådforskydningsaktivitet, følsom og stabil
• Hurtig genopløsning og bekvem betjening

4. Hvad er produktets ydeevne af Lyophilized Bst Plus DNA Polymerase (14405ES)?

4.1 Frysetørret pulverform: sammenlignet med T0-momentet forbliver pulverformen uændret efter 45 ℃ - 15 DAGE frysetørring.

Figur 2. Frysetørret pulverform

4.2 stabilitet

Ydeevnen af ​​frysetørret pulver efter termisk acceleration kan stadig være i overensstemmelse med flydende reagens, og frysetørret pulver (14405ES) er
universel og kan bruges til fluorescerende farvemetoden og pH-indikatormetoden.

4.2.1 Fluorescerende farvestofmetode——stabilitet

I RT-LAMP fluorescerende farveamplifikationssystemet er ydeevnen af ​​glycerolfrit Bst frysetørret pulver efter T0, 45 ℃-7 dage og 45 ℃ -15 dages termisk acceleration i overensstemmelse med den flydende version af glycerolfrit Bst-enzym, og NTC topper ikke.

Eksperimentelle forhold:

Bemærk: Kontrolgruppen er en flydende version uden glycerol Bst-enzym af samme koncentration.

Figur 3. Stabilitetsresultater

4.2.2 Fluorescerende farvestofmetode—— Ydeevne af Bst-enzym efter frysetørring af RT-LAMP-systemet

I RT-LAMP fluorescerende farveamplifikationssystemet var produktets ydeevne af glycerolfrit Bst frysetørret pulver frysetørret i RT-LAMP systemet efter 45 ℃ - 15 dage i overensstemmelse med den flydende version af glycerolfrit Bst enzym. Påvisningshastigheden af ​​produktet i kontrolgruppen og RT-LAMP-systemet efter frysetørret var henholdsvis 100 % (16/16) og 94 % (15/16).

Eksperimentelle forhold:

Bemærk: Kontrolgruppen er en flydende version uden glycerol Bst-enzym af samme koncentration.

Figur 4. Ydeevne af Bst-enzym efter frysetørring af RT-LAMP-system

4.2.3 PH-indikatormetode ——Stabilitet

I RT-LAMP pH-indikatoramplifikationssystemet, sammenlignet med T0 tid, var påvisningshastigheden for Bst frysetørret pulver 88 % (7/8) efter 45 ℃ - 15 dages termisk acceleration.

Eksperimentelle forhold:

Bemærk: Kontrolgruppen er en flydende version uden glycerol Bst-enzym af samme koncentration.

Figur 5. Stabilitetsresultater

4.2.4 PH-indikatormetode——Genfrysningsstabilitet

I RT-LAMP pH-indikator-amplifikationssystemet er ydeevnen stabil efter 45 ℃ - 7 dages genfrysning. Kontrolgruppen er flydende Bst-enzym. Sammenlignet med kontrolgruppen er detektionshastigheden for 14405ES efter termisk acceleration 94% (30/32).

Eksperimentelle forhold:

Bemærk: Kontrolgruppen er en flydende version uden glycerol Bst-enzym af samme koncentration.

Figur 6. Resultater for genfrysningsstabilitet

4.3 Specificitet

I RT-LAMP fluorescerende farvestofamplifikationssystemet toppede 48-brønds NTC ikke, og specificiteten af ​​14405ES var 100%.

Eksperimentelle forhold:

Bemærk: Kontrolgruppen er en flydende version uden glycerol Bst-enzym af samme koncentration.

Figur 7. Specifikke resultater

5. Relaterede produkter

De relaterede produkter, som Yeasen kan levere, er vist i tabel 1.

Tabel 1.Relaterede produkter

6. Vedrørende læsning

Valg af de rigtige nøgleenzymråmaterialer for at gøre LAMPE /RT-LAMP mere følsom og hurtigere!

Retningslinjen for udvælgelse af omvendt transkriptase

YEASEN UDG: "antibegroningseksperten" i PCR-reaktioner