Afrikansk svinepest (ASF) er en akut, alvorlig og meget smitsom infektionssygdom forårsaget af afrikansk svinepestvirus (ASFV), der inficerer tamsvin eller vildsvin. Dens sygelighed og dødelighed kan nå op på 100 %, hvilket bringer den globale svineindustri i alvorlig fare og forårsager uoverskuelige økonomiske tab. Verdensorganisationen for Dyresundhed (OIE) angiver det som en indberetningspligtig dyresygdom.

På nuværende tidspunkt findes der ingen vaccine eller effektiv behandling mod afrikansk svinepest. Hurtig og præcis diagnosticering af afrikansk svinepest gennem laboratoriediagnostik er afgørende for at forhindre spredning af sygdommen. qPCR som det vigtigste værktøj til rutinediagnosticering af ASF anbefales af OIE.

Yeasen er en producent med rig erfaring inden for IVD-råmaterialer R&D. Over for afrikansk svinepest reagerer yeasen positivt og samarbejder med kunder om at udvikle tre hele procesløsninger fra ekstraktion til påvisning af afrikansk svinepestvirus. Så hvad er tre løsninger? Og hvad er anvendelserne af disse løsninger? Fortsætter med at læse...

Figur 1. Opløsninger til påvisning af Yeasen afrikansk svinepest

Løsning I: TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(forespørgsel）

Produktegenskaber

👍UDG anti-forureningssystem, der effektivt forhindrer risikoen for aerosolkontamination

👍Langtidsstabilitet af forblandet PCR-opløsning (masterblanding + primere + prober) ved stuetemperatur, hvilket i høj grad forenkler detektionsvanskeligheden

👍Høj forstærkningseffektivitet og god repeterbarhed

👍Velegnet til multi-platform og multi-system

Case Show

👉Langtidsstabilitet af færdigblandet PCR-opløsning
Cat#13171 blev brugt til at konfigurere den forblandede PCR-opløsning, der kan placeres ved 37°C i 7 dage og gentagen frysning og optøning 15 gange i amplifikationen af ​​ASF-plasmidsystemet. Resultaterne viste, at Ct-værdien og følsomheden af ​​PCR-opløsningen ikke adskiller sig signifikant efter at have anbragt 7 dage ved 37 ℃, og Ct-værdien ændrede sig ikke signifikant efter gentagen frysning og optøning 15 gange.

Figur 2. Cat#13171 TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (UDG plus)(Spørge) anvendt i forblandet PCR-opløsning med langtidsstabilitet i amplifikation af ASF-plasmidsystem. 2A-Ct-værdi ved 37℃ i 0 dage og 7 dage 2B-Sensitivitet ved 37℃ i 0 dage og 7 dage 2C-Stabilitet efter frysning-optøning 15 gange

👉Stabile og reproducerbare reagenser
Fire forskellige batches af Cat#13171 blev udvalgt til at gentage ASFV-plasmidsystemamplifikationsforsøget 20 gange. Der var ingen signifikante forskelle i Ct-værdier med en CV på mindre end 1 %.

Figur 3.Gentagelighedstest af Yeasen Cat#13171

👉Multi-platform multi-system anvendelig
Yeasen Cat#13171 blev brugt til at amplificere afrikansk svinepest ASFV/ACT dobbelte plasmider på henholdsvis Bio-Rad CFX96, ABI Q5 og Slan platforme. Det kan ses, at Yeasen Cat#13171 er velegnet til forskellige typer instrumenter, og dataene er pålidelige og stabile.

Figur 4. Bio-Rad CFX96 Real-Time PCR System

Figur 5. ABI Q5 Real-Time PCR System

Figur 6. Slan Real-Time PCR System

Løsning II:Universal TaqMan multiplex qPCR master mix

Yeasens Universal TaqMan multiplex qPCR-mastermix (Cat#11211) er dybt optimeret til effektiv amplifikation af lavkoncentrationsskabeloner ved hjælp af antistofmodificeret Hot-Start Taq DNA-polymerase og matchet multipleksbuffer. Dette produkt understøtter op til 4-plex PCR-reaktioner i enkeltrør og er ideelt til genotypebestemmelse og multipleks qPCR-analyse.

Produktegenskaber

👍Stærk tolerance over for blodurenheder, kan bruges med Yeasen nukleinsyreekstraktionsreagens Cat#13720 Nucleic Acid Release Reagent V2, ideel til direkte qPCR
👍Ultrahøj følsomhed over for 3 kopier/reaktion, forbedrer registreringsnøjagtigheden betydeligt
👍Langtidsstabilitet af forblandet PCR-opløsning (mastermix + primere + prober) ved stuetemperatur, hvilket i høj grad forenkler detektionsvanskeligheden

Case Show

👉Stærk tolerance over for blodurenheder
Sammenlignet med lignende produkter fra andre mærker har Yeasen Cat#11211 en højere tolerance over for inhibitorer i blodprøver. Resultaterne viste, at Yeasen Cat#11211 har en høj tolerance over for EDTA og natriumcitrat og kan modstå 0,5 % fuldblod.

Figur 7. Cat#11211 Universal TaqMan multiplex qPCR master mix og mastermix fra forskellige mærker bruges til ASF qPCR-opløsninger suppleret med henholdsvis 3 mM EDTA (3A), 6 mM natriumcitrat (3B), 0,5 % blod (3C).

👉Ultrahøj følsomhed over for 3 kopier/reaktion

Amplifikationen af ​​ASFV-plasmidet med 20 replikater blev udført baseret på produkterne fra forskellige mærker. Resultaterne af forsøg viser, at detektionshastigheden af ​​Yeasen-produkter er højere.

Figur 8. Sammenligning af detektionsrater blandt lignende produkter fra forskellige mærker (3 kopier i endeligt system)

👉Langtidsstabilitet, stabil i 7 dage ved stuetemperatur

PCR-opløsningen af ​​ASFV/ACT dobbelt plasmidsystem kan opretholde stabil ydeevne efter 7 dage ved 4℃, 25℃ og 37℃. Det kan ses, at Ct-værdien og fluorescensværdien ikke ændrede sig signifikant.

Figur 9. Stabilitet af PCR-opløsning

Løsning III: Isoterm forstærkning

Yeasens produkter understøtter den isotermiske forstærkningsteknologi, der hjælper med at udføre ASF-detektion hurtigere og mere effektivt. Kat # 14402 Hieff™ Bst Plus DNA-polymerase (40 U/μL) er afledt af termofil Geobacillus sp DNA-polymerase I, der mangler 5'-3' exonukleaseaktivitet. Dette produkt har stærkere 5'-3' DNA-polymeraseaktivitet, strengforskydningsaktivitet og dUTP-tolerance, hvilket er mere velegnet til anti-forurenings isotermiske amplifikationsreaktioner, såsom LAMP, CPA osv.

Produktegenskaber

👍Høj forstærkningseffektivitet

👍Højtydende amplifikation

👍dUTP tolerance, kan bruges i kombination med Cat#10303 Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)(Spørge), varmelabil, 1 U/μL for at forhindre risikoen for aerosolkontamination

Case Show

👉Overlegent alternativ til importerede mærke N*-produkter

Amplifikationsprocessen blev udført under anvendelse af Bst DNA-polymerase fra henholdsvis Yeasen og N* Company. Der var ingen signifikant forskel i Ct-værdi og fluorescensintensitet mellem forskellige mærker.

Figur 10. Amplifikationskurver af forskellige mærker

Bestilling af produkter