Aerosolkontaminering i operationsmiljøet som den mest almindelige årsag til falske positiver i PCR-resultater: Den banebrydende opdagelse af Uracil DNA Glycosylase (UDG) af den amerikanske videnskabsmand Lindahl i E. coli og Bacillus subtilis, og etableringen af et PCR-kontamineringsforebyggelsessystem gennem brugen af UDG Enzy.
De kommercielt tilgængelige UDG-enzymer består primært af to typer: de almindelige UDG-enzymer afledt af Escherichia coli og Bacillus subtilis, og de termolabile UDG-enzymer, der stammer fra psykrofile marine bakterier. De almindelige UDG-enzymer udviser større varmeresistens og bevarer en lille mængde uracil-DNA-glycosylaseaktivitet selv efter behandling ved 95°C i 10 minutter, hvilket kan føre til nedbrydning af målamplifikationsprodukter indeholdende dU. På grund af brugen af manipulerede bakteriestammer (såsom E. coli) til rekombinant ekspression af molekylære enzymer er der desuden en vis mængde resterende værtsgenomisk DNA i disse enzymer. Sammen med påvirkningerne fra fremstillingsmiljøet og menneskelige kilder er molekylære enzymprodukter meget modtagelige for DNA-kontamination. Under påvisningen af patogener kan kontaminerende DNA enten maskere målnukleinsyrer med lav overflod eller blive påvist ved siden af dem og derved påvirke fortolkningen af resultaterne.
Yeasen UCF.ME Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), varmelabil
Beskrivelse
UCF.ME Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), varmelabil, 1 U/μL (kat#14466ES) afledt af psykrofile marine bakterier, er det et ultra-lavt resterende varmelabilt UDG-enzym kendt som UCF.ME. Brugen af dette produkt kan forhindre den resterende aktivitet af konventionelle UDG-enzymer efter inaktivering i at nedbryde dU-holdige amplifikationsprodukter ved stuetemperatur. Det forhindrer også baggrundsbakterier, der er til stede i molekylære enzymer, i at forårsage falske positiver i PCR-resultater. Derfor er introduktionen af UCF.ME® ultra-lav resterende termolabilt UDG-enzym afgørende for nøjagtigt at identificere infektiøse patogener og hjælpe med den kliniske diagnose af infektioner og infektionssygdomme.
Produktfordele
- Ultralav rest af UCF.ME—E. coli genomisk DNA-rest <0,1 kopier/U;
- Lav nukleaserest—Ingen resterende exonuklease, nicking-enzym eller RNase;
- Stærk fordøjelsesevne - 0,05 U/T kan fordøje 105 kopier/T dU-DNA-produkter;
- God termolabilitet – Fuldstændig inaktivering under alle forhold på 50°C i 10 minutter, 55°C i 5 minutter eller 95°C i 5 minutter;
- Kompatibel med RT-qPCR-reaktionssystemer - Ingen indvirkning på detektionssystemet selv ved høje inputniveauer (2U/20μL reaktionssystem).
（1）Protein renhed≥95%
Figur 1. Resultater for påvisning af proteinrenhed (SDS-PAGE).
（2） Lave restnukleaser: ingen resterende exonukleaser, nicking-enzymer eller RNaser
Figur 2. Testresultater for nukleaserester
(3) E. coli genomisk DNA-rest < 0,1 kopier/U, restniveauerne var signifikant lavere end det konventionelle reagens
Figur 3. E.coli genomisk DNA-rest testresultater
Figur 4. I alt 0,05 U UDG-enzym kunne fuldstændigt fordøje 10^5 kopier/T dU-DNA-produkter.
Figur 5. Efter 50 ℃, 10 min. 55 ℃, 5 min. 55 ℃, 10 min.
Figur 6. RT-qPCR-blanding blev fremstillet ved at bruge to priming-prober af ORF1ab- og N-generne og 14466ES. Da 14466ES blev injiceret i reaktionssystemet i en mængde på 2U/20μL, var der ingen inhibering af RT-qPCR reaktion.
Produktanbefaling — Ultra-Low Residual PCR Enzyme Raw Materials Series
| Produktpositionering | Produktnavn | Kat |
| Kontaminering-Forebyggelse af varmelabile UDG | UCF.ME Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), varmelabil, 1 U/μL | 14466ES |
| Hot start Taq DNA Polymerase | Hieff UCF.ME Hotstart Sensitive Taq DNA-polymerase (5 U/μL) | 14314ES |
| Omvendt transkriptase | Hifair UCF.ME V omvendt transkriptase (200 U/μL) | 14608ES |
| Murin RNase-hæmmer | 14672ES |