Når du bruger traditionelle high-fidelity-enzymer til PCR, er det uundgåeligt at støde på nogle vanskelige problemer. For eksempel kan troskaben ikke være tilstrækkelig, hvilket fører til mutationer eller deletioner i målbaserne, selv efter sekventering af de amplificerede fragmenter. Forstærkningstiden er også relativt lang; nogle gange kan det tage næsten 2 timer at amplificere et 5 kb-fragment. Nu introducerer XiaoYi en hurtig high-fidelity PCR for at løse dine problemer! -- Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (Ultrahurtig High-Fidelity PCR Premix).
De 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (Med farvestof) indeholder en forudtilsat elektroforeseindikator, der gør det muligt at bruge PCR-produkterne direkte til elektroforese. De forstærkede produkter har stumpe ender. Denne high-fidelity enzymblanding tilbyder fordelene ved at være hurtig, enkel, meget følsom, stærkt specifik og stabil. I reaktionssystemet skal der kun tilføjes primere og skabeloner. Derudover indeholder produktet også et specifikt beskyttelsesmiddel, som sikrer, at high-fidelity PCR-præmixen bevarer en stabil aktivitet selv efter gentagen frysning og optøning.
Produktegenskaber
- Høj Troskab: Lav mismatch sats, med -en grundlag uoverensstemmelse forhold af 231/300.000 i høj GC mutationstilbøjelige sekvenser;
- Hurtig Forstærkning Hastighed: Forlængelse sats som hurtig som 5 sekunder om kb;
- Bred Anvendelighed: Kapabel af afdækning gener med 20-80 % GC tilfreds, tåler mus lysater og 20 % blod;
- God Stabilitet: Kan være gemt på 37°C for 7 dage uden påvirker produkt præstation;
- Hurtig og Bekvem: Simpelthen tilføje primere og skabelon for forstærkning, kommer med indlæsning farvestof for direkte elektroforese.
Produktydelsesdemonstration
High Fidelity, Lav Mismatch Rate
Ved at bruge forskellige arters genomer som skabeloner blev seks GC-rige fragmenter, der er meget tilbøjelige til basemutationer/-tab, udvalgt til amplifikation. De respektive PCR-produkter blev klonet ind i vektorer, og 100 enkeltkloner for hver sekvens blev udvalgt til sekventering for at bekræfte forekomster af basefejlparring/mutation. Resultaterne viste, at den hurtige high-fidelity PCR-mastermix (10164ES) havde en overlegen rate af basemismatch/mutation sammenlignet med indenlandske og internationale mærkereagenser.
Forlængelsetiden kan nå op til 5 sekunder/kb
Ved anvendelse af den hurtige high-fidelity enzympræmix (10164ES) og produkt T blev fragmenter af forskellig længde (0,4-10 kb) amplificeret fra 100 ng human genomisk DNA-skabelon med en forlængelseshastighed på 5 sek/kb, med en forlængelsestid på 5 sek/kb. Resultaterne viste, at den hurtige high-fidelity enzympræmix (10164ES) kan amplificere fragmenter inden for 10 kb ved en forlængelseshastighed på 5 sek./kb.
Kan amplificere genfragmenter med forskelligt GC-indhold
Anvendelse af den hurtige high-fidelity enzympræmix (10164ES) til at amplificere genfragmenter med 23-76% GC-indhold fra humane genomiske DNA-skabeloner med forlængelsestiden sat til 5 sek/kb. Resultaterne viste, at produktet har god amplifikationsspecificitet og er i stand til at amplificere fragmenter med forskelligt GC-indhold.
I stand til at amplificere genfragmenter med varierende GC-indhold
Brug af den hurtige high-fidelity enzympræmix (10164ES) til at amplificere fragmenter af varierende længde fra forskellige prøver med en forlængelsestid sat til 5-10 sekunder pr. kilobase. Resultaterne indikerer, at dette produkt udviser fremragende amplifikationsspecificitet og er kompatibelt med amplifikationen af forskellige fragmenter fra forskellige skabeloner.
Bemærk: 1. Muse genomisk DNA 1 kb; 2. Muse genomisk DNA 2 kb; 3. Muse genomisk DNA 6 kb; 4. Majs genomisk DNA 1 kb; 5. Ris genomisk DNA 2 kb-A; 6. Ris genomisk DNA 2 kb-B; 7. Humant 293-celle-cDNA 1 kb; 8. Humant 293-celle-cDNA 2 kb; 9. Humant 293-celle-cDNA 3 kb; 10. Humant 293-celle-cDNA 12 kb; 11. E. coli bouillon 8 kb; 12. E. coli bouillon 16 kb; 13. Ris genomisk DNA 10 kb-A; 14. Ris genomisk DNA 10 kb-B; 15. Ris genomisk DNA 10 kb-C; 16. Ris genomisk DNA 20 kb-A; 17. Ris genomisk DNA 20 kb-B; 18. Direkte amplifikation af humant blod 3 kb.
Høj detektionshastighed af skabelonamplifikation på tværs af forskellige arter
Ved at bruge den hurtige high-fidelity enzympræmix (10164ES) blev forskellige GC-indholdsfragmenter i området fra 0,5-10 kb i Arabidopsis, raps og kartoffel amplificeret med en forlængelsestid på 5 sek/kb. Resultaterne viste, at den hurtige high-fidelity enzympræmix (10164ES) kan sikre en vellykket amplifikation.
Ved at bruge den hurtige high-fidelity enzympræmix (10164ES) blev tilfældige sekvenser (tilfældigt udvalgt) fra Arabidopsis, rapsfrø, frugtfluer, Caenorhabditis elegans og zebrafisk, med fragmentstørrelser fra 0,5-10 kb og dækkende 20-80% GC-indhold, amplificeret. Udvidelsestiden blev sat til 5 sek/kb. Resultaterne viste, at den hurtige high-fidelity enzympræmix (10164ES) har en høj detektionshastighed.
God stabilitet
Ved at bruge den hurtige high-fidelity enzympræmix (10164ES), der er blevet varmeaccelereret opbevaret ved 37 ℃ i henholdsvis 3 dage og 7 dage, til at amplificere 3 kb og 5 kb DNA fragmenter fra 100 ng humant genomisk DNA, med en forlængelsestid sat til 5 sek/kb. Resultaterne viser, at produktet har god stabilitet.
Feedback fra kundeprøve
Dyr gDNA-120bp-50%GC
Kundeevaluering: PCR-processen er hurtig, båndene er passende og kan indlæses direkte i agarosegelelektroforese. Båndene af N-mærket er forspændt opad, hvilket kan skyldes påvirkningen af dens egen buffer, og da der ikke blev tilføjet nogen loading-buffer, kan dette produkt erstatte high-fidelity-enzymet i min nuværende eksperimentelle protokol.
Plante cDNA-729bp-45,13%GC
Kundeevaluering: Sammenlignet med T-mærket er kloningsbåndene klarere og mere ensartede, og hele PCR-processen er hurtigere. Der er ingen grund til at tilføje ekstra farvestof, når du kører gelen, hvilket er meget praktisk og tidsbesparende.
Mikrobiel gDNA-1158, 1953 bp-58,8 %, 52,9 % GC
Kundeevaluering: Sammenlignet med V-mærket er effekten sammenlignelig, men personligt finder jeg den endnu bedre.
Plante cDNA-2000bp-40%GC
Kundevurdering: Effekten er meget god, og strimlen er tydelig.
High-Fidelity PCR-valgvejledning
| Produktpositionering | Produktnavn | Kat# |
| 5s/kb, sikrer troskab og hastighed (Med Farvestof) | 10164ES | |
| 5s/kb, sikrer troskab og hastighed (uden farvestof) | 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix | 10163ES |
| 83×Taq, høj detektionshastighed (med farvestof) | 2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (Med farvestof) | 10154ES |
| 83×Taq enkelt enzym + buffer separat | 10153ES |