Fluorescerende kvantitativ PCR er et meget følsomt eksperiment, der kræver en høj grad af præcision i operationen af laboratoriepersonale. Derfor støder vi uundgåeligt på problemer under qPCR-eksperimentprocessen:
I. Problemer relateret til ikke-eksperimentelle faktorer
- Laboratoriet har mange qPCR-eksperimentprojekter, og instrumenterne er optaget, hvilket efterlader de omhyggeligt forberedte reaktionsblandinger uden nogen klar bortskaffelsesmetode.
- Der er talrige kvantitative prøver, opgaven med at tilføje prøver er besværlig, og der er risiko for prøvetilsætningsfejl på grund af svimmelhed, hvilket fører til upålidelige eksperimentelle resultater.
- Lange maskinkørselstider, begrænset antal eksperimentelle kørsler og eksperimentelle opgaver kan ikke udføres som planlagt på regelmæssig basis.
- Laboratorieudstyret udskiftes med nye instrumenter, der er flere kvantitative instrumenter i laboratoriet, og de kvantitative reagenser er ikke kompatible med instrumenterne.
II. Problemer begrænset af eksperimentelle faktorer
Kvantificeringsproblemer med gener med lav overflod. Kompleks primerdesign og screeningsprocesser, følsomhed og reproducerbarhed af replikatbrønde...
Som en erfaren producent dedikeret til forskning og udvikling af qPCR-reagenser, YEASEN har omhyggeligt udviklet en højtydende qPCR premix-løsning – Hieff UNICON™ Universal Blue qPCR SYBR Grøn Master Mix, som kan løse de føromtalte eksperimentelle problemer på én gang. Den Universal ROX, der bruges i dette produkt, erstatter den traditionelle ROX, der kompenserer for de optiske vejforskelle på tværs af forskellige instrumentplatforme, hvilket gør den velegnet til alle qPCR-instrumenter. Derudover anvender produktet en antistofmodifikationsmetode og inkluderer additiver, der forbedrer genamplifikation, hvilket væsentligt forbedrer produktets amplifikationsydelse. Det balancerer perfekt de højtydende behov hos forskere i det videnskabelige samfund med industrivirksomhedernes højeffektive krav.
Produktegenskaber
- Bred instrument kompatibilitet: De forblanding indeholder -en bestemt type af reference farvestof, eliminere de behov til tilpasse de ROX koncentration.
- Let Sporing: De blå forblanding tillader for direkte visualisering til adskille om de prøve har været tilføjet, simpelthen ved observere de farve.
- Høj Stabilitet: De system er forberedt på værelse temperatur, og de blandet system kan være gemt på 4°C for op til 24 timer uden enhver forandring i de prøve resultater.
- Hurtig Opsætning: Kompatibel med begge standard og hurtig programmer, tillader de kvantitative eksperiment til være afsluttet i som hurtig som 46 minutter.
- Fremragende Forstærkning Præstation: Høj forstærkning effektivitet, god specificitet, dygtig af opdager gener på de enkelt kopi antal.
Bestillingsinformation
| Produktpositionering | Produktnavn | Kat# |
| Højfølsom universal kvantitativ præmix | 11184ES | |
| Farvesporing Høj følsomhed Fluorescens Kvantitativ Forblanding | 11188ES | |
| 11189ES | ||
| 11190ES |
Produktydelse
1.Høj følsomhed: i stand til at detektere ned til en enkelt kopi
Figur 1. Hieff UNICON™ Universal Blue premix kan effektivt detektere et skabelonmængdeområde på tværs af 7 størrelsesordener med høj forstærkningseffektivitet og et godt lineært forhold inden for et bredt lineært område. Den anvendte skabelon var 2 µL plasmid med en koncentration på 10^6 til 10^0 kopier, hvilket amplificerede det humane IL23R-gen.
2.Den opdagelse sats og specificitet er god: bredt gældende til forstærkere med 30-70 % GC tilfreds
Figur 2. Hieff UNICON™ Universal Blue premix er bredt anvendelig til forstærkere med 30-70% GC-indhold, hvilket sikrer en ekstrem høj specificitetsdetektionshastighed. Ved at bruge 2 µL 293T cDNA som skabelon blev 1000 par primere til 200 bp amplimere (GC % indhold 30 %-70 %) designet med Primer5 software, og 27 af disse amplimere blev amplificeret tilfældigt.
3.Høj opløsning: Kan nøjagtigt skelne forskelle i skabelonkoncentration på 2 gange
Figur 3. Hieff UNICON™ Universal Blue premix kan nøjagtigt skelne forskelle i skabelonkoncentration på 2 gange. Den anvendte skabelon var en 2-fold gradientfortynding af 2 µL 293T cDNA-stamopløsning, som amplificerede GAPDH-genet.
4. God reproducerbarhed af duplikatbrønde: 90 duplikatbrønde
Figur 4. Hieff UNICON™ Universal Blue premix udviser fremragende reproducerbarhed, hvor amplifikationskurverne for 90 duplikatbrønde viser høj sammenfald og en standardafvigelse af Ct-værdier på mindre end 0,2. Ved at anvende 1 µl 293T cDNA som skabelonen blev GAPDH-genet amplificeret.
5.God stabilitet: Forblandingen forbliver upåvirket i amplifikationsydelse, selv efter at være frosset og optøet 50 gange
| Fryse-tø-cyklusser | 0 gang | 10 gange | 30 gange | 50 gange |
| Gennemsnitlig Ct | 23.11 | 23.17 | 23.18 | 23.25 |
| ▲Ct | - | 0,06 | 0,07 | 0,14 |
Figur 5. Hieff UNICON™ Universal Blue premix viser ingen ændring i amplifikationsydelse efter at være frosset og optøet 50 gange. Ved at bruge 1 µL 293T cDNA som skabelonen blev C2orf68-genet amplificeret med præmix, der havde gennemgået forskellige antal fryse-tø-cyklusser.
Kunde Feedback
Prøvekilde: Museovariecancercellelinje ID8, HM1
Prøvekilde: Muse epididymal fedt-RNA
Prøvekilde: Arabidopsis thaliana blad-RNA
Litteratur med høj impact factor delvist udgivet ved hjælp af YEASEN qPCR Mix
[1] Li Y, Wang D, Ping X, et al. Lokal hypertermibehandling inducerer brunfarvning af hvidt fedt og behandler fedme. Celle. 2022;185(6):949-966.e19.doi:10.1016/j.cell.2022.02.004.(IF=66,850)
[2] Seki T, Yang Y, Sun X, et al. Brun-fedt-medieret tumorundertrykkelse ved kuldeændret global metabolisme. Natur. 2022;608(7922):421-428. doi:10.1038/s41586-022-05030-3. (IF=69,504)
[3] Chen P, Wang W, Liu R, et al. Olfaktorisk sensorisk erfaring regulerer gliomagenese via neuronal IGF1. Natur. 2022;606(7914):550-556. doi:10.1038/s41586-022-04719-9.(IF=69,504)
[4] Dong W, Zhu Y, Chang H, et al. Et SHR-SCR-modul specificerer skæbne til bælgfrugtbarkceller for at muliggøre nodulation. Natur. 2021;589(7843):586-590. doi:10.1038/s41586-020-3016-z.(IF=69,504)
[5] Lu XY, Shi XJ, Hu A, et al. Fodring inducerer kolesterolbiosyntese via mTORC1-USP20-HMGCR-aksen. Natur. 2020;588(7838):479-484. doi:10.1038/s41586-020-2928-y.(IF=69,504)
[6] Bi X, Wang K, Yang L, et al. Sporing af de genetiske fodspor fra landing af hvirveldyr i ikke-teleost-strålefinnede fisk. Celle. 2021;184(5):1377-1391.e14. doi:10.1016/j.cell.2021.01.046.(IF=66,850)
[7] Liu S, Hua Y, Wang J, et al. RNA-polymerase III er påkrævet til reparation af DNA-dobbeltstrengsbrud ved homolog rekombination. Celle. 2021;184(5):1314-1329.e10. doi:10.1016/j.cell.2021.01.048.(IF=66,850)
[8] Liu CX, Li X, Nan F, et al. Struktur og nedbrydning af cirkulære RNA'er regulerer PKR-aktivering i medfødt immunitet. Celle. 2019;177(4):865-880.e21. doi:10.1016/j.cell.2019.03.046.(IF=66,850)
[9] Han X, Wang R, Zhou Y, et al. Kortlægning af musecelleatlas af Microwell-Seq. Celle. 2018;172(5):1091-1107.e17. doi:10.1016/j.cell.2018.02.001.(IF=66,850)
[10] Chai Q, Yu S, Zhong Y, et al. En bakteriel phospholipid phosphatase hæmmer værtens pyroptose ved at kapre ubiquitin. Videnskab. 2022;378(6616):eabq0132.doi:10.1126/science.abq0132.(IF=63,714)
[11] Yu Q, Liu S, Yu L, et al. RNA-demethylering øger udbyttet og biomassen af ris- og kartoffelplanter i markforsøg. Nat Biotechnol. 2021;39(12):1581-1588. doi:10.1038/s41587-021-00982-9.(IF=68,164)
[12] Han F, Liu X, Chen C, et al. Hyperkolesterolæmi risiko-associeret GPR146 er en forældreløs G-protein koblet receptor, der regulerer blodets kolesterolniveau hos mennesker og mus. Cell Res. 2020;30(4):363-365. doi:10.1038/s41422-020-0303-z.(IF=46,297)
[13] Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Leucin-tRNA-syntase-2-udtrykkende B-celler bidrager til immunoevasion af kolorektal cancer. Immunitet. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017.(IF=43,474)
[14] Bi Q, Wang C, Cheng G, et al. Microglia-afledt PDGFB fremmer neuronale kaliumstrømme for at undertrykke basal sympatisk tonicitet og begrænse hypertension. Immunitet. 2022;55(8):1466-1482.e9. doi:10.1016/j.immuni.2022.06.018.(IF=43,474)
[15] Wang X, Ni L, Wan S, et al. Febril temperatur kontrollerer kritisk differentieringen og patogeniciteten af T Helper 17-celler. Immunitet. 2020;52(2):328-341.e5. doi:10.1016/j.immuni.2020.01.006.(IF=43,474)
[16] Xiao J, Li W, Zheng X, et al. Målretning mod 7-dehydrocholesterolreduktase integrerer kolesterolmetabolisme og IRF3-aktivering for at eliminere infektion. Immunitet. 2020;52(1):109-122.e6. doi:10.1016/j.immuni.2019.11.015.(IF=43,474)
[17] Zhang X, Zhang C, Qiao M, et al. Udtømning af BATF i CAR-T-celler øger antitumoraktivitet ved at inducere modstand mod udmattelse og dannelse af centrale hukommelsesceller. Kræftcelle. 2022;40(11):1407-1422.e7. doi:10.1016/j.ccell.2022.09.013.(IF=38,585)
[18] Wang XY, Wei Y, Hu B, et al. c-Myc-drevet glykolyse polariserer funktionelle regulatoriske B-celler, der udløser patogene inflammatoriske reaktioner. Signal Transduct Target Ther. 2022;7(1):105. Udgivet 2022 18. april doi:10.1038/s41392-022-00948-6.(IF=38,104)
[19] Fan H, Hong B, Luo Y, et al. Effekten af valleprotein på viral infektion og replikation af SARS-CoV-2 og pangolin coronavirus in vitro. Signal Transduct Target Ther. 2020;5(1):275. Udgivet 2020 24. november. doi:10.1038/s41392-020-00408-z.(IF=38,104)
[20]Ren Y, Wang A, Wu D, et al. Dobbelt inhibering af medfødt immunitet og apoptose af humant cytomegalovirusprotein UL37x1 muliggør effektiv virusreplikation. Nat Microbiol. 2022;7(7):1041-1053. doi:10.1038/s41564-022-01136-6.(IF=30,964)