Reducer effektiv tid, sørg for kvalitet med den nyeste opgradering til onepot mRNA -transkriptionsproces!

I de senere år har udviklingen og anvendelsen af ​​mRNA-teknologi fortsat tiltrukket sig opmærksomhed. mRNA-lægemidler involverer inokulering af mRNA, der koder for antigenproteiner i menneskekroppen. Ved at bruge det genetiske materiale inde i menneskelige celler udtrykker og syntetiserer de antigenproteiner. Denne proces inducerer og aktiverer kroppens immunsystem gennem antigenproteiner, med det formål at forebygge og behandle sygdomme. mRNA-lægemidler har fordele såsom sikkerhed, effektivitet og en kort cyklus. De kan samtidigt inducere humoral og cellulær immunitet og er blevet anvendt i forskellige indikationer, herunder tumorer, infektionssygdomme, sjældne sygdomme, hjerte-kar-sygdomme og mere.

Hele processen med udvikling af mRNA-lægemiddel kan groft opdeles i flere trin:

Sekvensbestemmelse og design - mRNA in vitro transkription - indkapslingspræparation

De konventionel trin af mRNA in vitro transkription (IVT) inkluderer:

Plasmid DNA-ekstraktion og linearisering—Plasmid DNA oprensning—In vitro transkription (co-transkriptionel afdækning) — Oprensning — mRNA stamopløsning

De énpotte mRNA in vitro transkription (IVT) proces omfatter:

Plasmid DNA-ekstraktion og linearisering—In vitro-transkription (co-transcriptional capping) - Oprensning - mRNA-stamopløsning

I øjeblikket involverer de fleste eksisterende processer et enkelt oprensningstrin for plasmid-DNA efter enzymatisk spaltning før IVT-trinnet. Yeasen Biotechlogy, baseret på et modent mRNA-applikationsudviklingscenter, har udviklet "Onepot mRNA-transkription"-processen. I denne proces renses cirkulært plasmid-DNA ikke efter enzymatisk spaltning; i stedet bruges det direkte til in vitro-transkription, hvilket resulterer i en mRNA-stamopløsning af høj kvalitet. Hele denne proces, mens den sikrer produkt- og proceskvalitet, forkorter varigheden af ​​den eksisterende proces.

Procesfordele:

1. Procesoptimering, der reducerer IVT-trin for enklere betjening.
2. Lavere materialeomkostninger, hvilket eliminerer behovet for rensning efter spaltning og kvalitetsinspektion.
3. Opretholdelse af mRNA-kvalitet og -udbytte.

Data:

1. Udbytter og Integritet:

Ved hjælp af 1μg lineariserede 2K-, 4K- og 9K-plasmider kan onepot-processen generere 150-200μg mRNA.

Længde	Udbytter	Integritet
2K	200 μg	94,00 %
4K	185 μg	92,20 %
9K	150 μg	87,50 %

Integritetstestning blev udført ved anvendelse af kapillærelektroforese (CE) for at vurdere integriteten af ​​fragmenter med længder på 2K, 4K og 9K. Integriteten af ​​2K- og 4K-fragmenter var >92%, og integriteten af ​​9K-fragmenter var >87%.

2. Detektion af mRNA-afdækningseffektivitet

LC-MS blev anvendt til at vurdere capping-effektiviteten af ​​2K-sekvensen, hvilket afslørede en capping-effektivitet på 99,5%.

Øverste billede: HPLC UV-kromatogram

Nederste billede: Deconvoluted molekylvægtspektrum

3. Detektion af mRNA-polyadenyleringseffektivitet

LC-MS blev brugt til at detektere polyadenyleringseffektiviteten af ​​prøver, hvilket viste resultater fordelt normalt.

Øverste billede: Væskekromatografi TIC-kromatogram

Nederste billede: Deconvoluted molekylvægtspektrum

4.mRNA-ekspression Assay

Transfektion af 293T-celler med mRNA-produkter syntetiseret under anvendelse af både konventionel behandle (Venstre, lineariserede plasmider wmed rensning) og one-pot-processen (højre, lineariserede plasmider uden oprensning) viste ingen forskel i fluorescensproteinekspression efter 24 timers dyrkning.

Bestillingsinformation