Essensen af ​​NGS bibliotek kvantificering er nukleinsyre (DNA eller RNA) kvantificering. Nøjagtig analyse af NGS-bibliotekskvantificering er afgørende for at opnå sekventeringsdata af høj kvalitet. Hvis den kvantitative koncentration af NGS-biblioteket er høj, kan udbyttet af sekventeringsdata være lavt på grund af utilstrækkelig clustering. Imidlertid kan lav kvantitativ koncentration forårsage signalinterferens mellem klynger for at producere data af lav kvalitet og endda føre til sekventeringsfejl. Derudover kombineres flere NGS-biblioteker med stigningen i sekventeringsfluxen af ​​sequencere ofte til sekventering. I henhold til kravene til størrelsen af ​​sekventeringsdata blandes NGS-biblioteker med tilsvarende molære mængder baseret på de kvantitative resultater for at stabilisere outputtet af størrelsen af ​​hver prøvedata. Derfor er nøjagtig NGS-bibliotekskvantificering af biblioteker afgørende.

På nuværende tidspunkt er der to hovedmetoder til NGS-bibliotekskvantificering, den ultraviolette absorptionsmetode og den fluorescerende farvestofmetode. NanoDrop er et DNA-kvantificeringsinstrument designet ud fra princippet om ultraviolet absorption; Qubit er et DNA-kvantificeringsinstrument udviklet efter princippet om fluorescerende farvestof. Den kvantitative nøjagtighed og omkostningerne ved disse to metoder er forskellige. Qubit-metoden anbefales primært her. Så hvorfor anbefaler vi qubit til dig? Hvad er egenskaberne ved Qubit-produkter leveret af Yeasen? Fortsæt venligst med at læse...

1. Hvorfor anbefaler vi Qubit til dig?

2. Hvad er egenskaberne ved Qubit-produkter leveret af Yeasen?

• Hvordan virker Qubit?
• Populært produkt leveret af Yeasen
• Produktegenskaber

3. Hvordan vælger man Qubit til forskellige prøver?

1. Hvorfor anbefaler vi Qubit til dig?

Der er ingen tvivl om, at Qubit er bedre end Nanodrop. Så hvorfor er qubit bedre end nanodrop? Hvad er forskellen mellem qubit og nanodrop? For det første, som nævnt før, adskiller de sig i princippet om DNA-kvantificering, NanoDrop er designet baseret på ultraviolet absorption. Princippet for den ultraviolette absorptionsmetode er, at der er purin- og pyrimidinbaser i nukleinsyrekomponenter, og disse baser har konjugerede dobbeltbindinger. Der er stærk lysabsorption ved 250-280nm i UV-området, og den maksimale absorptionsværdi er omkring 260nm. Derfor kan UV-absorptionen af ​​nukleinsyre bruges til koncentrationskvantificering. NanoDrop er enkel og hurtig at betjene, men den kan ikke skelne mellem DNA, RNA, nedbrudte nukleinsyrer, frie nukleotider og andre urenheder. Det er ikke egnet til at opnå nøjagtige bibliotekskvantitative data. Men Qubit-kvantificering er det bedste valg til nøjagtig NGS-bibliotekskvantificering, især til DNA-kvantificering. Så hvad er kendetegnene ved qubit DNA kvantificering? Se venligst følgende tabel:

2. Hvad er egenskaberne ved Qubit-produkter leveret af Yeasen?

Før vi introducerer egenskaberne for Qubit-produkter leveret af Yeasen, lad os forstå, hvordan det virker.

2.1 Hvordan virker Qubit?

Princippet i Qubit er at bruge fluorescerende farvestoffer til at binde til DNA-molekyler for at udsende fluorescens og derefter måle fluorescensintensiteten for at opnå koncentrationen af ​​nukleinsyre. Fluorescerende farvestoffer fluorescerer kun efter binding til DNA-dobbeltstrengen, og den resulterende fluorescens er proportional med DNA-koncentrationen.

2.2 Populært produkt leveret af Yeasen

De 1×dsDNA HS Assay Kit til Qubit® (kat.nr.: 12642ES), udviklet på basis af dsDNA HS Assay Kit til Qubit® kit (kat. nr.: 12640ES), er en Qubit premix-opløsning, der er klar til brug, til at forfortynde de koncentrerede farvestoffer i det originale kit til en arbejdsopløsning. Under drift behøver du kun at blande arbejdsvæsken med prøven, der skal testes for at bestemme prøvekoncentrationen ved hjælp af Qubit® fluorometer, som er mere praktisk at bruge.

2.3 Produktegenskaber

Enkel og nem at betjene: klar til brug forblandet væske, ingen grund til at forberede arbejdsvæske, enkel betjening, kvantitativt mere tidsbesparende;

Figur 1. Processerne for dsDNA HS Assay Kit for Qubit

Ultrahøj følsomhed: 64x gradientfortynding præcis kvantificering, 0,2-100 ng dsDNA har et godt lineært forhold;

Super specificitet: Specifik påvisning dsDNA, har fremragende tolerance over for nogle konventionelle forurenende stoffer;

Hurtig bindingshastighed af farvestof: mætning kan nås inden for 2 minutter, så der er ingen grund til at vente på hurtig aflæsning af nøjagtige kvantitative resultater;

Høj stabilitet: Fluorescenssignalet varede i 3 timer, og den kvantitative nøjagtighed blev ikke påvirket efter 20 dage ved stuetemperatur.

Figur 1. Produktstabilitetstesten. Resultaterne viser, at den forbliver stabil efter at have været opbevaret ved stuetemperatur i 2 uger (afvigelsen mellem den målte værdi og den teoretiske værdi var <10 %)

Bemærk: To koncentrationer af dsDNA blev udvalgt, og Thermo#Q33230 opbevaret ved 4 ℃, Yeasen#12642 opbevaret ved 4 ℃ og Yeasen#12642 opbevaret ved stuetemperatur (ca. 25 ℃) blev brugt til at bestemme koncentrationsværdierne på forskellige tidspunkter, og afvigelseshastigheden mellem hver måling og den første afvigelse var 0) beregnet.

Figur 2. Produktstabilitetstest. Super stabilitet, høj relevans af testresultater inden for gyldighedsperioden

3. Hvordan vælger man Qubit til forskellige prøver?

Qubit, hurtig kvantificering! Brug af Qubit til bibliotekskvantificering har mange fordele. Dets opdagelsesproces er hurtig og effektiv.Sekvenseringsresultater kan opnås inden for få sekunder for en enkelt prøve, og koncentrationen kan udlæses direkte, hvilket er meget intuitivt. Samtidig kan det også være kompatibelt med det meste af enzymmærkningsinstrumentet til batchprøvekvantificering, som er førstevalg til konventionel bibliotekskvantificering og dsDNA-kvantificering.