Nukleinsyrekvantificering, som et af de mest fundamentale eksperimenter inden for molekylærbiologi, påvirker direkte resultatet af nedstrøms eksperimenter. Nøjagtigheden af ​​nukleinsyrekvantificering er afgørende. På nuværende tidspunkt er der to hovedmetoder til NGS-bibliotekskvantificering, den ultraviolette absorptionsmetode og den fluorescerende farvestofmetode.

Den ultraviolette absorptionsmetode bruger et spektrofotometer til at måle absorbansen ved 260 nm for DNA og RNA til kvantificering. Den estimerer også renheden af ​​nukleinsyrer ved at beregne OD260/OD280-forholdet. Imidlertid er de påviste værdier meget modtagelige for interferens fra andre kontaminanter såsom frie nukleotider, salte og organiske forbindelser.

Qubit fluorometrisk kvantificering anvender fluorescerende farvestoffer, der specifikt binder til dobbeltstrenget DNA, enkeltstrenget DNA, RNA eller proteiner. Ved excitation af en lyskilde med specifik bølgelængde udsender farvestofferne fluorescens, som ikke påvirkes af andre urenhedsmolekyler, der kan være til stede i prøven. Fluorescensintensiteten er proportional med koncentrationen af ​​målmolekylerne i prøven.

Tabel 1. Sammenligning af almindelige nukleinsyrekvantificeringsmetoder

Mål	UV Abs (Nanodrop)	Qubit DNA HS	Qubit DNA BR	Qubit RNA	Qubit ssDNA
Type af nukleinsyre	DNA, RNA	dsDNA	dsDNA	RNA	ssDNA, oligo
Prøvekoncentration（ng/μL）	2 ng/μL-15 μg/μL	10 pg/µL-100 ng/µL	0,1 ng/µL-1000 ng/µL	250 pg/µl-1000 ng/µl	50 pg/μL-200 ng/μL
Fordel	Højere grænse for kvantificering	God specificitet	Bredt udvalg af kvantificering	Meget selektiv for RNA	Godt tolereret
Begrænsninger	Dårlig specificitet	Beskyt mod lys under brug	Beskyt mod lys under brug	Beskyt mod lys under brug	Dårlig specificitet og binder også dsDNA

UV-absorbans og Qubit fluorometrisk kvantificering har hver deres fordele og kan komplementere hinanden. Til foreløbig kvantificering af rutinemæssige nukleinsyreprøver for at bestemme koncentration, renhed og tilstedeværelse af kontaminanter, kan absorbanskvantificeringsmetode vælges. Qubit-kvantificering er mere velegnet til lavkoncentrations-værdifulde prøver eller præcis kvantificering, der kræves til downstream-eksperimenter, såsom næste generations sekventering og real-time kvantitativ PCR.

Yeasen har lanceret flere Qubit kvantificeringsprodukter: dsDNA HS Assay Kit til Qubit^® (Kat#12640), Klar til brug: 1× dsDNA HS Assay Kit til Qubit^® (Kat#12642), ssDNA-assaykit til Qubit^® (Cat#12645) og dsDNA BR Assay Kit (Cat#12643), som er blevet meget rost siden deres lancering.

Løsning 1 dsDNA HS High Sensitivity Kvantificering

Klar-til-brug dsDNA kvantificering præmix—1× dsDNA HS Assay Kit til Qubit^®

^{Nem betjening: Klar til brug forblanding, intet behov for forblanding;}

^{Høj følsomhed: Detekterbar koncentration så lav som 50 pg/μL;}

^{God stabilitet: Fluorescenssignal varer i 3 timer, og opbevaring ved stuetemperatur i 20 dage påvirker ikke kvantificeringsnøjagtigheden;}

^{A. Fremragende stabilitet: Opbevaring ved stuetemperatur i 2 uger bevarer stadig stabiliteten (den målte værdi afviger fra den teoretiske værdi med mindre end 10%).}

Tabel 2. Stabilitetstest af forskellige prøver ved 4°C og stuetemperatur sammenlignet med konkurrenter

Kvantitative reagenser	Bestemt koncentration af λDNA（ng/μL）
	0d		1d		3d	7d			10d		14d
T* 4℃	0,51		0,496		0,524	0,534			0,495		0,499
Yeasen 4℃	0,51		0,508		0,513	0,475			0,48		0,495
Yeasen stuetemperatur opbevaring	0,51		0,517		0,506	0,486			0,506		0,523
Kvantitative reagenser	Bestemt koncentration af kalve-gDNA（ng/μL）
	0d	1d		3d			7d	10d		14d
T* 4℃	55,3	53,5		55,40			57,9	55,8		58
Yeasen 4℃	59,4	55,4		57,8			56,1	56,3		59,8
Yeasen stuetemperatur opbevaring	59	55,7		61,3			58	58,7		56,1

B. Høj følsomhed, god batch-til-batch stabilitet

Tabel 3.Stabilitetstest af forskellige batches

Batch	Prøve	L*			Yeasen			fejl
		koncentration 1（ng/μL）	koncentration 2（ng/μL）	AVG（ng/μL）	koncentration 1（ng/μL）	koncentration 2（ng/μL）	AVG（ng/μL）
D9801060	λDNA	0,3160	0,3250	0,3205	0,320	0,320	0,320	0,16 %
D8801050		0,3310	0,3320	0,3315	0,319	0,306	0,3125	5,73 %
D7813110		0,345	0,358	0,352	0,334	0,329	0,332	-6,03 %

Løsning 2 dsDNA BR Bred Range Kvantificering

Bredt område dsDNA kvantificering—dsDNA BR Assay Kit

Høj følsomhed: Detekterbar koncentration så lav som 50 pg/μL;

Fremragende linearitet: God linearitet inden for området 2-1000 ng;

Stærk tolerance over for forurenende stoffer: Kan tolerere almindelige forurenende stoffer.

Tabel 4. Stabilitet og tolerance over for forurenende stoffer sammenlignet med konkurrenter

Yeasen BR						T* BR
standard	RFU1	RFU2	AVG	fejl		standard	RFU1	RFU2	AVG	fejl
S1	159,63	160,71	160,17	1 %		S1	216,17	211,56	213.865	-2 %
S2	24497,0	25078,64	24787,82	2 %		S2	20532,46	20452,26	20492.36	0 %
mensuration						mensuration
Forurenende stof	Koncentration i 10-μL prøve	koncentration 1	koncentration 2	AVG	Skal afprøves/kontrolleres	Forurenende stof	Koncentration i 10-μL prøve	koncentration 1	koncentration 2	AVG	Skal afprøves/kontrolleres
Kontrol (H2O)	/	49	48,6	48,8	0,0 %	Kontrol (H2O)	/	49,8	48	48,9	0,0 %
BSA	1 mg/ml	51,8	52	51,9	6,4 %	BSA	1 mg/ml	54	51,2	52,6	7,6 %
Ethanol	20 %	44,6	44	44,3	-9,2 %	Ethanol	20 %	44,8	43,4	44,1	-9,8 %
chloroform	4,00 %	49,0	49,8	49,4	1,2 %	chloroform	4,00 %	50,0	47	48,5	-0,8 %
SDS	0,2 %	46,6	45,8	46,2	-5,3 %	SDS	0,2 %	53,2	51,6	52,4	7,2 %
Trition-X100	0,20 %	41,6	40,6	41.1	-15,8 %	Trition-X100	0.20 %	53	51	52,0	6,3 %
dNTP'er	2mM	44,2	45	44,6	-8,6 %	dNTP'er	2mM	47,8	46,4	47,1	-3,7 %

Løsning 3 ssDNA kvantificering

Det ideelle valg til ssDNA-kvantificering – ssDNA-analysesæt med høj ydelse til Qubit^®

^{Høj følsomhed: Detekterbar koncentration så lav som 50 pg/μL;
Fremragende linearitet: God linearitet inden for området 0-200 ng;
Stabilt signal: Fremragende farvestof kombineret med opgraderet optimeret buffer, kan opretholde stabil fluorescensintensitet ved stuetemperatur og er yderst anvendelig selv i almindelige forureningsmiljøer såsom salte, frie nukleotider, opløsningsmidler, detergenter eller proteiner, hvilket sikrer nøjagtig kvantificering;
God stabilitet: Ingen væsentlige præstationsændringer efter 6 måneders behandling ved 4°C eller 25°C;
Bredt anvendelsesområde: Enkel betjeningsproces, der muliggør hurtig kvantificering af oligonukleotider, primere, denatureret DNA, enkeltstrenget cirkulært DNA osv.}

A.God repeterbarhed: Kvantificering i forskellige Qubit-instrumenter, forskellige typer prøver ved hjælp af Yeasen flere batches af Cat#12645 testet. Inden for intervallet 0-200ng, god repeterbarhed i målinger fra forskellige Qubit-instrumenter.