Human Wnt3a udtrykt i HEK293 -celler udviser høj aktivitet, der fremmer organoider dyrkning

Organoider er in vitro-skabte tredimensionelle modeller, der ligner naturligt væv eller organer, og de har betydelig betydning inden for sygdomsmodellering, organforyngelse og individualiseret medicinsk behandling. Dyrkning af disse organoider nødvendiggør omhyggelig håndtering af en mangfoldig række af cytokiner, hvor Wnt3a skiller sig ud som en hyppigt anvendt faktor, der påtager sig en central rolle i pleje af organoider afledt af en bred vifte af væv.

Hvad er Wnt-3a?

Wnt-3a tilhører Wnt-familien, en gruppe af udskilte proteiner, der omfatter 19 humane varianter, herunder Wnt1, Wnt2, Wnt2b (Wnt13), Wnt3, Wnt3a, Wnt4, Wnt5a, Wnt5b, Wnt6, Wnt7a, Wnt8ab, Wnt8ab, Wnt8ab, Wnt8ab, Wnt8ab (også kendt som Wnt14), Wnt9b (Wnt14b), Wnt10a, Wnt10b, Wnt11 og Wnt16. Denne familie er karakteriseret ved dens bevarelse og cysteinrige sammensætning. Wnt-proteiner letter Wnt-signalvejen ved at binde sig til cellemembranreceptorer eller tilstødende cellemembranreceptorer. Denne vej kan kategoriseres i den kanoniske vej, medieret af β-catenin, som inkluderer Wnt1, Wnt2, Wnt2b, Wnt3, Wnt3a, Wnt7a, Wnt8, Wnt8b og Wnt10a, og den ikke-kanoniske vej, der omfatter Wnt-4, som omfatter Wnt-4 Wnt5a, Wnt6 og Wnt11. Wnt3a, som det essentielle medlem af Wnt-familien, er allestedsnærværende fordelt og spiller en central rolle i styringen af ​​forskellige cellulære funktioner, såsom selvfornyelse, spredning, differentiering og motilitet.

Wnt-3a signalvejstransduktionsmekanisme

Wnt-signalvejen er et mangefacetteret netværk af proteininteraktioner, der primært er forbundet med embryonal udvikling og cancer. Det spiller dog også en rolle i normale fysiologiske processer i voksne organismer. Wnt3a binder til sin receptor, Frizzled (Fz) proteinet, sammen med det co-receptor lipoprotein receptor-relaterede protein (LRP5/6), og aktiverer efterfølgende stilladsproteinet Disheveled (Dvl). Denne aktivering fører til adskillelsen af ​​"destruktionskomplekset", som består af kaseinkinase 1 (CK1), glycogensyntase kinase-3β (GSK-3β) og stilladsproteiner adenomatøs polyposis coli (APC), Axin1 og Axin2. Opløsning af dette kompleks stabiliserer det frie β-Catenin-protein i cytoplasmaet. Det akkumulerede β-Catenin i cytoplasmaet translokerer derefter ind i kernen, hvor det binder til transkriptionsfaktorer i TCF/LEF-familien, hvilket i sidste ende aktiverer nedstrøms målgener såsom c-myc og Cyclin D1. Denne kaskade inducerer efterfølgende cellulære responser. Sammenfattende kan Wnt-signalvejen forenkles som følger: Wnt3a→FZD→DVL→kompleks opløsning→β-Catenin går ind i kernen→TCF/LEF→nedstrøms gentranskription. Uden Wnt3a nedbrydes β-catenin normalt i cytoplasmaet af "destruktionskomplekset", som målretter det til ubiquitinering og efterfølgende nedbrydning i proteasomet. Som et resultat kan det ikke komme ind i kernen for at starte transkriptionen af ​​nedstrøms gener. Wnt/β-catenin signalvejen er meget konserveret gennem hele evolutionen og spiller en fundamental rolle i embryonal udvikling, cellevækst, differentiering, polaritetsdannelse, neural udvikling og carcinogenese.

Wnt3a og Organoids

Wnt3a har en central position som en af ​​de hyppigst anvendte kulturfaktorer til organoidgenerering. Dens høje aktivitet, konsistens mellem batches, mangel på kontaminering og serumfri forberedelse er nøglefaktorer, der bidrager til succesen med organoid-eksperimenter.Wnt3a har fundet udbredt anvendelse i organoide kulturer af forskellige væv, herunder tarmen, maven, bugspytkirtlen, leveren, skjoldbruskkirtlen, spiserøret og nervesystemet. I et forsøg på at hjælpe videnskabelige forskere og farmaceutiske virksomheder i deres undersøgelser af den kliniske anvendelse af Wnt3a i organoiddannelse og tumorforskning, har YEASEN introduceret et højaktivt Wnt3a-proteinprodukt (Katalog: 92276ES) designet til at lette organoidkultur.

Figur 3. Målt ved dets evne til at inducere Topflash-reporteraktivitet i HEK293T humane embryonale nyreceller. ED50 for denne effekt er 25 ng/ml.

Organoid kulturvalidering

Yeasen cytokiner er blevet verificeret på humane tumororganoider såsom lungekræft, livmoderhalskræft, ovariecancer, bugspytkirtelkræft og tarmkræft, og normale organoider såsom organoider i tyndtarmen hos mennesker og mus.

Beslægtede cytokiner information