Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit er et magnetisk perlesæt specielt til mRNA-oprensning. mRNA Capture-perlerne er paramagnetiske mikrosfærer i mikrometerstørrelse koblet med Oligo dT (poly A)-haler, som kan bruges til at isolere mRNA fra 10 ng til 4 μg komplet RNA ved at binde til mRNA med poly A-haler.

Specifikationer

Komponenter

Opbevaring

Produktet skal opbevares ved 2 ~ 8 ℃ i et år og undgå frysning.

Instruktioner

1. Nødvendige materialer ikke inkluderet

Magnetisk stativ, nukleasefri PCR-rør

2. Operation

1) Udlign mRNA Capture Beads ved stuetemperatur (~ 30 min).

2) Fortynd 10 ng – 4 μg total RNA til 50 μL med nukleasefrit vand i et nukleasefrit PCR-rør, anbring det på is.

3) Bland de magnetiske perler ved at vende på hovedet eller vortex. Tilføj 50 μL af de magnetiske perler til 50 μL total RNA-prøve og pipetter 6 gange for at blande godt. Drej kort ned til bunden af ​​røret.

4) Inkuber blandingen af ​​magnetiske perler og RNA i en termisk cyklus og kør følgende program: 65°C, 5 min; 25°C, 5 min; 25°C, hold.

5) Placer røret på en magnet stativ i 5 minutter for at adskille mRNA fra totalt RNA. Fjern forsigtigt supernatanten.

6) Fjern røret fra magneten stativ og resuspender de magnetiske perler med 200 μL Beads Wash Buffer. Pipetter hele volumen op og ned 6 gange for at blande grundigt. Placer røret på en magnet stativ i 5 minutter, og fjern forsigtigt supernatanten.

7) Gentag trin 6.

8) Fjern røret fra magneten stativ. Tilsæt 50 μL Tris Buffer for at resuspendere de magnetiske perler og pipetter 6 gange for at blande grundigt.

9) Sæt prøven i en termisk cyklus og kør følgende program for at eluere mRNA'et: 80°C, 2 min; 25°C, hold.

10) Fjern prøven fra den termiske cyklus. Tilsæt 50μL Beads Binding Buffer og pipetter gentagne gange 6 gange for at blande grundigt.

11) Inkuber ved stuetemperatur i 5 minutter for at tillade mRNA at binde til de magnetiske perler.

12) Placer røret på magneten rist i 5 minutter, og fjern forsigtigt supernatanten.

[Bemærk]: En 10 μL pipette er nødvendig for at aspirere den resterende væske.

13) Fjern røret fra magneten stativ, resuspender de magnetiske perler med 200 μL Beads Wash Buffer, pipetter gentagne gange 6 gange for at blande grundigt. Placer røret på magneten stativ ved stuetemperatur i 5 minutter. Fjern og kassér al supernatanten.

14) mRNA-sluteluering

Skema A: Til reservetransskriptionsreaktion

Fjern røret fra det magnetiske stativ. Tilsæt 12μL nukleasefrit vand og pipetter gentagne gange 6 gange for at blande grundigt. Placer røret i termocyklen og kør følgende program: 80°C, 2 min. Placer derefter røret på magneten stativ straks stå ved stuetemperatur i 5 min. Efter opløsningen er klaret, aspirer du forsigtigt 10 μL supernatant ind i et andet nyt Nuclease-frit PCR-rør.

Skema B: For RNA forberedelse af biblioteket

12603 Kit bruges sammen med 12308 Kit. Se venligst produktet:

Hieff NGS™ Ultima Dual-mode mRNA Library Prep Kit -12308ES

Tilføj den passende mængde Frag/Primer Buffer i henhold til de relevante kit instruktioner til bibliotekskonstruktion.

Note

1. For din sikkerhed og sundhed skal du bære laboratoriefrakker og engangshandsker til betjening.
2. Kun til forskningsbrug.
3. Sørg for at varme op til stuetemperatur og bland godt, før du bruger de magnetiske perler, ellers kan genvindingseffektiviteten af ​​prøverne blive påvirket.
4. Operationen bør være strengt fri for RNase og nukleinsyrekontamination.
5. Når dette produkt bruges sammen med andre reagenser, skal du følge de specifikke eksperimentelle instruktioner for at betjene.
6. For at få gode oprensningsresultater skal du have god integritet af total RNA og sikre RIN-værdien >7,0.