Das Protokoll der Colitis -Drosophila -Modellierung ulcerosa unter Verwendung von Dextran -Natriumsulfat (DSS, Colitis -Grad)

Dextransulfat-Natrium (DSS) ist ein polyanionisches Derivat von Dextran, das durch Veresterung von Dextran mit Chlorsulfonsäure hergestellt wird. Durch die Fütterung von Drosophila wird die Verbindung zwischen den Epidermiszellen des Darms im Darmepithel zerstört, was zu Darmschäden führt und eine Reaktion mehrerer Wege auslöst, um die Selbsterneuerung und Differenzierung von Stammzellen zu regulieren, beschädigte Zellen aufzufüllen und die Darmhomöostase aufrechtzuerhalten.

Abb. 1 Schematische Darstellung der Teilung und Differenzierung von Darmstammzellen der Drosophila

1 Modellbau

1.1 Tiermodell

Drosophila, weiblich, 5-10 Tage;

1.2 Werkstoff

DSS(Yeasen#60316ES,MW36000-50000)

1.3 Protokoll

1. Fütterung Medium wurde mit 5%iger Saccharoselösung hergestellt;

2. Kontrollgruppe: 5 % Saccharosemedium (SC), Versuchsgruppe: 3 % DSS (Mediumpräparat);

2. Die Fliegen wurden in einem leeren Fläschchen gezüchtet, das ein Stück 2,5 x 3,75 cm großes Chromatographiepapier (Fisher) enthielt, das mit einer 5 %igen Saccharoselösung angefeuchtet war, als Nährmedium;

3. Drosophila wurde drei Tage lang bei 29 °C kultiviert, wobei die Kulturflasche täglich gewechselt wurde.

4、Nach drei Tagen Kultur wurden die Mitteldärme herauspräpariert und mit GFP- (grün) und PH3-Antikörpern (rot) immungefärbt und DRAQ5 (blau).

2 Ergebnisse

Abb. 2. Durch DSS induzierte Proliferation von ISC-Vorläuferzellen in Drosophila melanogaster [1]

Durch die Verwendung verschiedener Markierungsmethoden bei der Immunfärbung wurden die intestinalen Stammzellen (ISC) und die Proliferation von ISC-Vorläuferzellen quantifiziert, was darauf hindeutet, dass DSS im Drosophila-Modell Darmschäden verursachte.

3 Links zu dieser Ressource

[1] Fangfang Ren, et al.PNAS.2010.107 (49) 21064-21069

4 Erfolgreicher Fall für die Modellierung mit Yeasen DSS

Yeasen bietet hochwertige DSS (Cat#60316ES): Reinheit (98%), Schwefelgehalt 17-19%, freier Schwefel <0,2 %, unterstützt durch eine große Anzahl von Literaturdaten.

Tabelle 1 Konstruktion unterschiedlicher Enteritis-Modelle mit DSS

Modell

Modellierungsbeispiele

Modellierungsplan

Modellierungsergebnisse

Auswertung nutzen

akute Kolitis

BALB/c Mäuse, weiblich, 6-8 Wochen, 25 g

3%-5% DSS trinken 7 Tage hintereinander frei

Tag 5 erschien, die Länge des Dickdarms war verkürzt, HE-Färbung und die Entzündung war offensichtlich

Die Formgeschwindigkeit ist schnell und die Zeit kurz. Im Einklang mit den Eigenschaften des akuten Kolitismodells

C57BL/6 Mäuse, männlich, 8 Wochen, 20 g

3–5 % DSS durch Schlundsonde, kontinuierliche Verabreichung

Tag 5 tritt auf, Verkürzung des Dickdarms, Gewichtsverlust, Blut im Stuhl, Durchfall

Hohe Schimmelrate und kurze Dauer.Im Einklang mit den Merkmalen des akuten Colitis-Modells

chronische Kolitis

C57BL/6 Maus, männlich, 8 Wochen, 22 g

1-2 % DSS durch Schlundsonde, kontinuierliche Verabreichung

Tag 40 tritt auf, Verkürzung des Dickdarms, Gewichtsverlust, Blut im Stuhl, Durchfall

Hohe Formrate. Im Einklang mit den Eigenschaften des chronischen Kolitismodells

Dickdarmkrebs

C57BL/6 Maus, männlich, 8 Wochen, 21 g

1%-2% DSS ad libitum für 5 Tage für 3 Wochen

14 Wochen mit verkürzter Dickdarmlänge, Gewichtsverlust, HE-Färbung und offensichtlicher Entzündung

Hohe Formungsrate. Im Einklang mit den Eigenschaften des Dickdarmkrebsmodells

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Spezifikation

Dextransulfat-Natriumsalz (DSS), Colitis-Qualität, MW: 36000–50000

60316ES25/60/76/80

25 g/100 g/500 g/1 kg

Azoxymethan (AOM)

60751ES03/08/10

1 mg/5 mg/10 mg

MolPure® Stuhl-DNA-Kit

18820ES08/50/70

5 T/50 T/200 T

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