Die isotherme Nukleinsäureamplifikationstechnologie kann in viele Typen eingeteilt werden, die auf unterschiedlichen Amplifikationsprinzipien basieren. Die am weitesten verbreitete und am weitesten verbreitete Methode ist die Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP)-Technologie, die im Jahr 2000 von japanischen Wissenschaftlern wie Notomi entwickelt wurde. Das technische Merkmal von LAMP ist die Entwicklung von vier Primern, die auf sechs Regionen des Zielgens abzielen. Dabei wird eine strangverdrängende Bst-DNA-Polymerase verwendet, um die Amplifikationsreaktion bei einer konstanten Temperatur von 60 bis 65 °C durchzuführen. Dadurch wird eine 109-1010-fache Amplifikation innerhalb von 15-60 Minuten.
Die Bst-DNA-Polymerase ist das Kernenzym der isothermen LAMP-Amplifikationstechnologie. Sie verfügt über eine hohe thermische Stabilität, Strangverdrängungsaktivität und Polymeraseaktivität und ermöglicht so eine schnelle, effiziente und spezifische Amplifikation der Vorlage unter konstanten Temperaturbedingungen. Anders als bei der PCR, die zur Amplifikation thermische Denaturierungszyklen erfordert, kann das gesamte LAMP-Experiment innerhalb einer Stunde ohne die Notwendigkeit solcher Zyklen abgeschlossen werden.
Produktvorteile
Glycerinfreies Enzym, geeignet zur Gefriertrocknung
Transport bei Raumtemperatur, Kostensenkung
Starke Strangverdrängungsaktivität, empfindlich und stabil
Schnelle Rehydrierung, einfache Bedienung
Leistungshöhepunkte
01 Anwendung der Fluoreszenzfarbstoffmethode
1. Hohe Sensitivität und gute Spezifität
Im RT-LAMP-Fluoreszenzfarbstoff-Amplifikationssystem entspricht die Amplifikationsleistung des gefriergetrockneten Pulverkuchens 14405ES der des flüssigen Bst-Enzyms (einschließlich Glycerin und Glycerin-frei), und beide können 100 % bei einer Empfindlichkeit von 50 Kopien/T erkennen. Die Spezifität ist gut, ohne Nachweis in 48 Vertiefungen von NTC (Negative Template Control).
2. Gute thermisch beschleunigte Stabilität
Im RT-LAMP-Fluoreszenzfarbstoff-Amplifikationssystem wurde das gefriergetrocknete Pulver 7 Tage lang bei 45 °C, 15 Tage lang bei 45 °C und 19 Tage lang bei Raumtemperatur gelagert. Nach der thermischen Beschleunigung blieb die Produktleistung mit der der flüssigen Version des glycerinfreien Bst-Enzyms konsistent, und in der NTC (Negative Template Control) wurde kein Peak beobachtet.
3. Unterstützt das erneute Einfrieren nach der Beschleunigung
Im RT-LAMP-Fluoreszenzfarbstoffverstärkungssystem wurde das gefriergetrocknete Pulver 7 Tage lang bei 45 °C bzw. 15 Tage lang bei 45 °C gelagert. Das gefriergetrocknete Pulver wurde nach der thermischen Beschleunigungsbehandlung dann einer zweiten Gefriertrocknungsrunde unterzogen (einschließlich Einzelenzym und RT-LAMP-Reagenzien). Experimente zeigen, dass die Produktleistung nach der beschleunigten Behandlung und der zweiten Gefriertrocknung mit der der flüssigen Version des glycerinfreien Bst-Enzyms übereinstimmt und im NTC (Negative Template Control) kein Peak beobachtet wurde. Die Stabilität des Produkts ist gut und unterstützt die sekundäre Gefriertrocknung und die Beschleunigung nach der sekundären Gefriertrocknung.
02 pH Kolorimetrische Methode Anwendung
1. Hohe Sensitivität und gute Spezifität
Im kolorimetrischen Amplifikationssystem RT-LAMP pH kann die Amplifikationsempfindlichkeit des gefriergetrockneten Pulverkuchens 14405ES 50 Kopien/T erreichen (100 % Nachweisrate) und die Spezifität ist gut, ohne Nachweis in 24 Vertiefungen der NTC (Negative Template Control).
2. Gute thermisch beschleunigte Stabilität
Im kolorimetrischen Verstärkungssystem RT-LAMP pH wurde die thermisch beschleunigte Stabilität des gefriergetrockneten Pulvers 14405ES bei 45 °C für 15 Tage untersucht, die Stabilität nach sekundärer Gefriertrocknung nach Beschleunigung (Rehydrierung nach Beschleunigung bei 45 °C für 7 Tage) und die Lagerstabilität nach Rehydrierung (Lagerung bei -20 °C für 7 Tage nach Rehydrierung). Die Experimente zeigen, dass das Produkt 14405ES eine gute Stabilität aufweist, ohne Auswirkungen auf die Produktleistung nach thermischer Beschleunigung, und sekundäre Gefriertrocknung nach Beschleunigung unterstützt.
Empfohlene Produktempfehlungen
| Produkttyp | Produktfunktion | Produktname | Artikelnummer |
| RT-LAMP-Mix | Fluoreszierender Farbstoff | RT-LAMP Farbstoff Untersuchung Bausatz (UDG) Plus) | 13762ES |
| pH-Indikator | RT-LAMP pH Empfindlich Farbstoff Bausatz | 13906ES | |
| Lyophilisierbarer pH-Indikator | RT-LAMP pH Empfindlich Farbstoff Chromogen Version Gefriergetrocknet Bausatz | 13920ES | |
| Bst-Enzym | Glycerin | Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 (Einheiten/µl) | 14402ES |
| Glycerinfrei | Lyophilisiert Bst Plus DNA Polymerase (60 U/μL, Glycerinfrei) | 14405ES | |
| Puffer | Basischer Puffer (frei von Farbstoffen usw.) | 10× Hieff® Bst Plus DNA Polymerase Puffer | 15441ES |