In den letzten Jahren, mit der rasanten Entwicklung der molekularbiologischen Techniken, Auf Nukleinsäuren basierende Diagnosemethoden sind weit verbreitet und werden bei der Laboruntersuchung menschlicher Krankheiten häufig angewendet. Im Vergleich zu anderen Nukleinsäureamplifikationstechniken bietet die isothermale Amplifikation die Vorteile, schnell, effizient und spezifisch zu sein und erfordert keine spezielle Ausrüstung. Daher wird sie seit ihrer Einführung von vielen Wissenschaftlern als eine Nachweismethode angesehen, die möglicherweise mit der PCR konkurrieren könnte.

Daher ist man davon überzeugt, dass die Entwicklung und Anwendung diagnostischer Instrumente und Kits auf Grundlage der isothermen Amplifikationstechnologie eine neue Richtung für Point-of-Care-Tests (POCT) in der Molekulardiagnostik darstellen wird.

Einführung in die Prinzipien der gängigen isothermen Verstärkungstechnologien

1. Schleifenvermittelte isotherme Verstärkung

(LAMP) Technologie

Prinzip:Die Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) nutzt die Bst-DNA-Polymerase, die eine Strangverdrängungsaktivität besitzt. Sie entwickelt vier Typen spezifischer Primer, die auf sechs Regionen des Zielgens abzielen und eine effiziente, schnelle und spezifische Amplifikation der Zielsequenz unter isothermen Bedingungen ermöglichen. Die Amplifikation kann bei einer konstanten Temperatur von 60-65°C durchgeführt werden und innerhalb von 15-60 Minuten wird eine Nukleinsäureamplifikation von 10⁹ bis 10¹⁰ Zeiten erreicht werden.

Vorteile und Anwendungen:Wegen seine schnelle Reaktion, hohe Spezifität, einfache und leicht zu bedienende Ausrüstung und leicht zu interpretierende Ergebnissewurde die isotherme Amplifikation zur Erkennung von pathogene Bakterien, Parasiten, Viren, Krankheiten und gentechnisch veränderte Produkte. Es wird auch erwartet, dass es in der klinischen Diagnose von Infektionskrankheiten, der Umweltüberwachung, der Lebensmittelsicherheit und anderen Bereichen weit verbreitet sein wird. Es hat sich zu einer idealen Methode für molekulare Point-of-Care-Tests entwickelt (POCT) Plattformen.

Einstufung:LAMP-Erkennungsmethoden werden in verschiedene Typen eingeteilt, darunter Turbidimetrie, pH-Indikatormethoden, Fluoreszenzfarbstoffmethoden (wie NHB, Calcein, SYBR Green, Syto usw.) und Fluoreszenzsondenmethoden.

2. Rekombinase-Polymerase-Amplifikationstechnologie (RPA)

Prinzip:Wenn das Rekombinase-Enzym an Primer gebunden ist, bildet es einen Protein-DNA-Komplex, der nach homologen Sequenzen innerhalb doppelsträngiger DNA suchen kann. Sobald die Primer die homologen Sequenzen gefunden haben, findet eine Strangaustauschreaktion statt, die zur Bildung und Einleitung der DNA-Synthese führt, die die Zielregion auf der Vorlage exponentiell verstärkt. Der verdrängte DNA-Strang bindet an ein Einzelstrang-Bindungsprotein (SSB), um eine weitere Verdrängung zu verhindern. In diesem System wird ein Syntheseereignis durch zwei entgegengesetzte Primer eingeleitet, die in erster Linie auf den Aktivitäten der Rekombinase, des Bsu-Enzyms und des SSB-Proteins beruhen. Die Technologie kann eine schnelle Erkennung des Ziels von Interesse innerhalb von 10 bis 30 Minuten bei Temperaturen zwischen 37 und 42 °C erreichen.

Vorteile und Anwendungen:RPA bietet hohe Sensitivität, starke Spezifität, geringe Abhängigkeit von Spezialgerätenund die Fähigkeit, verschiedene Erkennungsformate zu integrieren. Es eignet sich besonders für Point-of-Care-Tests auf der Basisebene und im Feld. RPA kann in der In-vitro-Diagnostik, bei Tierkrankheiten, in der Lebensmittelsicherheit, Biosicherheit, Landwirtschaft und anderen Bereichen weit verbreitet eingesetzt werden.

Einstufung:RPA-Erkennungsmethoden werden in verschiedene Typen eingeteilt, darunter unter anderem Gelelektrophorese, EXO-Sondenmethode, FPG-Sondenmethode, Lateral-Flow-Dipstick (LF-RPA) und Flockungsanalyse.

Präsentation der Produktleistung

01 pH-empfindliche Farbstoff-RT-LAMP-Reagenzien

pH-empfindlicher Farbstoff RT-LAMP verwendet einen visuellen Farbstoff als empfindlichen Indikator unter isothermen Bedingungen von 60–65 °C, um eine einstufige RNA-Nukleinsäureamplifikation unter Verwendung eines Wasserbads mit konstanter Temperatur oder einer Standard-PCR-Maschine durchzuführen. In nur 30 Minuten kann anhand der Farbänderung nach der Reaktion festgestellt werden, ob eine Krankheitserregerinfektion vorliegt, mit intuitiveren Ergebnissen (positiv ist orange-gelb, negativ ist magenta). Diese Methode eignet sich für die schnelle Testung großer Populationen.

Empfohlene Produkte:

RT-LAMP pH-empfindliches Farbstoff-Kit (13906ES)
RT-LAMP pH-empfindliches, farbstoffchromogenes Gefriertrocknungskit (13920ES)

Leistungsschau:

1.Auswahlhilfe für RT-LAMP/RPA-Mix

Produktklassifizierung	RT-LAMP-Mischung			RPA-Mix
Produktname	RT-LAMP-Farbstoff-Testkit (UDG plus)	RT-LAMP pH-empfindliches Farbstoff-Kit	RT-LAMP pH-empfindlicher Farbstoff, chromogene Version, gefriertrocknetes Kit	Schnellsicherungsverstärker
Produktartikelnummer	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
Produktkategorie	Fluoreszierender Farbstoff	pH-empfindlicher Farbstoff	pH-empfindlicher Farbstoff	Sonde
Produktkomponenten	2 Komponenten Puffer, Enzymmischung	3 Komponenten Puffer, RT-Enzym, Bst-Enzym	4 Komponenten Puffer, RT-Enzym, Bst-Enzym, Lyoprotektivum	4 Komponenten Puffer, Enzymmischung, Magnesiumacetat
Gefriertrocknung unterstützt	NEIN	Ja, ohne Lyoprotektivum	Ja, enthält Lyoprotektivum	NEIN

2.Leitfaden zur LAMP/RT-LAMP-Enzymauswahl

Produktklassifizierung	Bst-Enzym		Reverse Transkriptase		UDG-Enzym
Produktname	Bst Plus	Lyophilisiertes Bst Plus	Ⅲ Reverse Transkriptase	III Reverse Transkriptase, Glycerinfrei	UDG	UDG, Glycerinfrei
Produktartikelnummer	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
Enzymaktivität	40 U/μL	60 U/μL	200 U/μL	600 U/μL	1 U/µL	1 U/µL
Produktkomponenten	3 Komponenten	2 Komponenten	2 Komponenten	Einkomponenten	einzel- Komponente	Einkomponenten
Gefriertrocknung unterstützt	NEIN	Ja	NEIN	Ja	NEIN	Ja

3. Leitfaden zur RPA-Enzymauswahl

Produktklassifizierung	Bsu	T4 X	T4 Y	SSB	CK	EXO
Produktname	Bsu	T4 UVSX	T4 UVS	GP 32	Kreatinkinase	Exonuklease III
Produktartikelnummer	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
Enzymaktivität	5 U/µL	2 μg/μL	2 μg/μL	5 μg/μL	2 μg/μL	100 U/μL
Produktkomponenten	Einkomponenten	Einkomponenten	Einkomponenten	Einkomponenten	Einkomponenten	2 Komponenten
Gefriertrocknung unterstützt	NEIN	NEIN	NEIN	NEIN	NEIN	NEIN