Proteinelektrophorese ist eine Proteinanalysetechnik. Proteine ​​werden in einem Puffer negativ oder positiv geladen und bewegen sich in einem elektrischen Feld, das Elektrophorese genannt wird, zur Anode. Unterschiedliche Proteinmoleküle haben unterschiedliche elektrophoretische Mobilitäten. Ein sehr wichtiger Teil der Proteinelektrophorese ist die Gelherstellung. Die herkömmliche Gelherstellung dauert oft mehrere Stunden und es gibt auch Probleme wie Flüssigkeitslecks, ungleichmäßiges Gel und Luftblasen. Zusätzlich zu den Vorbereitungsproblemen sind die Rohstoffreagenzien auch in gewissem Maße toxisch, was dem Körper des Klebstoffspenders schaden kann, und das Erscheinen von vorgefertigtem Klebstoff kann diese Probleme lösen. Was ist also das Grundprinzip der Proteinelektrophorese und was ist die Funktion und das Prinzip von vorgefertigtem Gel?

1. Was ist das Grundprinzip der Proteinelektrophorese?
2. Was ist die Funktion und das Prinzip von Fertigkleber?
3. Einführung des vorgefertigten Klebers von Yeasen
4. Häufig gestellte Fragen
5. Produktdetails

1. Was ist das Grundprinzip der Proteinelektrophorese?

Die meisten biologischen Makromoleküle wie Proteine ​​und Nukleinsäuren haben kationische und anionische Gruppen, die als Zwitterionen bezeichnet werden. Die Zonenelektrophoresemethode, bei der die Partikel in der Lösung dispergiert sind und das Stärkegel, Agar- oder Agarosegel, Polyacrylamidgel usw. als Trägermedium verwendet wird, wird als Gelelektrophorese bezeichnet. Die Polyacrylamidgelelektrophorese ist eine Elektrophoresemethode, bei der der Träger ein Polyacrylamidgel ist. Es wird angenommen, dass die Größe der Porengröße des Polyacrylamidgels kontrolliert wird, um zu polymerisieren, und die Proteine ​​durch die Wirkung eines ähnlichen Molekularsiebs getrennt werden.

Die Proteinelektrophorese umfasst zwei Formen: die native Polyacrylamid-Gelelektrophorese (Native-PAGE) und die Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE). Bei der Native-PAGE bleiben die Proteine ​​während der Elektrophorese intakt und werden in einem Gradienten auf der Grundlage ihres Molekulargewichts, ihrer Form und der damit verbundenen Ladung getrennt. Bei der SDS-PAGE werden die Proteine ​​hingegen auf der Grundlage des Molekulargewichts ihrer Untereinheiten getrennt. SDS ist ein anionisches Detergens. Als Denaturierungsmittel und Lösungsvermittler kann es intramolekulare und intermolekulare Wasserstoffbrücken aufbrechen, Moleküle falten und die Sekundär- und Tertiärstrukturen von Proteinmolekülen zerstören. Als starkes Reduktionsmittel kann Mercaptoethanol, Dithiothreitol, die Disulfidbrücken zwischen Cysteinresten aufbrechen. Nach Zugabe des Reduktionsmittels und des SDS zur Probe und zum Gel werden die Moleküle zu Polypeptidketten depolymerisiert und die depolymerisierten Aminosäureseitenketten und das SDS werden zu Protein-SDS-Mizellen kombiniert. Die negative Ladung von Protein-SDS-Mizellen übersteigt die ursprüngliche Ladung des Proteins, wodurch Ladungsunterschiede und Strukturunterschiede zwischen verschiedenen Molekülen eliminiert werden. Die Mobilität des Proteins hängt nur von der Molekülmasse des Proteins ab, und die Molekülmasse des Proteins kann durch Vergleich mit einem Standard bekannter Molekülmasse bestimmt werden.

2. Was ist die Funktion und das Prinzip von Fertigkleber?

Im Vergleich zu herkömmlichen Handgussgelen, vorgefertigten Proteingelen kann den Kontakt mit einer großen Anzahl toxischer Reagenzien vermeiden, viel Zeit sparen und das Problem großer Unterschiede bei handgegossenen Gelen effektiv lösen.

Das Gel besteht aus zwei unterschiedlichen Gelschichten, die obere Schicht ist ein Stapelgel und die untere Schicht ist ein Trenngel. Stapelgel wird auch als Stapelgel bezeichnet.Die Gelkonzentration ist relativ gering und die Porengröße relativ groß. Die Probe wird dem Sammelgel hinzugefügt und durch die Migration des Gels mit großer Porengröße in einer engen Zone konzentriert. Trenngel, auch Elektrophoresegel genannt, hat normalerweise eine kleine Porengröße, und die Auswahl der geeigneten Gelkonzentration kann eine gute Trennung der Probenkomponenten bewirken.

Trenngele können in Fixgele und Gradientengele unterteilt werden. Die Konzentration von Polyacrylamid beträgt 8 %, 10 %, 12 %, 15 %, 4 % bis 12 % und 4 % bis 20 %. Die ersten vier sind vorgefertigte Gele mit einer festen Konzentration und die letzten beiden sind Gradientengele. Die Konzentrationen stellen den Bereich der isolierten Proteinmolekulargewichte dar. Gelgradienten werden durch Gradientenmischer gebildet. Eine hochkonzentrierte Acrylamidlösung wird auf die Glasplatte gegeben, dann nimmt die Konzentration der Lösung in einem Gradienten ab und die Porengröße des Gels ist oben größer und unten kleiner. Das Fixiergel kann Proteine ​​nur innerhalb seines Trennbereichs trennen, weder zu groß noch zu klein. Gradientengele haben diese Einschränkung nicht, hier werden große Moleküle oben und kleine Moleküle unten getrennt. Da die Porengröße des Gradientengels allmählich kleiner wird, hat es eine konzentrierende Wirkung auf das Protein in der Nähe der Porengröße, die das Protein nicht durchdringen kann, sodass nach der Elektrophorese eine sehr schmale Zone entsteht. Proteine ​​mit kleinen Unterschieden im Molekulargewicht können auf Fixgelen oft nicht getrennt werden, auf Gradientengelen jedoch aufgelöst werden.

3. Einführung des vorgefertigten Klebers von Yeasen

JASEN Fertiges Protein Plus Gel enthält Gradientenkonzentration und feste Konzentration, eine Vielzahl unterschiedlicher Konzentrationen kann den Anforderungen unterschiedlicher Proteinelektrophoresen gerecht werden. Es wird durch ein einzigartiges Gelherstellungsverfahren hergestellt und hat eine hervorragende elektrophoretische Wirkung. Es ist mit allen Arten von Elektrophoresetanks auf dem Markt kompatibel (Bio-RAD, Tanon, Life usw.) und bietet die Vorteile einer breiten Anpassungsfähigkeit, hohen Auflösung, hohen Stabilität, klaren und gleichmäßigen Bändern usw.

3.1 Jaen Fertiges Protein Plus Gel Upgrade auf ein Kunststoffbrett, bessere Qualität!

Einfache Anwendung: sofort einsatzbereit; einfach das Klebeband von der Unterseite der Kunststoffplatte abziehen

Breites Anwendungsspektrum: kompatibel mit denaturiertem Protein und natürlichem Protein

Klares Band: Durch die spezielle Behandlung der Kunststoffplatten wird die Proteinadsorption erheblich reduziert

Zeitsparend: Das Experiment kann in 18 Minuten abgeschlossen werden, im schnellsten

Qualitätssicherung: strenge Gewährleistung der Stabilität zwischen den Chargen

Lange Haltbarkeit: kann bei 4℃ gelagert werden für 12 Monate

3.2 Die folgenden Parameter können Ihnen bei der Auswahl der geeigneten Gelserie helfen

Elektrophorese-Puffersystem: denaturierter Protein-Laufpuffer oder natürlicher Protein-Laufpuffer

Anzahl der Vertiefungen und Probenbeladung: 10 oder 15 Vertiefungen, die maximale Probengröße betrug 70 μL bzw. 40 μL

Gelkonzentration: 8%, 10%, 12%, 15%, 4%-12%, 4%-20%

Tabelle 1.Gelkonzentration und Bereich der linearen Trennung

3.3 Daten anzeigen

Abbildung 1. Daten zeigen

Abbildung 2. Daten zeigen

4. Häufig gestellte Fragen

F1: Müssen die vorgefertigten Gel bei 4 °C stehen lassen? Macht es etwas, wenn man es eine Weile bei Zimmertemperatur stehen lässt?

A: Empfohlene 4 °C, kann 12 Monate gelagert werden. Nicht unter 0 °C lagern, kann 30 Tage bei Raumtemperatur (25 °C) gelagert werden.

F2: Wie wählt man zwischen Gradientenkonzentration und fester Konzentration? Was ist das minimale Molekulargewicht von Protein, das durch vorgefertigte Gel?

A: Die Größe der Proteinabtrennung durch die vorgefertigten Gel hängt mit seiner Konzentration zusammen und der entsprechende Trennbereich ist in der Abbildung oben dargestellt.

Feste Konzentration vorgefertigt Gel hat eine bessere Auflösung. Gradientenkonzentration vorgefertigt Gel hat einen größeren Trennbereich und ein breiteres Anwendungsspektrum; Kunden sollte die geeignete Konzentration entsprechend den eigenen Bedürfnissen wählen.

Unsere Fertigteile mit 4–20 % Steigung Gel (Kat.-Nr. 36250, Kat.-Nr. 36256) verfügt über einen weiten Trennbereich für Proteine ​​bis hinunter zu 3,5 kDa.

Abbildung 3. Gefällefertigteile Geldaten

F3: Ist der vorgefertigte Gel muss mit deinem Spezialpuffer ausgestattet werden? Kannst du deinen Puffer herstellen?

A: YEASEN Spezialpuffer (Cat#36236, Cat#36237) und Fertigteile Gel-Anwendbarkeit sind besser. Nicht mit anderen Puffern mischen. Der Puffer kann durch den Kauf von Reagenzien hergestellt werden, aber Kunden müssen Sie unsere Formel verwenden, die Sie in den entsprechenden Fertigteilen finden Gel-Anweisungen.

F4: Wie unterscheidet man Trenngele und konzentriertes Gel? Ist es für die Sektionsspannungselektrophorese notwendig?

A: Die beiden Komponenten sind gleich, aber die Konzentration ist nicht gleich. Mit bloßem Auge ist eine Unterscheidung nicht möglich. Die Höhe des konzentrierten Klebers beträgt 1,5 cm.

Nein, es wird eine Elektrophorese bei 150 V empfohlen und für die Durchführung des Experiments sind 30–40 Minuten erforderlich.

F5: Ist Ihr Fertigteil Ist das Gel für alle auf dem Markt erhältlichen Elektrophoresetanks geeignet?

A: Ja, unsere Fertigteile Gel ist für alle Arten von Elektrophoresetanks auf dem Markt geeignet,

Bio-rad Mini-Protean (II/3 /Tetra-System) und Tanon VE180 (Beachten Sie die umgekehrte Montage des Dichtungsstreifens);

Life Technology Novex Mini-Zelle (mit spezieller Blende verwendet);

Andere Gelplattenbreite im 10 cm Elektrophoresetank.

5. Produktdetails

Die von Yeasen bereitgestellten Produkte sind wie folgt:

Tabelle 2.Produktdetails