— Bringen Sie Ihre Löschmembran zum Leuchten, direkt an Ihren Fingerspitzen!
ECL-Reagenzien, bekannt als chemilumineszierende Substrate für Meerrettichperoxidase (HRP), sind derzeit die empfindlichsten Reagenzien, die bei der Western-Blot-Erkennung verwendet werden. Zu den üblichen Problemen mit ECL-Reagenzien auf dem Markt zählen Quenching, hoher Hintergrund, Instabilität und Schwierigkeiten bei der Erkennung von Proteinen mit geringer Häufigkeit, was die endgültigen Versuchsergebnisse beeinträchtigen kann.
Produkteigenschaften
- Hervorragende Empfindlichkeit — Nachweis von Antigenen vom Pikogramm- bis zum niedrigen Femtogramm-Bereich.
- Höheres Signal-Rausch-Verhältnis — Präzise leuchtende Substrate reduzieren Hintergrundgeräusche.
- Höhere Antikörper-Effizienz — Optimierte Substratsysteme für höhere Antikörperbindungsaffinität.
- Gutes Preis-Leistungs-Verhältnis — Mehr Leistung zum kleineren Preis.
- Ausgezeichnete Stabilität — Neue Oxidationsmittel gewährleisten eine stabile Lagerung bei 4 °C für bis zu einem Jahr.
Produktprinzip
Das Kernprinzip der ECL-Reagenzdetektion ist die Lumineszenz aus Oxidationsreaktionen: Luminol, der Hauptbestandteil des lumineszierenden Substrats, wird unter alkalischen Bedingungen durch H2O2 oxidiert, wobei Meerrettichperoxidase (HRP) katalytisch oxidiert wird. Dabei entsteht ein angeregtes Zwischenprodukt aus 3-Aminophthalsäure. Bei der Rückkehr in den Grundzustand werden Photonen mit einer maximalen Emissionswellenlänge von 425 nm emittiert. Diese Photonensignale können mit Röntgenfilmen oder CCD-Bildgebungsgeräten erfasst werden.
Auswahlhilfe
Also, welches Produkt sollten Sie für Ihr Experiment wählen?
Tabelle 1.Leitfaden zur ECL-Reagenzienauswahl
| | Erweiterter ECL Erweiterter Typ | Super ECL Ultraempfindlicher Typ | SuperDura Langlebiger Typ | MaxiSignal Typ mit ultrahoher Empfindlichkeit |
| Anwendbare Beispiele | Ziel mit hoher Häufigkeit, routinemäßigen Proteinproben | Ziel mit geringer Häufigkeit, begrenzte Proben | Ziel mit geringer Häufigkeit, begrenzte Proben | Ziel mit äußerst geringer Häufigkeit, wertvolle Proben |
| Erkennungsempfindlichkeit | Mittlerer Pikogramm-Level | Niedriger Pikogrammwert | Mittleres Femtogramm | Niedriger Femtogrammwert |
| Signaldauer | < 2 Std. | < 12 Std. | < 24 Std. | < 8 Std. |
| Anwendbares Erkennungssystem | Alle Reagenzien sind für Röntgenfilme und CCD-Bildgebungsgeräte geeignet | |||
| Primäre Antikörperverdünnungskonzentration | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10.000 | 1:1000-1:50.000 | 1:5000-1:100.000 |
| Sekundäre Antikörperverdünnungskonzentration | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10.000
| 1:50.000-1:250.000 | 1:100.000-1:500.000 |
| Empfohlene Membran | NC-Membran | NC-Membran oder PVDF-Membran | NC-Membran oder PVDF-Membran | NC-Membran oder PVDF-Membran |
| Lagerstabilität | Raumtemperatur für 1 Jahr | 4°C für 1 Jahr, Raumtemperatur für ein halbes Jahr | ||
| Vorteile | Stärkstes Signal bei gleicher Empfindlichkeit | Höchstes Preis-Leistungs-Verhältnis, geeignet für die meisten WB-Experimente | Längste Signaldauer, hervorragend geeignet für Mehrfachbelichtungen | Ausgezeichnete Empfindlichkeit, hervorragend geeignet für den Spurenproteinnachweis |
Hinweis: Die empfohlene Antikörperverdünnungskonzentration basiert auf einer Antikörperstammkonzentration von 1 mg/ml.
Produktanwendung
Abbildung 1. Vergleich der Erkennungseffekte zwischen
Abbildung 2. Vergleich der Erkennungseffekte zwischen dem
Abbildung 3.Vergleich der Erkennungseffekte zwischen dem
Veröffentlichte Literatur
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Leucin-tRNA-Synthase-2-exprimierende B-Zellen tragen zur Immunevasion von Darmkrebs bei. Immunität. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Wu Z, Liu D, Pan D, et al. Struktur und Konstruktion des Miniatur-Acidibacillus sulfuroxidansCas12f1[J].Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. Makrophage IRX3 fördert ernährungsbedingte Fettleibigkeit und metabolische Entzündungen. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (WENN:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G, et al. Steuerung hippocampaler Rhythmen und des Gedächtnisses durch synaptische Plastizität in hemmenden Interneuronen. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
Preisvorteil
Abbildung 7.Preisvergleich von
Häufig gestellte Fragen
| Aufgetretene Probleme | Ursachenanalyse | Empfohlene Lösungen |
| Der Film hat umgekehrte Bilder | Der Film hat umgekehrte Bilder | Der Film hat umgekehrte Bilder |
| Der Film hat braune oder gelbe Streifen | ||
| Fluoreszenzlöschung | Die Betriebszeit ist zu lang, die Membran trocknet allmählich | Verhindern Sie das Austrocknen der Membran |
| Verunreinigung von Plastikfolie, Entwickler oder Fixierer | Entwickeln Sie gute experimentelle Gewohnheiten | |
| Unzureichendes HRP im Reaktionssystem | Erhöhung des HRP-markierten Materials | |
| Keine Bänder oder schwaches Signal auf dem Film | Geringe Übertragungseffizienz | Verbessern Sie die Übertragungseffizienz, verwenden Sie vorgefärbte Marker zur Beurteilung |
| Unzureichendes oder nicht übereinstimmendes Antigen/Antikörper | Antigen-/Antikörpermenge erhöhen oder geeignetes Antigen/Antikörper auswählen | |
| Probleme mit Röntgenfilmen | Wenn der Röntgenfilm nach der Belichtung vollständig schwarz (nicht transparent) ist, ist der Film vollständig belichtet. Verwenden Sie einen neuen Röntgenfilm. | |
| Probleme von Entwicklern/Behebern | Belichten Sie einen Film vorab, um ihn zu prüfen. Wenn Probleme auftreten, ersetzen Sie ihn durch einen neuen Entwickler/Fixierer. | |
| Überschüssiges HRP im Reaktionssystem | Verdünntes HRP-markiertes Material | |
| Hoher Hintergrund | Primäre und sekundäre Antikörperkonzentrationen zu hoch | Antikörperkonzentration reduzieren, Blockierungszeit verlängern |
| Antikörper nicht gründlich gereinigt | Erhöhen Sie die Anzahl der Wäschen | |
| Unvollständige Blockierung | Blockierungsbedingungen optimieren | |
| Falsches Blockierungsmittel verwendet | Verwenden Sie ein anderes Blockierungsmittel | |
| Sehr ausgesetzt | Belichtungszeit verkürzen | |
| Schlechte Antikörperspezifität | Ersetzen durch hochwertige Antikörper | |
| Überschüssiges HRP im Reaktionssystem | Verdünntes HRP-markiertes Material | |
| Bands mit leeren Stellen | Hohe Konzentration an Antigen und Sekundärantikörper | Verdünnen Sie die Probe und führen Sie das Gel erneut aus, oder kühlen Sie die gemischte chromogene Lösung und tragen Sie sie für eine sofortige schnelle Entwicklung auf die Membran auf. |
| Unregelmäßige Bandform | Luftblasen während der Übertragung oder ungleichmäßige Hydratisierung mit Methanol (bei PVDF-Membranen) | Transferbedingungen optimieren. |
| Filmspots | Aggregate aus HRP-markiertem Material | Filtern Sie HRP-markiertes Material mit einer 0,2 μm Membran |
| Unspezifische Banden | Überschüssiges HRP im Reaktionssystem | Verdünntes HRP-markiertes Material |
| SDS verursacht unspezifische Proteinbindung | Verwenden Sie kein SDS im Versuchsverfahren | |
| Schlechte Antikörperspezifität | Ersetzen durch hochwertige Antikörper | |
| Unzureichende Blockierung | Erhöhen Sie die Blockierungszeit oder verwenden Sie ein anderes Blockierungsmittel |
Bestellinformationen
| Produktname | Produktnummer | Spezifikation |
| Super-ECL-Nachweisreagenz | 36208ES60/76 | 100 ml/50 ml |
| Verbessertes ECL-Chemilumineszenz-Substrat-Kit | 36222ES60/76 | 100 ml/500 ml |
| SuperSignal SuperDura Substrat mit verlängerter Lebensdauer | 36223ES10/60/70/76 | 10 ml/100 ml/200 ml/500 ml |
| SuperSignal MaxiSignal Substrat mit maximaler Empfindlichkeit | 36224ES10/60/70/76 | 10 ml/100 ml/200 ml/500 ml |