Queridos amigos, ¿se sienten perdidos cuando se enfrentan a varios anticuerpos de control de carga y de marcado de epítopos durante la inmunotransferencia de proteínas? Las proteínas están codificadas por genes de mantenimiento de los organismos y se expresan de forma estable en múltiples tejidos. Se utilizan para verificar si los experimentos inmunológicos se están desarrollando con normalidad y como un estándar de detección semicuantitativo para la expresión de proteínas. Entonces, ¿cómo elegir correctamente los anticuerpos de control de carga? Puede consultar los siguientes puntos.
I. Origen de las especies de muestra
- Para muestras de tejidos o células de mamíferos, generalmente elija β-actina, α-tubulina, GAPDH, Lamin-B, Histona H3, Na+/K+-ATPasa.
- Para muestras derivadas de plantas, generalmente elija actina vegetal, Rubisco, etc.
- Para otras muestras con menos investigación, elija la proteína adecuada como referencia interna consultando literatura o bases de datos relevantes.
Asegúrese de que el peso molecular de la proteína objetivo sea diferente al del control de carga. por más de 5KDa para evitar interferencias durante la detección. Por ejemplo, si la proteína objetivo es de 40KDa, no es adecuado elegir β-actina (42KDa) como control de carga. Considere usar GAPDH (36KDa) o β-tubulina (55KDa) como control de carga.
III. Sitio de expresión de la proteína de referencia interna
Nota: Evite las siguientes situaciones al utilizar anticuerpos de control de carga
| Localización subcelular | Proteína de control de carga | Peso molecular (KDa) | Notas |
| Citoplasma, célula entera | β-actina | 42 | No apto para extractos nucleares. La β-actina es un componente de los complejos de remodelación de la cromatina; puede no ser adecuado para situaciones en las que existen diferencias de edad significativas entre los sujetos de investigación. |
| α-tubulina | 55 | No es adecuado para situaciones en las que existen diferencias significativas de edad entre los sujetos de investigación. La expresión de tubulina cambia con los fármacos antimicrobianos y antimitóticos, por lo que no es adecuado cuando se añaden fármacos anticancerígenos y antifúngicos. | |
| β-tubulina | 55 | ||
| Asociación de Padres de Personas con Discapacidad (APDH) | 36 | La hipoxia celular hará que la expresión de GAPDH aumente, por lo que no es adecuada para estudios relacionados con el oxígeno. Factores como la diabetes pueden provocar un aumento de la expresión de GAPDH. | |
| Vinculina | 117 | Se puede consultar para proteínas de gran peso molecular. | |
| Mitocondrias | Serie COXIV | 15-17 | Esta serie de proteínas se concentra principalmente en 15-17 kDa. Si el peso molecular de la proteína objetivo es cercano, considere otros anticuerpos de control de carga. |
| HSP60 | 60 |
| |
| Núcleo | VDAC1/2 | 31-37 | Esta serie de proteínas se concentra principalmente en 31-37 KDa. |
| Lámina B1 | 66 | No apto para células madre embrionarias, no apto como control de carga. en experimentos de apoptosis. | |
| PCNA | 36 | No apto para células no proliferantes. | |
| PPP | 33-43 | La TBP es de 37-43 KDa en humanos y de 33-36 KDa en ratones y ratas, no siendo adecuada para experimentos de apoptosis. | |
| Año 1 | 65-70 |
| |
| Histona H3 | 17 | La mayoría de las proteínas tienen un peso molecular de aproximadamente 17 kDa. Si el peso molecular de la proteína objetivo es cercano, considere otros anticuerpos de control de carga. | |
| Sangre entera, suero, plasma | Transferrina | 77 | La expresión se ve afectada por ciertos estados patológicos y tratamientos, como el ácido retinoico. |
| Albúmina | 66 | El contenido es extremadamente alto, preste atención a reducir la carga de muestra en los experimentos WB. |
Los anticuerpos de etiqueta funcionan mejor cuando se usan juntos
En experimentos que estudian las interacciones entre proteínas, como el pull-down, las etiquetas de epítopos se pueden fusionar al extremo N o C de la proteína objetivo mediante métodos de biología molecular. Las etiquetas de epítopos que se utilizan habitualmente son His, HA, Myc y GST. Estas etiquetas de epítopos normalmente no afectan a la actividad biológica ni a la localización intracelular de la proteína objetivo. La aparición de las etiquetas de epítopos ha proporcionado comodidad para la investigación científica y la producción industrial.
| Etiqueta de epítopo | Secuencia de etiquetas | Peso molecular (KDa) |
| Etiqueta HA | YPYDVPDYA | 1.1 |
| Etiqueta Myc | EQKLISEEDL | 1.2 |
| Etiqueta de bandera | Dime, dime | 1 |
| Etiqueta GST | - | 26 |
| Etiqueta GFP | - | 26.9 |
| Etiqueta V5 | GKPIPNPLLGLDST | 1.4 |
| Ciervo | KETAAAKFERQHMDS | 1.8 |
| Etiqueta electrónica | GAPVPYPDPLEPR | 1.4 |
Información del producto
| Tipo | Nombre del producto | Peso molecular (KDa) | Número de producto |
| Anticuerpo de control de carga | β-actina, mAb de ratón | 42 | 30101ES |
| β-actina, pAb de conejo | 42 | 30102ES | |
| GAPDH (clon: 1A6), mAb de ratón | 36 | 30201ES | |
| GAPDH, pAb de conejo | 36 | 30202ES | |
| α-Tubulina, anticuerpo monoclonal de ratón | 50-55 | 30304ES | |
| β-Tubulina, mAb de ratón | 50-55 | 30301ES | |
| β-Tubulina, pAb de conejo | 50-55 | 30302ES |