Introducción
Los kits de análisis del gen reportero de la luciferasa, como herramienta fundamental indispensable en el desarrollo de fármacos, desempeñan un papel crucial en procesos clave como el cribado de alto rendimiento, la evaluación de la eficacia y la validación de objetivos debido a su capacidad para controlar la expresión génica y la transducción de señales en tiempo real. La aplicación de esta tecnología ha mejorado significativamente la eficiencia del cribado y la evaluación de fármacos, acelerando el descubrimiento y el desarrollo de nuevos fármacos.
Principio de detección del gen reportero de la luciferasa
La tecnología de detección del gen reportero de la luciferasa permite el análisis cuantitativo de la actividad de la luciferasa de la luciérnaga al catalizar la oxidación de la luciferina a oxiluciferina y generar bioluminiscencia. Esta tecnología tiene un valor de aplicación significativo en los campos de la validación del gen diana de miRNA y la regulación de la actividad transcripcional del promotor. Al insertar elementos reguladores del gen diana antes y después del gen de la luciferasa para construir un plásmido reportero de la luciferasa, las células pueden ser transfectadas y sometidas a la estimulación o tratamiento correspondiente. Posteriormente, al lisar las células y medir la actividad de la luciferasa, se pueden evaluar los cambios de actividad de los elementos reguladores en diferentes condiciones de estimulación, obteniendo así una comprensión más profunda de los mecanismos reguladores de la actividad génica. expresión.
Diferencias entre las aplicaciones de detección de luciferasa simple y dual
Los ensayos de genes reporteros se dividen principalmente en ensayos de genes reporteros de luciferasa única y ensayos de genes reporteros de luciferasa dual. En aplicaciones específicas, ¿cómo se puede determinar si el experimento utiliza un sistema de detección de luciferasa única o dual? Echemos un vistazo a las diferencias.
Sistema de ensayo con un solo reportero de luciferasa
Número de genes reporteros: Un solo gen reportero de luciferasa de luciérnaga;
Tipo de transfección: Un plásmido con un solo gen reportero, después de la transfección, se utiliza la selección de fármacos para construir una línea celular con un gen reportero estable que expresa luciferasa;
Proceso de detección: Solo es necesario detectar la señal de luciferasa de luciérnaga, operación simple, período de detección corto, adecuado para detección de drogas de alto rendimiento;
Análisis de escenarios de aplicación: Generalmente, se trata de la construcción de una línea celular monoclonal de sobreexpresión estable, ya que el nivel de expresión de estas líneas celulares es relativamente estable y uniforme, sin la influencia de variaciones experimentales debido a la eficiencia de la transfección y la viabilidad celular. La operación es simple y, dado que solo se detecta la señal de la luciferasa de luciérnaga, el análisis de datos es más conveniente. Junto con las ventajas del corto tiempo de detección, es particularmente adecuado para el cribado de fármacos de alto rendimiento y satisface las necesidades de detección de muestras a gran escala.
Sistema de detección de genes reporteros de doble luciferasa
Cantidad de genes reportada: Genes reporteros duales de la luciferasa de luciérnaga y la luciferasa de Renilla;
Tipo de transfección: Cotransfección de dos plásmidos de genes reporteros, principalmente a través de transfección transitoria;
Proceso de detección: Es necesario detectar primero la señal de luciérnaga y luego la señal de Renilla, y la relación de las dos (Firefly/Renilla) se utiliza para el cálculo de los datos finales;
Análisis de escenarios de aplicación: Generalmente se realiza mediante transfección transitoria, con la cotransfección de un plásmido que contiene el gen de la luciferasa de Renilla como referencia interna, proporcionando un punto de referencia para el experimento, reduciendo así la interferencia de factores externos como la viabilidad celular y la eficiencia de la transfección. A través del cálculo de la proporción, es posible corregir las variaciones en el número de células, la eficiencia de la transfección y la actividad celular, mejorando la precisión de los resultados experimentales. Es una herramienta importante en los campos de la regulación de la expresión génica, las vías de transducción de señales y el cribado de fármacos.
Serie de productos
Yeasen La serie de productos de detección del gen indicador de luciferasa proporciona una solución de detección cuantitativa conveniente y eficiente. El diseño de un solo componente simplifica el proceso de uso y la combinación perfecta de alta sensibilidad con una vida media de señal superlarga de 5 horas satisface las necesidades de detección de drogas a gran escala. Ofrecemos tres productos: Bio-One Step, Steady-One Step y Bright-One Step, para adaptarnos a diferentes requisitos de sensibilidad y estabilidad.
| Nombre del producto | Bio-Un Paso | Un paso firme | Un paso brillante |
| Código del producto | |||
| Escenarios de aplicación y Características | Este kit logra un equilibrio relativo entre la intensidad de la señal y la estabilidad. Mantiene una intensidad de señal relativamente alta y, al mismo tiempo, la mantiene relativamente estable durante un período de tiempo determinado. | La vida media puede durar más de 5 horas. Especialmente durante las primeras 2 horas, los cambios en el valor de luminiscencia son mínimos. Es adecuado para ensayos de ultra alto rendimiento o en placas de 384 pocillos. | Alta sensibilidad y alta intensidad de señal. Adecuado para experimentos que requieren alta sensibilidad. |
| Vida media de la señal | 60 minutos | 5 horas | 30 minutos |
| Características operativas | Un paso | Un paso | Un paso |
Ventajas del producto
Larga vida media de la señal: La vida media de la señal puede alcanzar hasta 5 horas, satisfaciendo las necesidades de experimentos de alto rendimiento y evitando diferencias de señal causadas por la diferencia de tiempo entre el primer y el último pocillo debido a una gran cantidad de muestras, lo que garantiza resultados más estables y confiables.
Fuerte señal de fluorescencia: El valor de la señal puede alcanzar 8 órdenes de magnitud, lo que proporciona una amplia ventana de detección y un sólido respaldo de datos para la detección temprana de fármacos y la evaluación de su eficacia.
Fácil manejo: La operación en un solo paso evita procedimientos experimentales complicados. Simplemente agregue el reactivo de detección y espere 5 minutos antes de poner en marcha la máquina para la detección.
Opciones múltiples: Según los diferentes escenarios de aplicación, hay 3 productos diferentes disponibles, que se pueden seleccionar según los requisitos experimentales de valor de señal y estabilidad de señal.
Datos del producto
01 Comparación de rendimiento de Yeasen Gen reportero diferente Kits de ensayo
La verificación de tres tipos de kits de ensayo Se realizó en líneas celulares que expresaban de forma estable la luciferasa de luciérnaga, y los resultados mostraron que el producto Bright-One Step tiene valores de señal más altos; el producto Steady-One Step tiene una vida media de señal más larga y señales más estables; el producto Bio-One Step no solo tiene valores de señal altos sino que también mantiene una vida media de señal más larga.
Figura 1. Comparación del rendimiento de diferentes kits de análisis del gen reportero Yeasen
02 Comparación del reactivo de detección del gen reportero de luciferasa Yeasen Bio-One Step con productos de la competencia
Al utilizar Yeasen Bio-One Step, el competidor P y el competidor V en una línea celular que sobreexpresa de manera estable la luciferasa de luciérnaga, los resultados muestran que el valor de la señal y la vida media de la señal de Yeasen Bio-One Step son esencialmente consistentes con el competidor P, y la vida media de la señal es superior a la del competidor V.
Figura 2. Comparación del reactivo de detección del gen reportero de luciferasa Yeasen Bio-One Step con sus competidores
03 Prueba de estabilidad de congelación y descongelación del reactivo de detección del gen reportero de luciferasa Bio-One Step de Yeasen
El reactivo de detección del gen reportero de luciferasa Yeasen Bio-One Step se ha sometido a repetidos experimentos de congelación y descongelación, y los resultados muestran que incluso después de 5 ciclos de congelación y descongelación, el rendimiento del producto permanece estable sin cambios significativos.
Figura 3.Prueba de congelación y descongelación repetida del reactivo de detección del gen reportero de luciferasa Yeasen Bio-One Step
Procedimiento operativo
01 Transfección celular
Agregue directamente el reactivo a la suspensión celular, luego pipetee hacia arriba y hacia abajo 5 veces para asegurar una mezcla completa, espere 5 minutos para permitir la lisis celular completa.
02 Carga de muestra
Pipetee 100 μL de la mezcla (reactivo de detección + medio de cultivo celular) en cada pocillo de la placa de detección.
03 Detección de fluorescencia
Establezca los parámetros en el lector de placas. Coloque la placa de detección en el lector de placas, hágala vibrar durante unos segundos y luego proceda con la detección.
Lista de productos
| Categoría de producto
| Nombre del producto | Código del producto | Especificaciones del producto |
| Kit de análisis del gen reportero de la luciferasa | 11411ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | |
| 11413ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| 11412ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| Kit de análisis del gen reportero de luciferasa dual
| 11402ES60/80 | 100 toneladas/1000 toneladas | |
| 11405ES60/80 | 100 toneladas/1000 toneladas |