--El kit de ensayo TUNEL de Yeasen muestra una fluorescencia más hermosa
La unión de la fluoresceína-dUTP al ADN mellado por la transferasa TdT es uno de los métodos más comunes para detectar la apoptosis; por ejemplo, el kit de muerte celular in situ de Roche se basa en este principio. La actividad de la transferasa TdT en el producto afecta directamente a la eficiencia del marcaje. Yeasen Biologicals, que se basa en la producción de enzimas, se esfuerza por desarrollar productos de alta calidad basados en enzimas y ha lanzado tres ensayos Tunel marcados con fluoresceína (Alexa Fluor 640, Alexa Fluor 488 y FITC) para satisfacer los altos requisitos de calidad de nuestros clientes.
Actualmente, más de 120 grupos de investigación utilizan este producto y han publicado numerosos artículos en inglés en revistas de prestigio, como Theranostics y EMBO Molecular Medicine.
Mecanismo de detección
En la etapa tardía de la apoptosis, las roturas de doble cadena o de cadena simple del ADN cromosómico producen una gran cantidad de extremos 3-OH pegajosos y, bajo la acción de la transferencia terminal de desoxirribonucleótido (TdT), el dUTP marcado con fluoresceína/enzima se une al extremo 3-terminal del ADN, de modo que la detección de la apoptosis se puede lograr a través de la detección de fluorescencia, lo que se conoce como etiquetado de extremos de mella mediado por transferasa terminal de desoxirribonucleótido. Este método se llama etiquetado de extremos de mella mediado por transferasa terminal de desoxirribonucleótido (TUNEL), y el principio se muestra en la Figura 1.
Figura 1: Diagrama esquemático del etiquetado de extremos de níquel mediado por la desoxinucleotidil transferasa terminal (TUNEL)
Características del producto
- Amplia gama de aplicaciones
Se puede utilizar para secciones de tejido incluidas en parafina, secciones de tejido congelado, células cultivadas y células aisladas de tejidos.
- Alta sensibilidad de detección
Se puede detectar una cantidad muy pequeña de células apoptóticas.
- Baja interferencia de fondo
Alta relación señal/ruido.
- Versatilidad de observación
Observación mediante microscopía de fluorescencia, detección de flujo continuo.
Presentación de datos
1. Ensayo de túnel de preadipocitos de ratón (3T3-L)
Figura 2: Detección de apoptosis de 3T3-L en preadipocitos de ratón. La primera fila representa el control negativo y la segunda fila representa el control positivo. Reactivo de detección: Kit de detección de apoptosis TUNEL (FITC) n.º de cat. 40306
2. Detección de túneles en muestras de secciones de parafina
Figura 3: LY3009120 solo o en combinación con Vemurafenib y Obatoclax retrasó eficazmente el cáncer de tiroides en un modelo de tumor de injerto subcutáneo. IF=8,8. Tipo de muestra: tejido tumoral embebido en parafina (tomado de ratones desnudos). Reactivo de detección: Cat No. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488).
3. Detección de túneles de rastreo de células
Figura 4: Efecto del sulfato de zinc sobre la apoptosis de células endoteliales en diferentes subgrupos. Tipo de muestra: HUVEC (células endoteliales de la vena umbilical humana). Reactivo de detección: Cat. n.º 40308 Kit de detección de apoptosis TUNEL (Alexa Fluor 640)
4. Citometría de flujo para detectar apoptosis
Figura 5: El tratamiento con PA puede reducir eficazmente la aparición de apoptosis durante la reprogramación. IF=3,7. Tipo de muestra: células iPS. Reactivo de detección: Cat No. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488).
Cita de literatura
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Preguntas frecuentes
P: ¿Aparición de marcado fluorescente no específico?
1) Los propios tejidos o células tienen altos niveles de actividad de nucleasas o polimerasas, lo que puede provocar fácilmente la aparición de marcadores fluorescentes no específicos, como en las células musculares lisas. La solución es fijar las células o los tejidos inmediatamente después de su extracción y fijarlos lo suficiente para evitar que estas enzimas provoquen falsos positivos.
2) El uso de fijadores inadecuados, como algunos fijadores ácidos, da lugar a falsos positivos. Se recomienda utilizar un fijador de paraformaldehído neutro al 4 % recién preparado.
3) También puede producirse fluorescencia no específica cuando el tiempo de reacción del ensayo TUNEL es demasiado largo y la superficie de la célula o el tejido no se puede mantener húmeda. Controle el tiempo de reacción y asegúrese de que la solución de reacción del ensayo TUNEL cubra bien la muestra.
P: ¿El fondo de fluorescencia es muy alto?
1) Las células que se dividen y proliferan a un ritmo elevado, con altos niveles de transcripción, a veces también muestran roturas de ADN en el núcleo.
2) La exposición prolongada a la luz de excitación conduce a falsos positivos.
P: ¿Baja eficiencia de etiquetado?
1) La fijación con etanol o metanol produce una baja eficiencia de etiquetado.
2) El tiempo de fijación es demasiado largo, lo que da lugar a un grado de reticulación demasiado elevado. Es recomendable reducir el tiempo de fijación.
3) La sección de tejido es demasiado gruesa, lo que hace que el efecto de fijación sea insatisfactorio y es mejor controlarlo dentro de los 10 μm.
(4) Extinción de la fluorescencia: la fluorescencia se extingue gravemente en 10 minutos de luz normal. La solución es evitar el funcionamiento con luz.
Detalles del producto
| Nombre del producto | Artículo Nro. | Especificación |
| Kit de detección de apoptosis con anexina V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20 toneladas/50 toneladas/100 toneladas |
| 40302ES20/50/60 | 20 toneladas/50 toneladas/100 toneladas | |
| Kit de detección de apoptosis con anexina V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20 toneladas/50 toneladas/100 toneladas |
| 40303ES20/50/60 | 20 toneladas/50 toneladas/100 toneladas | |
| Kit de detección de apoptosis Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD | 40313ES60 | 100 toneladas |
| 40305ES20/50/60 | 20 toneladas/50 toneladas/100 toneladas | |
| 40304ES20/50/60 | 20 toneladas/50 toneladas/100 toneladas | |
| Kit de detección de apoptosis Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD | 40312ES20/50/60 | 20 toneladas/50 toneladas/100 toneladas |
| 40306ES20/50/60 | 20 toneladas/50 toneladas/100 toneladas | |
| 40307ES20/50/60 | 20 toneladas/50 toneladas/100 toneladas | |
| 40308ES20/50/60 | 20 toneladas/50 toneladas/100 toneladas |