Mitocondrias
Las mitocondrias son las fábricas de energía de la célula, el sitio principal de la fosforilación oxidativa intracelular y la síntesis de trifosfato de adenosina (ATP), que proporciona energía para las actividades celulares. El 95% de la energía requerida para las actividades de la vida celular proviene de las mitocondrias. Además de suministrar energía a las células, las mitocondrias también participan en procesos como la diferenciación celular, la transferencia de información celular y la apoptosis, y poseen la capacidad de regular el crecimiento celular y el ciclo celular. Por lo tanto, ensayos como las mitocondrias y las membranas mitocondriales son una parte esencial del estudio de las células.
Definición e importancia del potencial de membrana mitocondrial
El potencial de membrana mitocondrial es el resultado de la distribución de carga a ambos lados de la membrana mitocondrial interna y es un factor clave para mantener la función mitocondrial normal. En las mitocondrias, la cadena de transporte de electrones genera un gradiente de protones a través de reacciones redox que impulsan la síntesis de ATP. La estabilidad del potencial de membrana mitocondrial está directamente relacionada con el suministro de energía de la célula y su estado de supervivencia. Un gran número de estudios han demostrado que las mitocondrias están estrechamente relacionadas con la apoptosis, en la que la disminución del potencial transmembrana mitocondrial se considera uno de los primeros eventos en el proceso de reacción en cascada apoptótica. Ocurre antes de la aparición de características apoptóticas (condensación de la cromatina, roturas del ADN) en el núcleo, y una vez que el potencial transmembrana mitocondrial colapsa, la apoptosis es irreversible. Por lo tanto, la disminución del potencial de membrana mitocondrial es un evento distintivo en las primeras etapas de la apoptosis.
Principio de funcionamiento de la sonda JC-1
JC-1 Es un colorante fluorescente lipídico catiónico, que puede utilizarse como indicador del potencial transmembrana mitocondrial. JC-1 existe en dos estados, monómero y multímero. En baja concentración, existe como monómero y se puede detectar fluorescencia verde; cuando se detecta mediante un ensayo de flujo continuo, generalmente se encuentra en el canal FL-1 (el mismo canal que FITC). En alta concentración, existe como multímero y se puede detectar la luz roja. y cuando se detecta mediante un ensayo de flujo continuo, generalmente se encuentra en el canal FL-2 (el mismo canal que el PE). El JC-1 también se puede utilizar como colorante fluorescente lipídico catiónico y se puede utilizar como indicador del potencial transmembrana mitocondrial. y PE mismo canal). Debido al cambio de concentración de JC-1, se forma un proceso de transición reversible entre monómero y multímero.
En las células normales, cuando el potencial de membrana es normal, JC-1 ingresa a la mitocondria a través de la polaridad de la membrana mitocondrial y forma multímeros fluorescentes rojos debido al aumento de la concentración, mientras que en las células apoptóticas, el potencial transmembrana mitocondrial se despolariza y JC-1 se libera de las mitocondrias en una concentración reducida y se revierte a la forma monomérica fluorescente verde. Por lo tanto, los cambios en el potencial de membrana mitocondrial se pueden detectar detectando la fluorescencia verde y roja.
Nota: Imágenes citadas de internet.
Sonda JC-10
JC-10, un derivado de JC-1, es una sonda dependiente del potencial que se utiliza para determinar el potencial transmembrana mitocondrial mediante citometría de flujo, microscopía de fluorescencia y ensayos de fluorescencia basados en placas de microtitulación. En las células sanas, JC-10 se acumula selectivamente en las mitocondrias, generando agregados rojos que exhiben un amplio espectro de excitación y valores altos de emisión a 590 nm.Sin embargo, en células apoptóticas y necróticas con bajo potencial transmembrana mitocondrial, el JC-10 se difunde fuera de las mitocondrias y produce monómeros de JC-10, lo que da lugar a un cambio hacia la emisión verde (525 nm). Se ha utilizado con éxito como indicador del potencial transmembrana mitocondrial en una variedad de tipos de muestras, incluidos miocitos, neuronas, tejidos intactos y mitocondrias aisladas.
JC-10--Reemplazo para JC-1
- Estabilidad: JC-10 tiene menos sesgo de detección porque tiene mayor solubilidad y mayor sensibilidad en medios acuosos.
- Señal mejorada: JC-10 tiene una relación señal-fondo mayor que JC-1.
- Sensibilidad mejorada: JC-10 es capaz de detectar cambios sutiles en la pérdida del potencial transmembrana mitocondrial mejor que JC-1 en todas las líneas celulares probadas.
- Amplia aplicación: JC-10 se puede utilizar en hepatocitos primarios de rata.
- Conveniente: JC-10 es compatible con marcadores enzimáticos fluorescentes, generadores de imágenes de células y citómetros de flujo.
Notas: Se midieron los cambios en el potencial de membrana mitocondrial inducidos por comedones en células Jurkat con JC-10 y JC-1. Después de tratar las células Jurkat con camptotecina (10 mM) durante 4 h, se añadieron soluciones de muestreo de colorante JC-1 y JC-10 a los pocillos y se incubaron durante 30 min. La intensidad de fluorescencia de las formas agregadas y monoméricas de JC-1 y JC-10 se midió a Ex/Em = 490/525 nm y 490/590 nm utilizando un marcador enzimático NOVOstar (BMG Labtech).
Análisis de resultados
Al detectar el monómero JC-1, la luz de excitación se puede configurar a 490 nm y la luz de emisión se puede configurar a 530 nm; al detectar el polímero JC-1, la luz de excitación se puede configurar a 525 nm y la luz de emisión se puede configurar a 590 nm. La apoptosis se detectó mediante citometría de flujo, la fluorescencia verde se detectó a través del canal FL-1 y la fluorescencia roja se detectó a través del canal FL-2. FL-1+, FL-2+ son células normales y FL-1+, FL-2- son células apoptóticas.
Nota: La fuente de la imagen son los foros del sitio web de China Streamline Association
Operar sin dudar
P: Sonda fluorescente de potencial de membrana mitocondrial JC-1, ¿se puede utilizar este producto para teñir secciones de tejido?
A: Digerir el tejido vivo en células individuales para garantizar la actividad de las células antes de la tinción.
P: ¿Puedo fijar las células antes de teñirlas con JC-1?
R: No. El colorante JC-1 se acumula en las mitocondrias de manera dependiente del potencial y se puede utilizar para detectar células, tejidos o potenciales de membrana mitocondriales purificados. La inmovilización altera el potencial eléctrico, lo que provoca la incapacidad de la sonda para acumularse en las mitocondrias y la pérdida de especificidad.
P: Hay partículas agregadas en la solución de trabajo JC-1 y planeo eliminarlas mediante centrifugación antes de teñir, ¿hay algún parámetro recomendado para la centrifugación?
R: La solución de trabajo JC-1 se puede centrifugar a 13.000 g durante aproximadamente 1-2 minutos.
Información de pedidos
| Nombre del producto | Artículo Nro. | Especificación |
| Sonda fluorescente de potencial de membrana mitocondrial JC-1 | 40705ES03/08 | 1 mg/5 mg |
| Sonda fluorescente de potencial de membrana mitocondrial JC-10 | 40707ES03/08 | 1 mg/5 mg |