La herramienta de investigación de ARN circular -RNase R

La herramienta de investigación del ARN circular: la ARNasa R

—— Aceleración del desarrollo de fármacos basados ​​en ARN circular

En los últimos años, las vacunas y fármacos de ARNm han ido entrando poco a poco en la visión del público. Las vacunas y fármacos de ARNm tienen las ventajas de un diseño rápido, un bajo coste y una producción sencilla, pero como el propio ARNm es fácil de degradar, actualmente se mejora principalmente la estabilidad de la preparación de ARNm añadiendo un sombrero y una cola, y se asiste en la traducción del ARNm. En los últimos años, los investigadores han descubierto un nuevo tipo de ARN: el ARN circular (ARN circular, circRNA). Estos ARN tienen una estructura de anillo cerrado covalente, que no es fácil de degradar. En comparación con el ARNm, el circRNA es más estable y puede lograr una traducción no dependiente del sombrero. Por tanto, el descubrimiento del CIRCRNA ofrece posibilidades para el desarrollo de una nueva generación de vacunas y fármacos de ARN con una estabilidad mejor y más sencilla.

Figura 1: El proceso de la vacuna de ARN 1

El proceso de producción del CIRCRNA incluye: preparación de la plantilla, transcripción in vitro, eliminación de la plantilla de ADN, circularización y purificación. Después de que el ARN se circulariza, es necesario utilizar la ribonucleasa R (Ribonucleasa R, RNASE R) para digerir el ARN no tripulado para lograr el propósito de enriquecer el CirCRNA. Yeasen tiene ingeniería enzimática molecular y una plataforma de evolución racional. Asegura la calidad del producto al mismo tiempo. El equipo de I + D de Yeasen desarrolló con éxito una enzima RNASE R con alta pureza y alta actividad.

ARNasa R (CAT#14606ES) es una exonucleasa de ácido ribonucleico 3' → 5' dependiente de Mg2+ que se deriva de E. coli. Puede digerir todos los ARN lineales y no digiere el ARN circrolámico ni el ARN lariat. Se utiliza a menudo para eliminar moléculas de ARN lineales y lograr el propósito de enriquecer el ARN no lineal, como el ARN circrolámico y el ARN lariat.

Características

Pureza de la proteína (SDS-PAGE) ≥95%

Figura 2: Detección de pureza de proteínas: diferentes volúmenes (1 μL, 2 μL, 3 μL) del producto (Cat#14606ES) muestran una alta pureza ≥95%.

Sin residuos exonucleasa

Figura 3: Se añadieron 20 U de RNASE R a 0,5 μg de λDNA-Hind III Digest, incubándose a 37 ℃ durante 4 horas. El resultado muestra que no quedan residuos Se detectó exonucleasa a partir de los productos de RNASE R (CAT#14606ES).

Capacidad de digestión del ARN lineal y ARN circular

Figura 4: La ARNasa R (CAT#14606ES) puede digerir moléculas de ARN lineales
Figura 5: CircRNA puede tolerar el tratamiento de RNASE R (CAT#14606ES).

Producto

Gato

Tamaño

ARNasa R (20 U/μL)

14606ES

250U/2500U/10000U
ARNasa R (grado GMP, 20 U/μL) 14615ES 250U/2500U/10000U

ARN polimerasa T7 de grado GMP (250 U/μL)

10625ES

10 KU/100 KU/2500 KU
ARN polimerasa T7 CleaScrip™ (ARNbc bajo, 250 U/μL) 10628ES 10 KU/100 KU/2500 KU

Referencia

  1. Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Vacunas circulares de ARN contra el SARS-CoV-2 y variantes emergentes. Celúla.2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
  2. Chen L, Wang C, Sun H, et al. La caja de herramientas bioinformática para el descubrimiento y análisis de circRNA. Bioinform breve. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001

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