1. ¿Cómo evitar que el ARN se degrade?

2. ¿Qué son los inhibidores de la ARNasa?

3. ¿Qué hace el inhibidor de la ARNasa?

4. ¿Cuáles son las características de un inhibidor de la ARNasa murina?

5. Productos relacionados y rendimiento

6. Productos relacionados

7. Preguntas frecuentes

1. ¿Cómo evitar que el ARN se degrade?

La ARNasa desempeña un papel importante en el metabolismo de los ácidos nucleicos y se puede encontrar en casi cualquier tipo de procariota y eucariota. La ARNasa se secreta en fluidos corporales como lágrimas, saliva y sudor para defenderse de la invasión de microorganismos, y también está presente en los restos de la piel. Sin embargo, la principal fuente de ARNasa en la mayoría de los entornos son los microorganismos, es decir, las bacterias y los hongos. La ARNasa es extremadamente difícil de inactivar y presenta una alta estabilidad, resistencia al calor, resistencia a los ácidos y resistencia a los álcalis. Después de la desnaturalización térmica, puede recuperar rápidamente su estructura original. La ARNasa suele ser muy activa y está ampliamente distribuida tanto en células y tejidos eucariotas como procariotas. El ARN de la muestra puede degradarse por completo con solo una pequeña cantidad de contaminación por ARNasa. La contaminación por ARNasa en los estudios puede provenir tanto de fuentes internas como externas. La ARNasa en las células es principalmente una fuente endógena de contaminación, mientras que las fuentes exógenas incluyen los suministros experimentales, el entorno del laboratorio y los propios experimentadores. Las ARNasas, especialmente las de la familia A, son proteínas pequeñas y compactas que contienen unos pocos residuos de cisteína capaces de formar muchos enlaces disulfuro intramoleculares. Tras volver a la temperatura ambiente, en ausencia de un agente desnaturalizante, la ARNasa desnaturalizada recuperará su estructura natural y algunas funciones. Por lo tanto, las ARNasas conservan una actividad considerable después de repetidos ciclos de congelación y descongelación, incluso después de su esterilización en autoclave. La naturaleza estable de estas enzimas las hace resistentes a muchos métodos de descontaminación, que suelen requerir métodos químicos agresivos para eliminar las ARNasas de las superficies y soluciones.

Para evitar la degradación del ARN vulnerable, se deben tomar precauciones especiales al trabajar con ARN. Para controlar la ARNasa exógena, el operador debe usar guantes durante el experimento y cambiarse los guantes después de tocar la piel, las manijas de las puertas y la superficie de objetos comunes. Además, el operador debe usar una pistola de pipeta especial para la operación de ARN y usar puntas de pared, tubos de centrífuga, compuestos y reactivos libres de ARNasa. Manténgase alejado o cubra los orificios de ventilación y las ventanas abiertas, y use áreas menos transitadas como áreas libres de ARNasa. Y durante la extracción y el análisis de ARN, no realice otros experimentos que puedan causar contaminación por ARNasa.
El método para inhibir la actividad de la ARNasa endógena consiste, en primer lugar, en conservar la muestra. Una vez extraída la muestra de tejido, no se debe extraer el ARN directamente, sino que se debe congelar rápidamente y almacenar en un entorno a -80 °C con nitrógeno líquido a tiempo, y el experimento debe realizarse lo antes posible para minimizar la degradación del ARN.Se añaden inhibidores de la ARNasa al lisado celular para romper simultáneamente las células e inactivar la ARNasa, minimizando la actividad de la ARNasa liberada durante la rotura celular. Todos los reactivos y equipos deben recibir un tratamiento especial para inactivar las ARNasas antes de su uso.

Además, los inhibidores de ARN se pueden utilizar para inhibir la actividad de la ARNasa y prevenir la degradación del ARN por esta última. Existen varios tipos de inhibidores de ARN:

• Pirocarbonato de dietilo (DEPC): Es un inhibidor potente pero no completo de la ARNasa. Desnaturaliza la proteína mediante la combinación del anillo imidazol de la histidina en el grupo génico activo de la ARNasa, inhibiendo así la actividad de la enzima.
• Isotiocianato de guanidina: actualmente considerado el inhibidor de la ARNasa más eficaz, también puede inactivar la ARNasa mientras lisa el tejido, lo que puede destruir la estructura celular y disociar el ácido nucleico de la nucleoproteína, y también tiene un cierto efecto sobre la ARNasa. Fuerte efecto desnaturalizante.
• Complejo ribonucleósido de vanadilo: un complejo formado por iones de óxido de vanadio y nucleósidos, que puede combinarse con la ARNasa para formar un análogo transicional, inhibiendo casi por completo la actividad de la ARNasa.
• Inhibidor proteico de la ARNasa (RNasina): una glicoproteína ácida extraída del hígado de rata o del blastodisco humano, la ARNasina es un inhibidor no competitivo de la ARNasa, que puede unirse a una variedad de ARNasas, inactivándolas.
• Otros: SDS, urea, tierra de diatomeas, etc. también tienen un cierto efecto inhibidor sobre la ARNasa.

2. ¿Qué son los inhibidores de la ARNasa?

Los inhibidores de la ARNasa son una clase de sustancias que pueden inhibir la actividad de la ARNasa. Los inhibidores de la ARNasa más comunes incluyen el pirocarbonato de dietilo (DEPC), el isotiocianato de guanidina, los complejos de ribonucleósido vanadilo (RVC) y los inhibidores proteicos de la ARNasa (RNasina). Entre ellos, el DEPC y el isotiocianato de guanidina tienen cierta toxicidad, y el RVC tiene un efecto inhibidor sobre la polimerasa de PCR, lo que no es propicio para experimentos posteriores. La RNasina no es tóxica y es un inhibidor no competitivo de la ARNasa, que puede unirse a varias ARNasas para inactivarlas.

3. ¿Qué hace el inhibidor de la ARNasa?

Los inhibidores de la ARNasa se utilizan comúnmente como medida de precaución en las manipulaciones enzimáticas del ARN para inhibir y controlar dichos contaminantes. La ARNasa es una glicoproteína ácida extraída del hígado de rata o del blastodermo humano, que puede unirse específicamente a la ARNasa de manera no covalente para formar un complejo, lo que provoca la inactivación de la ARNasa y, de ese modo, protege la integridad del ARN. En la actualidad, el inhibidor de la ARNasa ayuda a prevenir la degradación del ARN en aplicaciones como la síntesis de ADNc, la RT-PCR, las reacciones de transcripción/traducción in vitro o la purificación del ARN.

4. ¿Cuáles son las características de un inhibidor de la ARNasa murina?

Los inhibidores de la ARNasa murina recombinantes no contienen 2 cisteínas sensibles a la oxidación que sí contienen los inhibidores de la ARNasa de origen humano. Por lo tanto, el inhibidor de la ARNasa murina tiene una alta actividad antioxidante y es más estable para experimentos con DTT bajo. Además, el inhibidor de la ARNasa murina de Yeasen tiene las siguientes características:
1) Inhibición general de la ARNasa: el inhibidor de la ARNasa murina de YEASEN inhibe específicamente la ARNasa A, la ARNasa B, la ARNasa C, etc.
2) Condiciones de reacción versátiles: el inhibidor de ARNasa es activo a un pH de 5,0 a 9,0 y de 25 ℃ a 55 ℃, lo que es adecuado para la transcriptasa inversa termoestable.
3) Posibilidad de realizar múltiples experimentos posteriores: no se observa inhibición de la actividad de la polimerasa cuando se utiliza el inhibidor de ARNasa con la ADN polimerasa Taq, la transcriptasa inversa AMV o M-MuLV o las ARN polimerasas de fagos (SP6, T7 o T3).
4) Bienes producidos en masa: una capacidad de fabricación única de 2 mil millones de unidades es útil para la gestión de costos al garantizar la homogeneidad del producto, la estabilidad del suministro y la puntualidad.
5) Consistencia de lote a lote: plataforma de expresión y purificación de proteínas maduras según el sistema de gestión de calidad ISO13485, pruebas de control de calidad según requisitos de calidad para asegurar la estabilidad del producto entre lotes.

5. Productos relacionados y rendimiento

A. El inhibidor de la ARNasa bloquea la actividad de la ARNasa.

1 μg de ARN total de células HEK, 1 μL de inhibidor de ARNasa puede inhibir eficazmente 5 ng de ARNasa.

Figura 1. Efecto inhibidor del inhibidor de la ARNasa murina.

El inhibidor de la ARNasa B supera a los productos extranjeros en las pruebas de qPCR

El efecto inhibidor de los inhibidores de la ARNasa derivados de ratones de Yeasen y R* Company (MRI) se midió utilizando la técnica de PCR cuantitativa en circunstancias experimentales idénticas, y el inhibidor de la ARNasa de la fuente murina YEASEN inhibió eficazmente la ARNasa A en el sistema. El efecto de inhibición fue superior al de los competidores.

Figura 2. Prueba de inhibición de la ARNasa R* MRI

Nota: Las curvas en la figura de izquierda a derecha son: Control positivo (solo ARN, sin ARNasa y MRI), 40 U MRI, 30 U MRI, 20 U MRI, 10 U MRI y Control negativo (ARN + ARNasa, sin MRI).

Figura 3. Prueba de inhibición de la ARNasa de Yeasen MRI

Nota: Las curvas en la figura de izquierda a derecha son: Control positivo (solo ARN, sin ARNasa y MRI), 80 U MRI, 60 U MRI, 40 U MRI, 30 U MRI, 20 U MRI, 10 U MRI, Control negativo (ARN + ARNasa, sin MRI).

Figura 4. La TC de los resultados de RT-qPCR de la RMN de Yeasen y la RMN R*

6. Productos relacionados

Los productos relacionados que Yeasen puede proporcionar se muestran en la Tabla 1:

Tabla 1.Lista de productos

7. Preguntas frecuentes

P1: ¿Habrá ARNasa en el inhibidor de ARNasa murino?
R: Cada reactivo detectará la actividad de la ARNasa para garantizar que el inhibidor de la ARNasa murina no produzca contaminación por ARNasa.
P2: ¿Los inhibidores de la ARNasa murina tendrán un impacto en los experimentos de PCR posteriores?
R: No tendrá ningún efecto. Cada lote de inhibidor de la ARNasa murina está libre de contaminación genómica después de las pruebas de calidad y puede utilizarse en investigaciones de RT-PCR y RT-qPCR.
P3: ¿Se inactivará el inhibidor de la ARNasa murina?
R: Los inhibidores se inactivarán a temperaturas superiores a 65 °C y la agitación vigorosa también provocará inactivación.
P4: ¿Qué precauciones se deben tomar al utilizar un inhibidor de la ARNasa murina para preparar el sistema de reacción?
Respuesta: Al preparar el sistema, se puede agregar primero un inhibidor de ARNasa antes de agregar otros componentes que puedan introducir fuentes de contaminación por ARNasa.
P5: ¿El inhibidor de la ARNasa murina tiene actividad endonucleasa y exonucleasa?
Respuesta: No hay actividad endonucleasa y exonucleasa, lo que ayuda a mejorar el rendimiento del producto.

Respecto a la lectura:

Inhibidores de la ARNasa murina: eliminan con éxito la contaminación de la ARNasa y preservan el ARN

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