La transcriptasa inversa, también conocida como ADN polimerasa dependiente de ARN, es una enzima ADN polimerasa que transcribe el ARN monocatenario en ADN. El rendimiento de la transcriptasa inversa afectará directamente el rendimiento final de los reactivos de diagnóstico molecular. En respuesta a los problemas de los fabricantes de reactivos de diagnóstico molecular, Yeasen ha llevado a cabo la transformación direccional de la transcriptasa inversa. ¡La transcriptasa inversa tiene un rendimiento excelente y es bien recibida por los clientes!

1. ¿Cuál es la función de la transcriptasa inversa?
2. ¿Cómo elegir la transcriptasa inversa?
3. ¿Por qué elegir la transcriptasa inversa de Yeasen?
4. Productos relacionados y rendimiento
5. Productos relacionados

1. ¿Cuál es la función de la transcriptasa inversa?

La transcriptasa inversa es una ADN polimerasa dependiente del ARN. Puede transcribir el ARN molde y formar ADN complementario (ADNc). El ADNc monocatenario se convierte en ADN bicatenario mediante la ADN polimerasa. Por lo tanto, las transcriptasas inversas se utilizan comúnmente para cuantificar el nivel de síntesis de ARNm cuando se combinan con la técnica de reacción en cadena de la polimerasa, llamada RT-PCR. Los ensayos cuantitativos de RT-PCR se utilizan comúnmente en el diagnóstico de enfermedades. Por lo tanto, la transcriptasa inversa desempeña un papel importante en la investigación científica y la aplicación práctica.

2. ¿Cómo elegir la transcriptasa inversa?

Las transcriptasas inversas más comunes son la M-MLV y la AMV, de las cuales la M-MLV es mejor que la AMV. Pero las enzimas RT convencionales tienen dos sitios activos, uno que ejecuta las actividades de la polimerasa y otro que ejecuta la actividad de la ribonucleasa H. La ARNasa H es una endonucleasa capaz de degradar la fracción de ARN de la familia de híbridos ADN-ARN. Por lo tanto, la transcriptasa inversa que carece de actividad de ARNasa H es beneficiosa para la síntesis de ADNc. Además de eso, el uso de una versión termoestable de RT es beneficioso para reducir la amplificación no específica de ácidos nucleicos y minimizar el impacto de las estructuras secundarias complejas.

3. ¿Por qué elegir la transcriptasa inversa de Yeasen?

Yeasen ha llevado a cabo una modificación direccional de la transcriptasa inversa, que elimina la actividad de la ARNasa H, mejorando así la capacidad de síntesis de ADNc. Utilizando la tecnología de evolución de proteínas para mejorar la termoestabilidad de la transcripción inversa.

La transcriptasa inversa de Yeasen no solo tiene una gran capacidad de síntesis, sino también una gran capacidad de tolerancia. Además, Yeasen tiene estrictos requisitos de calidad. Es la mejor opción para la transcriptasa inversa.

4. Productos relacionados y rendimiento

4.1 Resistente a altas temperaturas de 65°C

Utilizando 500 ng de ARN total de células 293T como plantilla, se realizó la transcripción inversa a 42 °C-65 °C utilizando la transcriptasa inversa Hifair™ Ⅲ. Tome 1 μL de ADNc como plantilla para amplificar el gen TFRC (4,4 kb).

Figura 1. Realice la transcripción inversa a 42 °C-65 °C

4.2 Compatible con plantillas complejas

La temperatura de reacción de 55 °C puede satisfacer la transcripción inversa de plantillas convencionales y plantillas de estructura secundaria, y la temperatura de reacción de plantillas de GC alta se puede aumentar adecuadamente a 65 °C.

Figura 2.Adecuado para plantillas ricas en GC y plantillas de estructura secundaria

4.3 Excelente rendimiento de extensión

Utilizando 500 ng de ARN total de células 293T como plantilla y Oligo(dT) como cebador, se sintetizó ADNc utilizando la transcriptasa inversa Hifair™ Ⅲ. Tome 1 μL de ADNc como plantilla para amplificar 500 pb del extremo 5' del gen DY1C1N1 (19,9 kb). Los resultados mostraron que la transcriptasa inversa Hifair™ Ⅲ puede sintetizar ADNc de hasta 19,8 kb.

Figura 3. Se pueden sintetizar hasta 19,8 kb de ADNc.

4.4 Síntesis rápida

Utilizando el ARN de las células 293T como plantilla, se llevó a cabo la transcripción inversa de acuerdo con el procedimiento estándar del manual y el tiempo de transcripción inversa se estableció en 5, 10, 15, 30, 45 y 60 minutos respectivamente. La transcriptasa inversa Hifair™ III puede sintetizar un ADNc de 6 kb en 5 minutos y su especificidad y rendimiento son superiores a los de la marca V.

Figura 4. Se puede sintetizar ADNc de 6 kb en 5 minutos.

4.5 Amplio rango lineal

Utilizando 5 pg-5 μg de ARN total de células 293T como plantilla, se sintetizó ADNc utilizando la transcriptasa inversa Hifair™ III. Se utilizó 1 μL de ADNc como plantilla y se realizó una PCR cuantitativa en los cuatro genes; los resultados mostraron que las eficiencias de amplificación se encontraban entre el 98 % y el 100,10 %. Esto demuestra que el ADNc se puede sintetizar de manera eficiente en una amplia gama lineal de plantillas.

Figura 5. El ADNc se puede sintetizar de manera eficiente en una amplia gama de plantillas.

4.6 Control de calidad estricto

Para garantizar el rendimiento estable de la enzima inversa de Yeasen, Yeasen implementa estrictamente los requisitos en el proceso de producción para estabilizar el proceso de producción y garantizar la estabilidad del lote. Al mismo tiempo, se fortalece la inspección de calidad para detectar residuos que incluyen exonucleasa, nickasa, RNasa, etc., para asegurarse de que no queden residuos, para no afectar los experimentos posteriores.

Figura 6. Detección de residuos

5. Productos relacionados

Los productos proporcionados por Yeasen son los siguientes.

Tabla 1. Productos relacionados

Respecto a la lectura

Guía de selección de la transcriptasa inversa

YEASEN UDG: El "experto en antiincrustaciones" en reacciones PCR