La tecnología de diagnóstico molecular se distingue de otros métodos de detección por su excepcional sensibilidad y especificidad. Sin embargo, los reactivos de diagnóstico líquidos convencionales presentan inconvenientes, como los elevados gastos de transporte y una vida útil limitada, que limitan su utilidad. En respuesta a las cambiantes necesidades del mercado y a los avances tecnológicos, han surgido reactivos liofilizados para pruebas de diagnóstico molecular. Los productos liofilizados ofrecen varias ventajas con respecto a los reactivos de prueba líquidos tradicionales, entre ellas:
- Estable a temperatura ambiente. - La estructura tridimensional es fija, lo que puede garantizar la estabilidad de la enzima y el sistema de reacción a temperatura ambiente. No es necesario transportarlo en cadena de frío ni almacenarlo en refrigeradores o cámaras frigoríficas, lo que puede prolongar la vida útil de los productos.
- Fácil de usar- No es necesario congelar y descongelar repetidamente, dispensar líquidos, etc.
- Costo reducido- No necesita transporte en cadena de frío ni almacenamiento congelado, lo que reduce eficazmente los costos de transporte y almacenamiento.
- Alta precisión- Se utiliza un micronúcleo liofilizado en una reacción para reducir el error de composición durante la preparación del reactivo, acortar el tiempo de operación, evitar la pérdida de actividad biológica durante la preparación del líquido y mejorar fundamentalmente la precisión.
- Uso flexible- No está limitado por el número de muestra, también se puede cargar una muestra.
Las enzimas moleculares convencionales o las premezclas incorporan frecuentemente altas concentraciones de glicerina como agente crioprotector y estabilizador. Sin embargo, la presencia de glicerina en el reactivo puede alterar la integridad estructural del agua, lo que dificulta su eliminación eficaz. Esto, a su vez, tiene un impacto perjudicial en la estructura y la estabilidad del producto liofilizado. Por lo tanto, al optar por la liofilización, es recomendable seleccionar reactivos sin glicerol.
Además, en aplicaciones que son particularmente sensibles a la composición de los reactivos, como la PCR digital, el uso de enzimas sin glicerina en alta concentración puede mitigar aún más la influencia del glicerol en la reacción de PCR digital. Este enfoque no solo minimiza la interferencia, sino que también amplía el potencial para optimizar el sistema de reactivos de detección de PCR digital.
YEASEN Sin glicerol solución enzimática molecular
YEASEN ha establecido una plataforma integral de producción e investigación y desarrollo de enzimas moleculares sin glicerina y ha logrado una producción a gran escala de múltiples enzimas moleculares sin glicerol a través de la selección de materiales, el control ambiental, la optimización de procesos y la garantía de calidad.
- Prueba del proceso de diálisis
Optimización del proceso de diálisis para un volumen fijo de enzima glicerina:
- Detección del tampón de diálisis óptimo para diferentes enzimas moleculares;
- Búsqueda de soluciones de almacenamiento estables para diferentes enzimas moleculares que permitan un almacenamiento a largo plazo a 4℃ o -20℃.
- Amplificación del proceso de filtración de flujo tangencial
A partir de la evaluación del proceso de diálisis, se pueden determinar los componentes óptimos del tampón de diálisis y sus soluciones de almacenamiento óptimas. Posteriormente, se puede utilizar el proceso de filtración de flujo tangencial (también conocido como UFDF) para reemplazar el tampón de solución.
Los factores cruciales en el desarrollo del proceso de filtración de flujo tangencial giran en torno a la elección de la fórmula de la solución de almacenamiento, la fórmula de la solución de lavado y filtración, así como la presión transmembrana y el caudal aplicados durante la filtración. YEASEN ha establecido un enfoque estandarizado para la filtración de flujo tangencial, que permite la determinación rápida de los volúmenes de lavado y filtración y los parámetros de tiempo en función del contenido de glicerina deseado en la enzima molecular de destino. Este enfoque ayuda a economizar tanto en materiales como en tiempo.
- Control de calidad
Los diversos procesos de preparación descritos anteriormente están diseñados para satisfacer los diversos requisitos de distintos volúmenes y tipos de productos. Para evaluar la estabilidad del producto en distintos lotes y dentro del mismo proceso, YEASEN ha desarrollado un sistema integral de caracterización de parámetros de rendimiento. Este sistema permite una evaluación exhaustiva del impacto de las medidas de ausencia de glicerol desde múltiples perspectivas. Los métodos de caracterización abarcan la cuantificación de proteínas, la evaluación de la actividad enzimática (tasa de recuperación), el análisis del contenido de glicerina, la evaluación del contenido de agente protector y la evaluación del rendimiento enzimático, entre otros.
Productos enzimáticos moleculares sin glicerol de YEASEN
YEASEN ha adoptado un método de preparación de enzimas moleculares sin glicerol para producir enzimas sin contenido de glicerina a partir de aquellas que inicialmente contenían glicerina. Actualmente, podemos suministrar cantidades sustanciales de materias primas de enzimas sin glicerol adecuadas para aplicaciones qPCR/RT-qPCR y LAMP/RT-LAMP. Estas materias primas están diseñadas para la liofilización en pruebas de diagnóstico, manteniendo al mismo tiempo el mismo nivel de calidad y rendimiento que sus contrapartes líquidas.
Productos enzimáticos moleculares sin glicerol
Las premezclas de qPCR se prepararon utilizando YEASEN 14316ES ADN polimerasa E-Taq y las enzimas libres de glicerol correspondientes, respectivamente, y la plantilla de 105, 104 y 103 Se amplificaron al mismo tiempo copias/mL. Los resultados mostraron que el efecto de amplificación del 14316ES sin glicerol era consistente con el del que contenía glicerina. Contraparte. La prueba de estabilidad acelerada de 14316ES se realizó a 37 ℃. Los resultados mostraron que el rendimiento de expansión de 14316ES fue consistente con el del control no acelerado después de 54 días de tratamiento acelerado a 37 ℃. Los resultados anteriores mostraron que no hubo diferencia en el rendimiento de la enzima sin glicerol y la que contenía glicerina. contraparte, y la estabilidad era buena.
- Productos liofilizados mediante RT-qPCR: acelerados a 50 ℃ durante 25 días, los productos liofilizados tienen una morfología y un rendimiento estables.
El Yeasen 14316ES se preparó en una solución premezclada para RT-qPCR, que se liofilizó y se probó para determinar su estabilidad acelerada a 50 ℃ durante 25 días. Al mismo tiempo, se analizaron 105, 104 y 103 Se amplificaron copias/mL de la plantilla del pseudovirus del nuevo coronavirus.Los resultados mostraron que la morfología del producto, el valor Ct y el valor de fluorescencia no tuvieron cambios significativos antes y después de la liofilización, y el producto liofilizado tuvo buena estabilidad.
Figura 4: Datos de pruebas de estabilidad acelerada de productos liofilizados mediante RT-qPCR- Productos liofilizados RT-LAMP: acelerados a 45 ℃ durante 30 días, los productos liofilizados tienen una morfología y un rendimiento estables.
La premezcla RT-LAMP se preparó con YEASEN 14405ES y 11297ES, y la prueba de rendimiento se llevó a cabo después de la liofilización. El orificio de reacción positivo era naranja y el orificio de reacción negativo era magenta, lo que mostró un gran contraste y el resultado se interpretó claramente. Además, la morfología de los productos liofilizados no cambió significativamente después de 30 días de aceleración a 45 ℃. Los resultados mostraron que el producto liofilizado era estable en forma y rendimiento.
Información del producto
| Clasificación | norteamo | N.º de catálogo |
| Productos enzimáticos sin glicerol para qPCR/RT-qPCR | Kit RT-qPCR de un solo paso Hifair™ Lyo Multiplex -11831ES | 11831ES |
| 14316ES | ||
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| Productos enzimáticos sin glicerol para RT-LAMP | Transcriptasa inversa Hifair® III, 600 U/μl, sin glicerol | 11297ES |
| 14405ES |