La esencia de la cuantificación de la biblioteca NGS es la cuantificación de ácidos nucleicos (ADN o ARN). El análisis preciso de la cuantificación de la biblioteca NGS es crucial para obtener datos de secuenciación de alta calidad. Si la concentración cuantitativa de la biblioteca NGS es alta, el rendimiento de los datos de secuenciación puede ser bajo debido a una agrupación insuficiente. Sin embargo, una concentración cuantitativa baja puede provocar interferencias de señales entre agrupaciones para producir datos de baja calidad e incluso provocar un fallo de secuenciación. Además, con el aumento del flujo de secuenciación de los secuenciadores, a menudo se combinan múltiples bibliotecas NGS para la secuenciación. De acuerdo con los requisitos del tamaño de los datos de secuenciación, las bibliotecas NGS con las cantidades molares correspondientes se mezclan en función de los resultados cuantitativos para estabilizar la salida del tamaño de cada dato de muestra. Por lo tanto, la cuantificación precisa de las bibliotecas NGS es crucial.

En la actualidad, existen dos métodos principales de cuantificación de la biblioteca NGS: el método de absorción ultravioleta y el método del tinte fluorescente. NanoDrop es un instrumento de cuantificación de ADN diseñado según el principio de absorción ultravioleta; Qubit es un instrumento de cuantificación de ADN desarrollado según el principio del tinte fluorescente. La precisión cuantitativa y el costo de estos dos métodos son diferentes. El método qubit es el principal recomendado aquí. Entonces, ¿por qué le recomendamos el qubit? ¿Cuáles son las características de los productos Qubit suministrados por Yeasen? Continúe leyendo...

1. ¿Por qué te recomendamos Qubit?

2. ¿Cuáles son las características de los productos Qubit suministrados por Yeasen?

• ¿Cómo funciona Qubit?
• Producto popular suministrado por Yeasen
• Características del producto

3. ¿Cómo elegir Qubit para diferentes muestras?

1. ¿Por qué te recomendamos Qubit?

No hay duda de que Qubit es mejor que Nanodrop. Entonces, ¿por qué es mejor Qubit que nanodrop? ¿Cuál es la diferencia entre qubit y nanodrop? Primero, como se mencionó anteriormente, difieren en el principio de cuantificación de ADN, NanoDrop está diseñado en base a la absorción ultravioleta. El principio del método de absorción ultravioleta es que hay bases de purina y pirimidina en los componentes de ácido nucleico, y estas bases tienen dobles enlaces conjugados. Hay una fuerte absorción de luz a 250-280 nm en la región UV, y el valor máximo de absorción es de aproximadamente 260 nm. Por lo tanto, la absorción UV de ácido nucleico se puede utilizar para la cuantificación de concentración. NanoDrop es simple y rápido de operar, pero no puede distinguir entre ADN, ARN, ácidos nucleicos degradados, nucleótidos libres y otras impurezas. No es adecuado para obtener datos cuantitativos precisos de la biblioteca. Pero, la cuantificación Qubit es la mejor opción para la cuantificación precisa de la biblioteca NGS, especialmente para la cuantificación de ADN. Entonces, ¿cuáles son las características de la cuantificación de ADN qubit? Por favor vea la siguiente tabla:

2. ¿Cuáles son las características de los productos Qubit suministrados por Yeasen?

Antes de presentar las características de los productos Qubit suministrados por Yeasen, entendamos cómo funcionan.

2.1 ¿Cómo funciona Qubit?

El principio de Qubit es utilizar colorantes fluorescentes para unirse a las moléculas de ADN y emitir fluorescencia, y luego medir la intensidad de la fluorescencia para obtener la concentración de ácido nucleico. Los colorantes fluorescentes emiten fluorescencia solo después de unirse a la doble cadena de ADN, y la fluorescencia resultante es proporcional a la concentración de ADN.

2.2 Producto popular suministrado por Yeasen

El 1×dsDNA HS Assay Kit para Qubit® (Cat#: 12642ES), desarrollado sobre la base de El kit de ensayo HS de dsDNA para Qubit® (n.° de cat.: 12640ES) es una solución de premezcla Qubit lista para usar que permite prediluir los colorantes concentrados del kit original para obtener una solución de trabajo. Al utilizarlo, solo es necesario mezclar el líquido de trabajo con la muestra que se va a analizar para determinar la concentración de la muestra mediante el fluorómetro Qubit®, que es más cómodo de usar.

2.3 Características del producto

Simple y fácil de operar: líquido premezclado listo para usar, sin necesidad de preparar líquido de trabajo, operación simple, ahorro cuantitativo de más tiempo;

Figura 1. Procesos del kit de ensayo dsDNA HS para Qubit

Sensibilidad ultra alta: cuantificación precisa de dilución en gradiente de 64x, 0,2-100 ng de dsDNA tiene una buena relación lineal;

Súper especificidad: detección específica de dsDNA, tiene excelente tolerancia a algunos contaminantes convencionales;

Velocidad de unión rápida del tinte: la saturación se puede alcanzar en 2 minutos, por lo que no es necesario esperar una lectura rápida de resultados cuantitativos precisos;

Alta estabilidad: la señal de fluorescencia duró 3 horas y la precisión cuantitativa no se vio afectada después de 20 días a temperatura ambiente.

Figura 1. Prueba de estabilidad del producto. Los resultados muestran que se mantiene estable después de almacenarse a temperatura ambiente durante 2 semanas (la desviación entre el valor medido y el valor teórico fue <10%)

Nota: Se seleccionaron dos concentraciones de dsADN y se utilizaron Thermo#Q33230 almacenado a 4 ℃, Yeasen#12642 almacenado a 4 ℃ y Yeasen#12642 almacenado a temperatura ambiente (aproximadamente 25 ℃) para determinar los valores de concentración en diferentes momentos y se calculó la tasa de desviación entre cada medición y la primera (indicada como 0d).

Figura 2. Prueba de estabilidad del producto. Superestabilidad, alta relevancia de los resultados de la prueba dentro del período de validez

3. ¿Cómo elegir Qubit para diferentes muestras?

Qubit, ¡cuantificación rápida! El uso de Qubit para la cuantificación de bibliotecas tiene muchas ventajas. Su proceso de detección es rápido y eficaz.Los resultados de la secuenciación se pueden obtener en unos pocos segundos para una sola muestra y la concentración se puede generar directamente, lo que es muy intuitivo. Al mismo tiempo, también puede ser compatible con la mayoría de los instrumentos de etiquetado de enzimas para la cuantificación de muestras por lotes, que es la primera opción para la cuantificación de bibliotecas convencionales y la cuantificación de dsADN.