La cuantificación de ácidos nucleicos, como uno de los experimentos más fundamentales en biología molecular, afecta directamente el resultado de los experimentos posteriores. La precisión de la cuantificación de ácidos nucleicos es crucial. En la actualidad, existen dos métodos principales de cuantificación de bibliotecas de NGS, el método de absorción ultravioleta y el método de colorante fluorescente.

El método de absorción ultravioleta utiliza un espectrofotómetro para medir la absorbancia a 260 nm del ADN y el ARN para su cuantificación. También estima la pureza de los ácidos nucleicos calculando la relación OD260/OD280. Sin embargo, los valores detectados son muy susceptibles a la interferencia de otros contaminantes como nucleótidos libres, sales y compuestos orgánicos.

La cuantificación fluorométrica de cúbits utiliza colorantes fluorescentes que se unen específicamente al ADN de doble cadena, al ADN de cadena sencilla, al ARN o a las proteínas. Al ser excitados por una fuente de luz de longitud de onda específica, los colorantes emiten fluorescencia, que no se ve afectada por otras moléculas de impurezas que puedan estar presentes en la muestra. La intensidad de la fluorescencia es proporcional a la concentración de las moléculas objetivo en la muestra.

Tabla 1. Comparación de los principales métodos de cuantificación de ácidos nucleicos

Objetivo	Abs ultravioleta (nanogota)	Qubit ADN HS	ADN qubit BR	ARN qubit	Qubit de ADN monocristalino
Tipo de ácido nucleico	ADN, ARN	ADN de doble cadena	ADN de doble cadena	ARN	ssADN, oligonucleótidos
Concentración de muestra (ng/μL)	2 ng/μL-15 μg/μL	10 pg/µL-100 ng/µL	0,1 ng/µL-1000 ng/µL	250 pg/µl-1000 ng/µl	50 pg/μL-200 ng/μL
Ventaja	Límite superior de cuantificación	Buena especificidad	Amplia gama de cuantificación	Altamente selectivo para el ARN	Bien tolerado
Limitaciones	Pobre especificidad	Proteger de la luz durante el uso.	Proteger de la luz durante el uso.	Proteger de la luz durante el uso.	Especificidad deficiente y también se une al dsADN.

La cuantificación por absorbancia UV y la cuantificación fluorométrica de Qubit tienen sus ventajas y pueden complementarse entre sí. Para la cuantificación preliminar de muestras rutinarias de ácidos nucleicos para determinar la concentración, la pureza y la presencia de contaminantes, se puede elegir el método de cuantificación por absorbancia. La cuantificación de qubit es más adecuada para muestras preciosas de baja concentración o para la cuantificación precisa requerida para experimentos posteriores, como la secuenciación de próxima generación y la PCR cuantitativa en tiempo real.

Yeasen ha lanzado varios productos de cuantificación de Qubit: dsDNA HS Assay Kit para Qubit^® (Cat. n.° 12640), listo para usar: 1 kit de ensayo HS de dsDNA para Qubit^® (Cat. n.° 12642), kit de análisis de ssDNA para qubit^® (Cat#12645) y el kit de ensayo dsDNA BR (Cat#12643), que han sido ampliamente elogiados desde su lanzamiento.

Solución 1 Cuantificación de alta sensibilidad de dsDNA HS

Premezcla de cuantificación de dsDNA lista para usar: kit de ensayo HS de dsDNA 1× para Qubit^®

^{Fácil operación: premezcla lista para usar, sin necesidad de premezcla;}

^{Alta sensibilidad: concentración detectable tan baja como 50 pg/μL;}

^{Buena estabilidad: la señal de fluorescencia dura 3 horas y el almacenamiento a temperatura ambiente durante 20 días no afecta la precisión de la cuantificación;}

^{A. Excelente estabilidad: el almacenamiento a temperatura ambiente durante 2 semanas aún mantiene la estabilidad (el valor medido se desvía del valor teórico en menos del 10%).}

Tabla 2. Prueba de estabilidad de diferentes muestras a 4 °C y temperatura ambiente en comparación con los competidores

Reactivos cuantitativos	Determinado concentración de λADN（ng/μL）
	0d		1d		3 dimensiones	7d			10d		14 días
Yo* 4℃	0,51		0,496		0,524	0,534			0,495		0,499
Yeasen 4℃	0,51		0,508		0,513	0,475			0,48		0,495
Yeasen temperatura ambiente almacenamiento	0,51		0,517		0,506	0,486			0,506		0,523
Reactivos cuantitativos	Determinado concentración de ADN genómico de ternera (ng/μL)
	0d	1d		3 dimensiones			7d	10d		14 días
Yo* 4℃	55.3	53.5		55,40			57,9	55.8		58
Yeasen 4℃	59.4	55.4		57.8			56.1	56.3		59,8
Yeasen temperatura ambiente almacenamiento	59	55,7		61.3			58	58,7		56.1

B. Alta sensibilidad, buena estabilidad entre lotes.

Tabla 3.Prueba de estabilidad de diferentes lotes

Bpegar	Muestra	Yo*			Yeasen			error
		Concentración1 (ng/μL)	concentración2 (ng/μL)	Promedio (ng/μL)	Concentración1 (ng/μL)	concentración2 (ng/μL)	Promedio (ng/μL)
D9801060	ADN lambda	0,3160	0,3250	0,3205	0,320	0,320	0,320	0,16%
D8801050		0,3310	0,3320	0,3315	0,319	0,306	0,3125	5,73%
D7813110		0,345	0,358	0,352	0,334	0,329	0,332	-6,03%

Solución 2 dsDNA BR Cuantificación de amplio rango

Cuantificación de dsDNA de amplio espectro: kit de ensayo dsDNA BR

Alta sensibilidad: concentración detectable tan baja como 50 pg/μL;

Excelente linealidad: Buena linealidad dentro del rango de 2-1000 ng;

Fuerte tolerancia a los contaminantes: Puede tolerar contaminantes comunes.

Tabla 4. Estabilidad y tolerancia a los contaminantes en comparación con los competidores

Yeasen ES						Yo* ES
estándar	RFU1	RFU2	Promedio	error		estándar	RFU1	RFU2	Promedio	error
S1	159,63	160,71	160,17	1%		S1	216.17	211,56	213.865	-2%
S2	24497.0	25078.64	24787.82	2%		S2	20532.46	20452.26	20492.36	0%
medición						medición
Contaminante	Concentración en muestra de 10 μL	Concentración1	Concentración2	Promedio	Para ser probado/controlado	Contaminante	Concentración en muestra de 10 μL	Concentración1	Concentración2	Promedio	Para ser probado/controlado
Control (H2O)	/	49	48.6	48.8	0,0%	Control (H2O)	/	49.8	48	48.9	0,0%
BSA	1 mg/ml	51.8	52	51.9	6,4%	BSA	1 mg/ml	54	51.2	52.6	7,6%
Etanol	20%	44.6	44	44.3	-9,2%	Etanol	20%	44.8	43.4	44.1	-9,8%
cloroformo	4,00%	49.0	49.8	49.4	1,2%	cloroformo	4,00%	50.0	47	48,5	-0,8%
Hoja de datos de seguridad (FDS)	0,2%	46.6	45.8	46.2	-5,3%	Hoja de datos de seguridad (FDS)	0,2%	53.2	51.6	52.4	7,2%
Trition-X100	0,20%	41.6	40.6	41.1	-15,8%	Trition-X100	0.20%	53	51	52.0	6,3%
dNTP	2 mm	44.2	45	44.6	-8,6%	dNTP	2 mm	47.8	46.4	47.1	-3,7%

Solución 3 Cuantificación de ssDNA

La opción ideal para la cuantificación de ssDNA: kit de análisis de ssDNA de alto rendimiento y costo para Qubit^®

^{Alta sensibilidad: concentración detectable tan baja como 50 pg/μL;
Excelente linealidad: Buena linealidad dentro del rango de 0-200 ng;
Señal estable: El excelente tinte combinado con un tampón optimizado mejorado puede mantener una intensidad de fluorescencia estable a temperatura ambiente y es muy aplicable incluso en entornos de contaminación común como sales, nucleótidos libres, solventes, detergentes o proteínas, lo que garantiza una cuantificación precisa;
Buena estabilidad: No hay cambios significativos en el rendimiento después de 6 meses de tratamiento a 4°C o 25°C;
Amplio rango de aplicación: Proceso de operación simple, que permite una rápida cuantificación de oligonucleótidos, cebadores, ADN desnaturalizado, ADN circular monocatenario, etc.}

A. Buena repetibilidad: cuantificación en diferentes instrumentos Qubit, diferentes tipos de muestras utilizando Yeasen Se probaron varios lotes de Cat#12645. Dentro del rango de 0 a 200 ng, buena repetibilidad en mediciones de diferentes instrumentos Qubit.