En el flujo de producción y procesamiento de medicamentos terapéuticos (como anticuerpos, fármacos de vectores virales, etc.), la eliminación de impurezas de ácidos nucleicos es crucial. La ultranucleasa, también conocida como nucleasa de amplio espectro o endonucleasa no restrictiva, puede escindir y degradar varias formas de ADN y ARN en múltiples condiciones experimentales, y se utiliza ampliamente para eliminar ácidos nucleicos de productos biológicos.
La ultranucleasa, también conocida como nucleasa de amplio espectro y endonucleasa no específica, puede escindir y degradar diversas formas de ADN y ARN en múltiples condiciones experimentales. Se utiliza ampliamente para eliminar ácidos nucleicos de productos biológicos.
Escenarios de aplicación del producto
- Eliminación de ácidos nucleicos residuales en productos biológicos: durante la producción de productos biológicos, como virus, vacunas y proteínas, se puede añadir UltraNuclease para degradar los ácidos nucleicos residuales. Este paso no solo aumenta la producción de virus, sino que también reduce significativamente el contenido de ácidos nucleicos residuales, lo que garantiza la seguridad y la eficacia de los medicamentos.
- Reducción de la viscosidad: al degradar los ácidos nucleicos, se reduce la viscosidad de los lisados celulares, lo que facilita los procesos de filtración/ultrafiltración durante la purificación de partículas derivadas de células, como virus, vectores AAV y cuerpos de inclusión.
- Resolución y recuperación mejoradas: en análisis ELISA, electroforesis bidimensional e inmunotransferencia, mejora la resolución y la recuperación.
- Prevención de la agregación celular: UltraNuclease puede prevenir eficazmente la agregación de células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC).
Para explorar las condiciones operativas óptimas para UltraNuclease, estudiamos los efectos de varios sistemas de amortiguación sobre la actividad enzimática.
Análisis comparativo de productos de la competencia (de la empresa A)
El rendimiento de UltraNuclease es consistente con el de la Compañía A y puede lograr un efecto de reemplazo.
El estándar de inspección de calidad se ajusta al estándar de producción GMP.
| Elementos de detección | Estándares de calidad | Método de detección |
| Actividad enzimática | 250-300 U/ul | Método de sustrato universal |
| Actividad específica | ≥1.5×106 U/mg | Método de sustrato universal |
| Pureza de las proteínas | ≥99% | Hoja de datos de seguridad (SDS) |
| Proteasa | Cumple los requisitos | Método de sustrato universal |
| Endotoxina bacteriana | Cumple los requisitos | Método de gel |
| Proteína huésped | Negativo | Método ELISA |
| ADN del huésped | Negativo | Método qPCR |
| Pruebas estériles | Crecimiento estéril | Regla general 1101 |
| Detección de patógenos | Negativo (no detectado) | Consulte el método interno |
| Prueba de micoplasma | Negativo (no detectado) | Consulte el método interno |
| Prueba de metales pesados | Cumple los requisitos | Regla general 0821 |
Para que coincida con el uso de UltraNuclease, Yeasen también ha desarrollado de forma independiente un kit de detección específico para UltraNuclease, que puede detectar eficazmente la enzima residual y reducir los riesgos. El kit de detección residual de UltraNuclease de Yeasen se desarrolló en referencia a las Pautas de validación de métodos analíticos de la Farmacopea china de 2020 <9101> y sigue estrictamente los requisitos clave para las pruebas multiparamétricas (rango lineal, especificidad, exactitud, precisión, sensibilidad, estabilidad acelerada, etc.).
Detección de ultranucleasas residuales
En los pasos de purificación normales, la UltraNucleasa se elimina fácilmente como impureza. Para detectar la cantidad residual específica de la omnipotente UltraNucleasa, se suele utilizar como producto estándar en la industria y se desarrolla un kit ELISA correspondiente.
El UCF.ME® Ultranucleasa El kit ELISA desarrollado independientemente por Yeasen adopta el principio del inmunoensayo enzimático en sándwich de doble anticuerpo (ELISA en sándwich), que puede detectar con precisión la cantidad residual de UltraNuclease en las muestras. El kit es estable en cuanto a linealidad, repetibilidad, tasa de recuperación y especificidad.
Principio del kit ELISA Yeasen UltraNuclease (ensayo inmunoenzimétrico de dos sitios)
Características del producto:
Cumplimiento normativo: Totalmente validado de acuerdo con los requisitos reglamentarios, los informes de validación están disponibles; Garantía de calidad: Todas las materias primas para el kit se desarrollan de forma independiente, lo que garantiza el control de calidad;
Alta sensibilidad: límite cuantitativo tan bajo como 23.5 pg/ml;
Alta precisión: alta repetibilidad intralote y baja variabilidad entre lotes;
Fuerte especificidad: Sin reactividad cruzada con otras proteínas celulares diseñadas
Parámetros de rendimiento:
| Parámetros del producto | contenido |
| Tiempo de ensayo | 3,5 horas |
| Principio de ensayo | Ensayo inmunoenzimétrico de dos sitios |
| Amplificación de señal | Sistema biotina-estreptavidina |
| Longitud de onda de detección | 450 nm y 630 nm |
| Sensibilidad | 23,5 pg/ml |
| Rango de detección | 0,047~3 ng/ml |
| Objeto de detección | Ultranucleasa |
| Instrumento aplicable | Dispositivos moleculares: series M e i |
| Solicitud | Detección de UltraNucleasa residual en procesos de purificación de vacunas de virus adenoasociados recombinantes y de terapia celular y génica |
Datos del producto:
Curva estándar del kit de reactivos:
Experimento de recuperación de muestra real:
UltraNuclease se añadió a soluciones de lisis celular de 5 μg/mL (HEK293, E. coli, CHO y Vero) de forma independiente con una concentración final de 1,5 ng/mL. La precisión en diferentes muestras de células fue excelente en comparación con otros proveedores.
Demostración de especificidad
Conclusión: El kit de prueba tiene una alta especificidad sin reacción cruzada; comparaciones por pares, “*” Diferencia significativa con respecto a la muestra negativa; “NS” No hay diferencia significativa con respecto a la muestra negativa.
Precisión:Repetibilidad:
| Concentración ng/mL | 6 fechas duplicadas en la misma placa | Valor del CV | |||||
| 3 | 2.412 | 2.390 | 2.323 | 2.367 | 2.476 | 2.291 | 2,53% |
| 1.5 | 1.780 | 1.883 | 1.884 | 1.908 | 1.876 | 1.883 | 2,19% |
| 0,75 | 1.123 | 1.215 | 1.166 | 1.183 | 1.140 | 1.109 | 3,12% |
| 0,375 | 0,691 | 0,706 | 0,708 | 0,722 | 0.722 | 0,679 | 2,21% |
| 0,1875 | 0,449 | 0,462 | 0,453 | 0,460 | 0,447 | 0,433 | 2,13% |
| 0,094 | 0,306 | 0,308 | 0,304 | 0,311 | 0,295 | 0,302 | 1,65% |
| 0,047 | 0,242 | 0,241 | 0,240 | 0,241 | 0,256 | 0,240 | 2,37% |
| 0 | 0,183 | 0,192 | 0,189 | 0,187 | 0,189 | 0,189 | 1,43% |
Conclusión: Se probaron 6 duplicados en cada concentración en la curva estándar y todos los CV% fueron inferiores al 5%.
Precisión intermedia:
| Precisión intermedia | |||
| Concentración de la muestra | 1,5 ng/ml | 0,375 ng/ml | 0,094 ng/ml |
| Analista 1 | 1.388 | 0,382 | 0,079 |
| Analista 2 | 1.458 | 0,363 | 0,068 |
| Analista 3 | 1.318 | 0,37 | 0,063 |
| Promedio | 1.388 | 0,372 | 0,07 |
| DAKOTA DEL SUR | 0,070 | 0,010 | 0,008 |
| Valor del CV | 5,04% | 2,59% | 11,69% |
3 analistas realizan el experimento ELISA UCF.ME™ UltraNuclease y el CV% fue inferior al 15%
Información del producto:
| Nombre del producto | Producto número | Especificaciones del producto |
| 20157ES25/50/60/80/90 | 25 KU/50 KU/100 KU/1 MU/5 MU | |
| Universidad de California en Berkeley.Kit ELISA de ultranucleasa ME® | 36701ES59 | 96T |
Otros productos relacionados
| Nombre del producto | Producto número | Especificaciones del producto |
| 20159ES25/50/60/80/90 | 25 KU/50 KU/100 KU/1 MU/5 MU | |
| 36703ES96 | 96T |