Descripción
Hola feriado™ Kit de sonda RT-qPCR multiplex de un solo paso (Universidad de Georgia Más) es un kit de PCR cuantitativa multiplex basado en ARN como plantilla. En el proceso del experimento, la transcripción inversa y la PCR cuantitativa se llevaron a cabo en el mismo tubo, lo que simplificó la operación experimental y redujo el riesgo de contaminación.
En este kit, el ADNc de primera cadena se sintetizó de manera eficiente mediante Hifair resistente al calor.MT. V Transcriptasa inversa y amplificada cuantitativamente por UNICON™ Polimerasa de ADN Taq HotStart. El kit contiene principalmente un tampón MP optimizado, una mezcla de enzimas, etc. La solución tampón ya contiene Mg2+ y dNTP. Además, se añaden los factores que pueden inhibir eficazmente la amplificación por PCR no específica y mejorar la eficiencia de amplificación de múltiples reacciones de qPCR, lo que puede garantizar la eficiencia de la amplificación y llevar a cabo hasta múltiples reacciones de amplificación. Se añadió el sistema dUTP/UDG para prevenir eficazmente el riesgo de contaminación por aerosoles.
Características
1. GRAMOBuena versatilidad: Es adecuado para la amplificación por qPCR y la detección de ácidos nucleicos de microorganismos patógenos, genomas humanos, plantas y otras especies..
2. Alta sensibilidad: El sistema de tampón cuidadosamente optimizado mejora la sensibilidad de detección de plantillas de baja concentración hasta 250 copias/ml..
3. Sistema dUP/UDG: Se introduce el sistema anticontaminación dUTP/UDG termolábil para degradar la contaminación por aerosoles de los productos de manera eficiente, reducir los falsos positivos y garantizar resultados auténticos..
4. ApoyoEn Programa rápido: compatible con el programa rápido de 40 min..
5. Súper estabilidad: establemi a 37℃ durante 14 días, congelación y descongelación repetidas 10 veces.
Componentes
| Componentes | Nombre | 16630ES60 (100 toneladas) | 16630ES80 (1000 toneladas) | 16630ES92 (10000 toneladas) |
| 16630-A | Tampón Hifair MP de 5× | 500 microlitros | 5 ml | 50 ml |
| 16630-B | Enzima Hifair Mezcla | 100 microlitros | 1 ml | 10 ml |
| 16630-C | Potenciador de GC | 500 microlitros | 5 ml | 50 ml |
Nota: 1) 5×HifairMT. Buffer MP es la abreviatura de Hola feriadoMT. Tampón de sonda RT-qPCR de un solo paso V Multiplex, que incluye dNTP, dUTP, Mg2+, estabilizadores, potenciadores y más.
2) Mezcla de enzimas Hifair contiene principalmente Hifair resistente al calorMT. V transcriptasa inversa, UNICONMT. Polímeros de ADN HotStart Taq y Base de datos UDGase.
3) El potenciador de GC es opcional. Busque la versión gratuita del potenciador de GC: Gato: 16901ES.
4) El 16630-A y 16630-B son equivalentes a 16901-A y 16901-B, respectivamente.
Presupuesto
| Método de PCR | RT-qPCR de un solo paso |
| Tipo de muestra | ARN |
Almacenamiento
yoél producto debería ser almacenado en -25 °C ~ -15 °C para 1 año.
Cifras
Figura 1. Alta tasa de detección
Instrucciones
1. Reacción Composición
| Componentes | Volumen ((μL) | Concentración final |
| 5×Hifair™ Buffer MP | 5 | 1 × |
| Mezcla de enzimas Hifair | 1 | - |
| Potenciador de GC | 0-5 | - |
| Mezcla de cebadores (10 μM) | 0,4 cada | 0,16 μM |
| Mezcla de sondas (10 μM) | 0,2 cada | 0,08 μM |
| ARN | 1-5 | - |
| H2O libre de ARNasa | hasta 25 | - |
Nota:Asegúrese de mezclar bien antes de usar, evite burbujas excesivas causadas por vibraciones violentas.
a) Concentración del cebador: Cebador mezcla que incluye primer multiplex, Dependiendo de la situación, la concentración óptima de cebador puede estar entre 0,1 y 1,0 μM.
b) Concentración de la sonda: Mezcla de sondas que incluye grupo fluorescente de diferencia de etiquetado de sonda multiplexada, dependiendo de la situación la concentración óptima de la sonda puede estar entre 0,05 y 0.5 micras.
c) Dilución del molde: la PCR cuantitativa es muy sensible y se recomienda diluir el molde. El valor Ct del control es adecuado entre 20 y 35.
d) Preparación del sistema: quitar el cabezal del elemento filtrante. Evitar la contaminación cruzada y la contaminación por aerosoles.
2. Protocolo de ciclismo optimizado
| Etapa de reacción | Temperatura | Tiempo | Ciclo | |
| 1 | Transcripción inversa | 50°Ca | 15 mín. | 1 |
| 2 | Desnaturalización inicial | 95°C | 5 minutos | 1 |
| 3 | Reacción de amplificación | 95°C | 15 segundos | 45 ciclos |
| 60°Cb | 30 segundosdo |
Nota:a) Rtranscripción inversa: La temperatura se puede seleccionar 42°C o 50°C durante 10-15 minutos.
b) Reacción de amplificación: La temperatura se ajusta según el valor de Tm de los cebadores diseñados.
do) Adquisición de señales de fluorescencia:Configure el procedimiento experimental de acuerdo con los requisitos del manual del instrumento.
Pago y seguridad
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Consulta
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Preguntas frecuentes
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