در سال‌های اخیر، شیوع جهانی بیماری‌های عفونی رو به افزایش بوده و عوامل بیماری‌زا به طور فزاینده‌ای متنوع و پیچیده شده‌اند. یک چالش مهم در این سناریو این است که تقریباً نیمی از بیماران با مخمصه داشتن پاتوژن‌های ناشناخته مواجه هستند و تشخیص سریع این عوامل بیماری‌زا را به یک کار دلهره‌آور تبدیل می‌کند. در حال حاضر، تشخیص بالینی پاتوژن عمدتاً به روش‌های کشت سنتی، تکنیک‌های PCR، توالی‌یابی متاژنومیک (mNGS) و توالی‌یابی با هدف پاتوژن (tNGS) متکی است.
PCR کمی فلورسنت در زمان واقعی در تشخیص اسید نوکلئیک SARS-CoV-2 برجسته شده است. به طور مشابه، mNGS به دلیل مشارکت خود در مبارزه با SARS-CoV-2 توجه را به خود جلب کرده است و از تنظیمات بالینی به استفاده روزمره منتقل شده است. tNGS که مزایای PCR و NGS مانند سرعت، دقت و مقرون به صرفه بودن در خدمات توالی‌یابی را ارائه می‌دهد، در زمینه آزمایش‌های بالینی جذابیت بیشتری پیدا می‌کند.
همزمان، کاربرد محصولات بیولوژیکی در زیست پزشکی، کشاورزی بیولوژیکی، انرژی زیستی، تولید بیولوژیکی، حفاظت از محیط زیست و سایر حوزه ها گسترش یافته است. با ادامه رشد سهم بازار محصولات بیولوژیکی، ارگان های دولتی و مقامات مربوطه سیستم ها و استانداردهای مدیریت کیفیت استانداردی را برای این محصولات ایجاد کرده اند. یک منطقه خاص از تمرکز مربوط به حضور باقی مانده های اسید نوکلئیک از سلول های میزبان در محصولات بیولوژیکی است.
محصولات بیولوژیکی مانند داروهای پروتئین نوترکیب، داروهای آنتی بادی، واکسن‌ها و درمان‌های سلولی و ژنی با استفاده از سویه‌ها یا خطوط سلولی متوالی تولید می‌شوند که به طور بالقوه منجر به حفظ اسیدهای نوکلئیک میزبان در محصولات نهایی می‌شوند. اسیدهای نوکلئیک میزبان باقیمانده می تواند عواقب نامطلوبی داشته باشد، مانند تکثیر سلولی کنترل نشده که منجر به تشکیل تومور یا تشدید پاسخ های ایمنی با معرفی ژن های ویروسی می شود. از این رو، حذف موثر باقیمانده اسید نوکلئیک و تشخیص دقیق باقی مانده برای اطمینان از ایمنی محصول بیولوژیکی و برآورده کردن الزامات تحقیقاتی بسیار مهم است. در صنعت، روش‌های qPCR/RT-qPCR به طور گسترده‌ای برای توسعه کیت‌های تشخیص برای تشخیص باقی مانده اسید نوکلئیک میزبان در محصولات بیولوژیکی استفاده می‌شوند.
علاوه بر این، آنزیم‌های مولکولی تجاری معمولاً با استفاده از سویه‌های مهندسی نوترکیب، مانند E. coli بیان می‌شوند که منجر به حضور DNA ژنومی میزبان در این آنزیم‌های مولکولی می‌شود. علاوه بر این، عوامل محیطی و انسانی می توانند DNA آلوده را به محصولات آنزیمی مولکولی وارد کنند.
در طی فرآیند تشخیص پاتوژن، اسیدهای نوکلئیک باکتری پس زمینه ناشی از آلودگی ممکن است اسیدهای نوکلئیک هدف را با فراوانی کم تحت الشعاع قرار دهند یا در کنار اسیدهای نوکلئیک هدف شناسایی شوند. این می تواند حساسیت تشخیص هدف را تحت تاثیر قرار دهد یا منجر به نتایج مثبت کاذب شود و تصمیمات تشخیص و درمان گرفته شده توسط متخصصان پزشکی را پیچیده کند.
در توسعه و تولید محصولات کنترل کیفیت برای آزمایش باقی مانده اسید نوکلئیک میزبان، وجود اسیدهای نوکلئیک میزبان باقیمانده، از جمله اسیدهای نوکلئیک میزبان، از جمله اسیدهای انسان، موش، E. coli، مخمر و دیگران، در آنزیم های مولکولی می تواند منجر به عدم دقت در تعیین کمیت محصولات کنترل کیفیت باقی مانده اسید نوکلئیک میزبان شود. این امر خطرات ایمنی بالقوه ای را در تولید محصولات بیولوژیکی ایجاد می کند.
YEASEN UCF.METM محلول آنزیم مولکولی با باقیمانده فوق العاده کم
به منظور حل مشکل باکتری های پس زمینه و تداخل باقی مانده اسید نوکلئیک میزبان، YEASEN یک پلت فرم تحقیق و توسعه و تولید کامل برای UCF.ME ایجاد کرده استTM آنزیم های مولکولی با باقیمانده فوق العاده کم و به تولید در مقیاس بزرگ انواع UCF دست یافته است.منTM آنزیم های مولکولی با باقیمانده فوق العاده کم از طریق انتخاب مواد، کنترل محیطی، بهینه سازی فرآیند و تضمین کیفیت.
YEASEN UCF.METM محصولات آنزیمی مولکولی با باقیمانده فوق العاده کم
YEASEN مجموعه کاملی از آنزیم های مولکولی مانند qPCR/RT-qPCR، ساختمان کتابخانه NGS را اصلاح کرد. در همان زمان، UCF.ME™ فرآیند باقیمانده فوق العاده کم برای پردازش محصولات آنزیمی مولکولی استفاده می شود، ما می توانیم مجموعه کاملی از مواد خام آنزیم مولکولی باقیمانده میزبان فوق العاده کم را برای qPCR/RT-qPCR و NGS ارائه کنیم. به بهبود دقت تشخیص
جدول 1 لیست YEASEN UCF.METM محصولات آنزیمی مولکولی با باقیمانده فوق العاده کم
| طبقه بندی محصول | نام محصول | شماره کاتالوگ | معیارهای E. coli کنترل کیفیت gDNA |
| UCF.METM محصولات آنزیمی با باقیمانده فوق العاده کم برای qPCR/RT-qPCR | هیف UCF.METM Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 14314ES | 0.005 کپی/U |
| Hifair UCF.METM ترانس کریپتاز معکوس V (U/μL 200) | 14608ES | 0.005 کپی/U | |
| UCF.METM مهارکننده RNase موش (40 U/μL) | 14672ES | 0.001 نسخه/U | |
| UCF.METM مهارکننده RNase با میل ترکیبی بالا (40 U/μL) | 14675ES | 0.001 نسخه/U | |
| UCF.METM Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)، حساس به حرارت، 1 U/μL | 14466ES | ＜0.1 کپی/U | |
| UCF.METM Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)، 1 U/μL | 14454ES | ＜0.1 کپی/U |
ارائه اطلاعات جزئی (UCF.METM Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase به عنوان مثال)
- آرباقی ماندهاز coli gDNA ＜0.005 نسخه/U
- coliباقیمانده های gDNA دسته های مختلف UCF.METMآنزیم Taq (Cat#14314ES) شناسایی شد. نتیجه نشان داد که E. coli gDNA باقیمانده باقی مانده از Taq DNA پلیمراز بسیار کمتر از 0.005 کپی/U بود.
شکل 1: تشخیص E.coli gباقیمانده DNA UCF.METM آنزیم Taq (Cat#14314ES)
- هیچ DNA پلاسمید باقی مانده شناسایی نشد
باقی مانده های DNA پلاسمید UCF.METM آنزیم Taq (Cat#14314ES) و Taq DNA پلیمراز با نام تجاری A شناسایی شد. نتایج نشان داد که باقیمانده DNA پلاسمیدی در Taq DNA پلیمراز مارک A وجود دارد. هیچ DNA پلاسمیدی در UCF.ME شناسایی نشد.TM آنزیم Taq (Cat#14314ES).
شکل 2: نتایج تشخیص باقیمانده DNA پلاسمید
- یازده نوع از باکتری های پس زمینه رایج شناسایی نشدند
از UCF.ME استفاده کنیدTM آنزیم Taq (Cat#14314ES) همراه با پرایمرها و پروب های سودوموناس آئروژینوزا، اسینتوباکتر بومانی، Serratia marcescens، کلبسیلا پنومونیه، استنوتروفوموناس مالتوفیل، استرپتوکوک پنومونیه، انتروکوکوس فاسیوم، استافیلوکوکوس اورئوس، E. coli، انتروکوکوس فکالیس برای تهیه premix qPCR. NTC (بدون کنترل الگو) شناسایی شد، نتایج نشان داد که هیچ باقیمانده ای از 11 باکتری پس زمینه رایج بالا در UCF.ME شناسایی نشد.TM آنزیم Taq (Cat#14314ES).
شکل 3: نتایج آزمایش 11 باکتری پس زمینه رایج (محدود به فضا، سودوموناس آئروژینوزا، اسینتوباکتر بومانی، Serratia marcescens و کلبسیلا پنومونیه به عنوان نمونه نشان داده شده است)
- ارائه مورد آزمایشی مشتری
آنزیم تجاری Taq و YEASEN UCF.METM آنزیم Taq (Cat#14314ES) برای تشخیص NTC همراه با مشتری استفاده شد. E. coli پرایمر اختصاصی، و نتایج نشان داد که آنزیم تجاری Taq در 22 آزمایش مکرر 5 بار به اوج خود رسید. UCF.METM آنزیم Taq (Cat#14314ES) در 22 تکرار به اوج خود نرسید، که نشان می دهد UCF.METM آنزیم Taq (Cat#14314ES) شناسایی نشد E. coli gDNA
شکل 4: دیetection نتیجه از E.coli باقیمانده gDNA (مورد آزمایش مشتری)
سمت چپ: آنزیم معمولی Taq تجاری موجود. سمت راست: UCF.METM آنزیم Taq (Cat#14314ES)
توصیه محصول مرتبط
| طبقه بندی محصول | نام محصول | شماره کاتالوگ |
| کیت تشخیص باقیمانده اسید نوکلئیک میزبان | 41332ES | |
| 41331ES | ||
| 41307ES | ||
| 41308ES | ||
| کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان Hansenula polymorpha | 41317ES | |
| E.coli کیت تشخیص باقیمانده RNA سلول میزبان | 41318ES |