Introduction
Les kits d'analyse du gène rapporteur de la luciférase, en tant qu'outil de base indispensable au développement de médicaments, jouent un rôle crucial dans des processus clés tels que le criblage à haut débit, l'évaluation de l'efficacité et la validation des cibles en raison de leur capacité à surveiller l'expression des gènes et la transduction du signal en temps réel. L'application de cette technologie a considérablement amélioré l'efficacité du criblage et de l'évaluation des médicaments, accélérant ainsi la découverte et le développement de nouveaux médicaments.
Principe de détection du gène rapporteur de la luciférase
La technologie de détection du gène rapporteur de la luciférase permet l'analyse quantitative de l'activité de la luciférase de la luciférase en catalysant l'oxydation de la luciférine en oxyluciférine et en générant une bioluminescence. Cette technologie présente une valeur d'application significative dans les domaines de la validation du gène cible des miRNA et de la régulation de l'activité transcriptionnelle du promoteur. En insérant des éléments régulateurs du gène cible en amont et en aval du gène de la luciférase pour construire un plasmide rapporteur de la luciférase, les cellules peuvent être transfectées et soumises à une stimulation ou un traitement correspondant. Par la suite, en lysant les cellules et en mesurant l'activité de la luciférase, les changements d'activité des éléments régulateurs dans différentes conditions de stimulation peuvent être évalués, ce qui permet d'acquérir une compréhension plus approfondie des mécanismes de régulation du gène expression.
Les différences entre les applications de détection de luciférase simple et double
Les tests de gènes rapporteurs sont principalement divisés en tests de gènes rapporteurs à luciférase simple et tests de gènes rapporteurs à double luciférase. Dans des applications spécifiques, comment pouvez-vous déterminer si l'expérience utilise un système de détection à luciférase simple ou à double luciférase ? Examinons les différences.
Système d'analyse par rapporteur de luciférase unique
Nombre de gènes rapporteurs : Un seul gène rapporteur de la luciférase de luciole ;
Type de transfection : Un seul plasmide de gène rapporteur, après transfection, la sélection du médicament est utilisée pour construire une lignée cellulaire de gène rapporteur stable exprimant la luciférase ;
Processus de détection : Seul le signal de la luciférase de luciole doit être détecté, opération simple, période de détection courte, adaptée au criblage de médicaments à haut débit ;
Analyse du scénario d'application : Il s'agit généralement de construire une lignée cellulaire monoclonale surexprimante stable, car le niveau d'expression de ces lignées cellulaires est relativement stable et uniforme, sans l'influence des variations expérimentales dues à l'efficacité de la transfection et à la viabilité cellulaire. L'opération est simple et, comme seul le signal de la luciférase de luciole est détecté, l'analyse des données est plus pratique. Associé aux avantages d'un temps de détection court, il est particulièrement adapté au criblage de médicaments à haut débit et répond aux besoins de détection d'échantillons à grande échelle.
Système de détection de gènes rapporteurs à double luciférase
Quantité de gènes signalée : Gènes rapporteurs doubles de la luciférase de luciole et de la luciférase de Renilla ;
Type de transfection : Co-transfection de deux plasmides de gènes rapporteurs, principalement par transfection transitoire ;
Processus de détection : Il est nécessaire de détecter d'abord le signal de la luciole, puis le signal de Renilla, et le rapport des deux (Luciole/Renilla) est utilisé pour le calcul des données finales ;
Analyse du scénario d'application : La transfection est généralement réalisée par transfection transitoire, avec co-transfection d'un plasmide contenant le gène de la luciférase Renilla comme référence interne, fournissant une référence pour l'expérience, réduisant ainsi l'interférence de facteurs externes tels que la viabilité cellulaire et l'efficacité de la transfection. Grâce au calcul du ratio, il est possible de corriger les variations du nombre de cellules, de l'efficacité de la transfection et de l'activité cellulaire, améliorant ainsi la précision des résultats expérimentaux. C'est un outil important dans les domaines de la régulation de l'expression génétique, des voies de transduction du signal et du criblage de médicaments.
Série de produits
Yeasen La gamme de produits de détection de gènes Luciferase Reporter offre une solution de détection quantitative pratique et efficace. La conception à composant unique simplifie le processus d'utilisation et la combinaison parfaite d'une sensibilité élevée avec une demi-vie de signal super longue de 5 heures répond aux besoins de détection de dépistage de médicaments à grande échelle. Nous proposons trois produits : Bio-One Step, Steady-One Step et Bright-One Step, pour s'adapter aux différentes exigences de sensibilité et de stabilité.
| nom du produit | Bio-One Step | Stable - Un pas | Bright-Une étape |
| Code produit | |||
| Scénarios d'application et caractéristiques | Ce kit offre un équilibre relatif entre l'intensité et la stabilité du signal. Il maintient une intensité de signal relativement élevée tout en la gardant relativement stable sur une certaine période de temps. | La demi-vie peut durer plus de 5 heures. Les variations de la valeur de luminescence sont minimes, en particulier au cours des 2 premières heures. Il convient aux analyses à très haut débit ou sur plaques à 384 puits. | Haute sensibilité et haute intensité du signal. Convient aux expériences nécessitant une sensibilité élevée. |
| Demi-vie du signal | 60 minutes | 5 h | 30 minutes |
| Caractéristiques opérationnelles | Une étape | Une étape | Une étape |
Avantages du produit
Demi-vie du signal longue : La demi-vie du signal peut atteindre jusqu'à 5 heures, répondant aux besoins des expériences à haut débit et évitant les différences de signal causées par la différence de temps entre le premier et le dernier puits en raison d'un grand nombre d'échantillons, garantissant des résultats plus stables et plus fiables.
Signal de fluorescence fort : La valeur du signal peut atteindre 8 ordres de grandeur, offrant une large fenêtre de détection et un support de données solide pour le dépistage précoce des médicaments et l'évaluation de l'efficacité.
Utilisation facile : Le fonctionnement en une seule étape évite les procédures expérimentales compliquées. Ajoutez simplement le réactif de détection et attendez 5 minutes avant de démarrer la machine pour la détection.
Choix multiples : Selon différents scénarios d'application, 3 produits différents sont disponibles, qui peuvent être sélectionnés en fonction des exigences expérimentales en matière de valeur du signal et de stabilité du signal.
Données du produit
01 Comparaison des performances de Yeasen Gène rapporteur différent Kits d'analyse
La vérification de trois types de kits d'analyse a été réalisée sur des lignées cellulaires exprimant de manière stable la luciférase de luciole, et les résultats ont montré que le produit Bright-One Step a des valeurs de signal plus élevées ; le produit Steady-One Step a une demi-vie de signal plus longue et des signaux plus stables ; le produit Bio-One Step a non seulement des valeurs de signal élevées mais maintient également une demi-vie de signal plus longue.
Figure 1. Comparaison des performances de différents kits d'analyse du gène rapporteur Yeasen
02 Comparaison du réactif de détection du gène rapporteur de luciférase Yeasen Bio-One Step avec les produits concurrents
Lors de l'utilisation de Yeasen Bio-One Step, du concurrent P et du concurrent V sur une lignée cellulaire qui surexprime de manière stable la luciférase de luciole, les résultats montrent que la valeur du signal et la demi-vie du signal de Yeasen Bio-One Step sont essentiellement cohérentes avec le concurrent P, et la demi-vie du signal est supérieure à celle du concurrent V.
Figure 2. Comparaison du réactif de détection du gène rapporteur de la luciférase Yeasen Bio-One Step avec ses concurrents
03 Test de stabilité au gel-décongélation du réactif de détection du gène rapporteur de la luciférase Yeasen Bio-One Step
Le réactif de détection du gène rapporteur de luciférase Yeasen Bio-One Step a subi des expériences répétées de congélation-décongélation, et les résultats montrent que même après 5 cycles de congélation-décongélation, les performances du produit restent stables sans changements significatifs.
Figure 3.Test de congélation-décongélation répété du réactif de détection du gène rapporteur de la luciférase Yeasen Bio-One Step
Procédure opérationnelle
01 Transfection cellulaire
Ajoutez directement le réactif à la suspension cellulaire, puis pipetez de haut en bas 5 fois pour assurer un mélange complet, attendez 5 minutes pour permettre la lyse complète des cellules.
02 Chargement d'échantillons
Pipeter 100 μL du mélange (réactif de détection + milieu de culture cellulaire) dans chaque puits de la plaque de détection.
03 Détection de fluorescence
Réglez les paramètres sur le lecteur de plaques. Placez la plaque de détection dans le lecteur de plaques, faites-la vibrer pendant quelques secondes, puis procédez à la détection.
Liste des produits
| Catégorie de produit
| Nom du produit | Code produit | Spécifications du produit |
| Kit d'analyse du gène rapporteur de la luciférase | 11411ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | |
| 11413ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| 11412ES60/80/81 | 100T/10×100T/1000T | ||
| Kit d'analyse du gène rapporteur de la double luciférase
| 11402ES60/80 | 100T/1000T | |
| 11405ES60/80 | 100T/1000T |