1 Le mécanisme d'action de la blasticidine S
Blasticidine S est un antibiotique nucléosidique extrait de Streptomyces griseochromogenes, qui inhibe spécifiquement la synthèse protéique dans les cellules procaryotes et eucaryotes en interférant avec la formation de liaisons peptidiques dans le ribosome. Son mécanisme d'action comprend le blocage de l'hydrolyse du peptidyl-ARNt induite par des facteurs de libération et l'amélioration de la liaison de l'ARNt à la grande sous-unité ribosomique, inhibant ainsi dans une certaine mesure la formation de liaisons peptidiques.
La blasticidine S a un mode d'action rapide et puissant, et de très faibles concentrations d'antibiotiques peuvent entraîner une mort cellulaire rapide. Elle a non seulement une inhibition significative de la synthèse des protéines chez les bactéries et les eucaryotes, mais également une activité contre les champignons, les nématodes et les cellules tumorales. La blasticidine S est souvent utilisée pour cribler les cellules transfectées porteuses des gènes bsr ou BSD.
2 Application de la blasticidine S
2.1 Culture et criblage cellulaires
- Cellules de mammifères : blasticidine S est souvent utilisée pour cribler les cellules transfectées porteuses des gènes bsr ou BSD. Ces gènes de résistance, respectivement issus de B. cereus et d'Aspergillus, ont pu convertir la murancidine en dérivés avirulents, permettant ainsi la destruction sélective des cellules ne portant pas de gènes de résistance, avec des concentrations de travail de blasticidine S dans les cellules de mammifères allant de 1 à 50 μg/mL.
| Caune | Genus | Oorganisation | Cmilieu de culture | La concentration de blasticidine S (μg/mL) |
| HéLa | Humain | Utérus | DMEM | 3-10 |
| HEK293 | Humain | Rein | DMEM | 3-10 |
| B16 | Souris | Mélanome | RPMI | 3-10 |
| PC1.0 | Hamster | Adénocarcinome | RPMI | 10-30 |
| CHO | Hamster | Ovaire | DMEM | 5-15 |
- Sélection bactérienne : En culture bactérienne, la concentration recommandée de 25 à 100 µg/mL peut rapidement provoquer la mort des cellules sans gènes de résistance.
E.coli est légèrement moins sensible à la blastidine S, mais les transformants sont tolérants à la blastidine S et peuvent être criblés avec un milieu LB à faible teneur en sel (pH 8) dans une plage de concentration de 50 à 100 μg/mL de blastidine S, et un pH élevé améliore l'activité de la blastidine S.
- Cellules végétales : également applicables aux expériences de transfert de gènes dans les cellules végétales, les BSR et BSD sont couramment utilisés comme marqueurs de criblage.
2.2 Recherche sur la synthèse des protéines
- La blasticidine a été utilisée pour étudier le processus de synthèse des protéines au niveau de la formation de liaisons peptidiques, en particulier dans les cellules HEK293-T et les cellules HEK-D5 des constructions TLR-2.
2.3 propriétés antifongiques
- Il a également une certaine activité antifongique, qui peut être utilisée pour la prévention et le traitement de la pyriculariose du riz. Son effet bactéricide est principalement d'affecter la synthèse des protéines et peut inhiber la germination des spores, le développement des hyphes et la formation des spores.
2.4 Autres applications
- La blasticidine a également été utilisée pour étudier l’effet inhibiteur des cellules tumorales.
- Il agit également comme agent de sélection pour les cellules transformées contenant le gène de résistance bls, bsr ou BSD.
3 procédures expérimentales liées à la blasticidine S (dépistage de transfectants stables de mammifères)
1) La blasticidine S est généralement utilisée à une concentration de 10 μg/mL. Les cellules sont transfectées avec des plasmides portant le gène bsr ou BSD et incubées dans un milieu de croissance normal contenant de la blasticidine S pour sélectionner des transfectants stables.
2) 48 heures après la transfection, passage des cellules dans un milieu frais contenant une concentration appropriée de Blasticidine S (Remarque : les antibiotiques fonctionnent mieux lorsque les cellules sont en phase de division active. L'efficacité des antibiotiques diminue si la densité cellulaire est trop élevée. Lors de la division des cellules, la confluence ne doit pas dépasser 25 %).
3) Tous les 3-4 jours, retirez le milieu usagé et ajoutez du milieu frais contenant l'antibiotique.
4) Après 7 jours, vérifiez la formation de colonies cellulaires. Selon le type de cellule hôte et l'efficacité de la transfection/sélection, la formation de colonies peut nécessiter une semaine supplémentaire ou plus.
5) Transférer 5 à 10 clones résistants dans des boîtes de culture cellulaire de 35 mm et les conserver dans un milieu sélectif pendant 7 jours. Effectuer ensuite des tests de cytotoxicité.
4 Recommandation de produit
Yeasen Biotech Blasticidine S (60218ES) est disponible sous deux formes : poudre (1 g) et solution (10 mg/mL).
| Nom du produit | Chat# | Spécification | Apparence |
| Blasticidine S CAS : 3513-03-9 | 60218ES10 | 10 mg | Solution (10 mg/mL, dans HEPES) Tampon (pH 7,5) |
| 60218ES50 | 5×10 mg | ||
| 60218ES60 | 10×10 mg | ||
| 60218ES80 | 1 g | Poudre (Préparez une solution mère de 5 à 10 mg/mL avec de l'eau stérile ou un tampon lors de l'utilisation) |
5 Articles publiés avec nos réactifs
[1] Mo J, Tan K, Dong Y, Lu W, Liu F, Mei Y, Huang H, Zhao K, Lv Z, Ye Y, Tang Y. Ciblage thérapeutique du pilote oncogène EWSR1::FLI1 dans le sarcome d'Ewing par inhibition du complexe FACT. Oncogene. 2023 janv.;42(1):11-25. doi: 10.1038/s41388-022-02533-1. Publication en ligne du 10 novembre 2022. PMID: 36357572. (SI:8.0)
[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. La boucle de rétroaction positive SMAD9-MYCN représente une dépendance unique pour le neuroblastome amplifié par MYCN. J Exp Clin Cancer Res. 2022 20 décembre ;41(1) :352. doi : 10.1186/s13046-022-02563-3. PMID : 36539767 ; PMCID : PMC9764568.(SI:11.3)
6 Produits connexes
| Nom du produit | Chat# | Spécification |
| Chlorhydrate de ciprofloxacine | 60201ES05/25/60 | 5/25/100g |
| Ampicilline, sel de sodium | 60203ES10/60 | 10/100g |
| Hyclate de doxycycline | 60204ES03/08/25 | 1/5/25g |
| Chloramphénicol, qualité USP | 60205ES08/25/60 | 5/25/100g |
| Sulfate de kanamycine | 60206ES10/60 | 10/100g |
| Tétracycline HCl Chlorhydrate de tétracycline (USP) | 60212ES25/60 | 25/100g |
| Chlorhydrate de vancomycine | 60213ES60/80/90 | 100 mg/1 g/5 g |
| Sel de sulfate de gentamicine | 60214ES03/08/25 | 1/5/25g |
| Chlorhydrate de spectinomycine | 60215ES08 | 5g |
| Phléomycine (20 mg/mL en solution) | 60217ES20/60 | 20/5×20mg |
| Blasticidine S (Blasticidine) | 60218ES10/60 | 10/10×10mg |
| Nystatine | 60219ES08 | 5g |
| Sulfate de G418 (généticine) | 60220ES03/08 | 1/5g |
| Puromycine (solution 10 mg/mL) | 60209ES10/50/60/76 | 1 × 1 / 5 × 1 / 1 0 × 1 / 50 × 1 mL |
| Dichlorhydrate de puromycine | 60210ES25/60/72/76/80 | 25/100/250/500 mg / 1 g |
| Hygromycine B (50 mg/mL) | 60224ES03 | 1 g (20 ml)/10 × 1 g (20 ml) |
| Hygromycine B | 60225ES03/10 | 1/10g |
| Érythromycine | 60228ES08/25 | 5/25g |
| Timentine | 60230ES07/32 | 3,2/10×3.2g |
| Auréobasidine A (AbA) | 60231ES03/08/10 | 1/5×1/10×1mg |
| Sulfate de polymyxine B | 60242ES03/10 | 1/10 MU |