--Le kit d'analyse Yeasen TUNEL montre une fluorescence plus belle
La liaison de la fluorescéine-dUTP à l'ADN coupé par la transférase TdT est l'une des méthodes les plus courantes pour détecter l'apoptose, par exemple le kit de mort cellulaire in situ de Roche est basé sur ce principe. L'activité de la transférase TdT dans le produit affecte directement l'efficacité du marquage. Yeasen Biologicals, basé sur la production d'enzymes, s'efforce de développer des produits de haute qualité à base d'enzymes et a lancé trois tests Tunel marqués à la fluorescéine (Alexa Fluor 640, Alexa Fluor 488 et FITC) pour répondre aux exigences de qualité élevées de nos clients.
Actuellement, plus de 120 groupes de recherche utilisent ce produit et ont publié de nombreux articles en anglais dans des revues faisant autorité, telles que Theranostics et EMBO Molecular Medicine.
Mécanisme de détection
Au stade tardif de l'apoptose, les cassures double brin ou simple brin de l'ADN chromosomique produisent un grand nombre d'extrémités 3-OH collantes et, sous l'action du transfert terminal des désoxyribonucléotides (TdT), le dUTP marqué à la fluorescéine/enzyme se lie à l'extrémité 3-terminale de l'ADN, de sorte que la détection de l'apoptose peut être réalisée par la détection de la fluorescence, appelée marquage des extrémités de coupure médié par la transférase terminale des désoxyribonucléotides. Cette méthode est appelée marquage des extrémités de coupure médié par la transférase terminale des désoxyribonucléotides (TUNEL) et le principe est illustré dans la Figure 1.
Figure 1 : Schéma de principe du marquage des extrémités de la chaîne médié par la transférase de désoxynucléotidyl terminale (TUNEL)
Caractéristiques du produit
- Large gamme d'applications
Peut être utilisé pour les coupes de tissus incluses dans la paraffine, les coupes de tissus congelés, les cellules cultivées et les cellules isolées des tissus.
- Haute sensibilité de détection
Une très petite quantité de cellules apoptotiques peut être détectée.
- Faible interférence de fond
Rapport signal/bruit élevé.
- Polyvalence d'observation
Observation par microscopie à fluorescence, détection par écoulement continu.
Présentation des données
1. Essai en tunnel sur les préadipocytes de souris (3T3-L)
Figure 2 : Détection de l'apoptose des préadipocytes de souris 3T3-L. La première ligne représente le contrôle négatif et la deuxième ligne représente le contrôle positif. Réactif de détection : Cat. N° 40306 Kit de détection d'apoptose TUNEL (FITC)
2. Détection par tunnel d'échantillons de coupes de paraffine
Figure 3 : Le LY3009120 seul ou en association avec le vémurafénib et l'obatoclax a efficacement retardé le cancer de la thyroïde dans un modèle de tumeur de greffe sous-cutanée. IF = 8,8. Type d'échantillon : tissu tumoral inclus dans la paraffine (prélevé sur des souris nudes). Réactif de détection : kit de détection d'apoptose TUNEL n° de référence 40307 (Alexa Fluor 488).
3、Détection de tunnels d'exploration cellulaire
Figure 4 : Effet du sulfate de zinc sur l’apoptose des cellules endothéliales dans différents sous-groupes. Type d'échantillon : HUVEC (cellules endothéliales de veine ombilicale humaine). Réactif de détection : n° de référence 40308 Kit de détection d'apoptose TUNEL (Alexa Fluor 640)
4、Cytométrie de flux pour détecter l'apoptose
Figure 5 : Le traitement PA peut réduire efficacement l'apparition de l'apoptose pendant la reprogrammation. IF = 3,7. Type d'échantillon : cellules iPS. Réactif de détection : kit de détection de l'apoptose TUNEL n° de catalogue 40307 (Alexa Fluor 488).
Citation de littérature
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Questions fréquemment posées
Q: Apparition d'un marquage fluorescent non spécifique ?
1) Les tissus/cellules eux-mêmes présentent des niveaux élevés d'activité nucléase ou polymérase, ce qui peut facilement conduire à l'apparition d'un marquage fluorescent non spécifique, comme dans le cas des cellules musculaires lisses. La solution consiste à fixer les cellules ou les tissus immédiatement après leur prélèvement et à les fixer suffisamment pour empêcher ces enzymes de provoquer de faux positifs.
2) L'utilisation de fixateurs inappropriés, tels que certains fixateurs acides, conduit à des faux positifs. Il est recommandé d'utiliser un fixateur de paraformaldéhyde neutre à 4 % fraîchement préparé.
3) Une fluorescence non spécifique peut également se produire lorsque le temps de réaction du test TUNEL est trop long et que la surface de la cellule ou du tissu ne peut pas être maintenue humide. Veillez à contrôler le temps de réaction et à vous assurer que la solution de réaction du test TUNEL recouvre bien l'échantillon.
Q: Le fond de fluorescence est très élevé ?
1) Les cellules qui se divisent et prolifèrent à un rythme élevé, avec des niveaux élevés de transcription, présentent parfois également des cassures d’ADN dans le noyau.
2) Une exposition prolongée à la lumière d’excitation conduit à de faux positifs.
Q: Faible efficacité d’étiquetage ?
1) La fixation avec de l'éthanol ou du méthanol conduit à une faible efficacité de marquage.
2) Le temps de fixation est trop long, ce qui entraîne un degré de réticulation trop élevé. Il est conseillé de réduire le temps de fixation.
3) La section de tissu est trop épaisse, ce qui rend l'effet de fixation insatisfaisant, et il est préférable de contrôler dans les 10 μm.
(4) Extinction de la fluorescence : la fluorescence sera fortement éteinte en 10 minutes de lumière normale. La solution consiste à éviter le fonctionnement de la lumière.
Détails du produit
| Nom du produit | Numéro d'article | Spécification |
| Kit de détection de l'apoptose à l'annexine V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40302ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit de détection de l'apoptose à l'annexine V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40303ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit de détection de l'apoptose Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD | 40313ES60 | 100T |
| 40305ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40304ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit de détection de l'apoptose Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD | 40312ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40306ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40307ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40308ES20/50/60 | 20T/50T/100T |