Mitochondries
Les mitochondries sont les usines énergétiques de la cellule, le principal site de la phosphorylation oxydative intracellulaire et de la synthèse de l'adénosine triphosphate (ATP), qui fournit l'énergie nécessaire aux activités cellulaires. 95 % de l'énergie nécessaire aux activités de la vie cellulaire provient des mitochondries. En plus de fournir de l'énergie aux cellules, les mitochondries sont également impliquées dans des processus tels que la différenciation cellulaire, le transfert d'informations cellulaires et l'apoptose, et possèdent la capacité de réguler la croissance cellulaire et le cycle cellulaire. Par conséquent, des analyses telles que les mitochondries et les membranes mitochondriales sont une partie essentielle de l'étude des cellules.
Définition et importance du potentiel de membrane mitochondriale
Le potentiel de membrane mitochondriale résulte de la distribution de charge des deux côtés de la membrane mitochondriale interne et constitue un facteur clé dans le maintien d'une fonction mitochondriale normale. Dans les mitochondries, la chaîne de transport d'électrons génère un gradient de protons par le biais de réactions redox qui stimulent la synthèse d'ATP. La stabilité du potentiel de membrane mitochondriale est directement liée à l'approvisionnement énergétique de la cellule et à son statut de survie. De nombreuses études ont montré que les mitochondries sont étroitement liées à l'apoptose, dans laquelle la diminution du potentiel transmembranaire mitochondrial est considérée comme l'un des premiers événements du processus de réaction en cascade apoptotique. Elle se produit avant l'apparition de caractéristiques apoptotiques (condensation de la chromatine, cassures de l'ADN) dans le noyau, et une fois que le potentiel transmembranaire mitochondrial s'effondre, l'apoptose est irréversible. Ainsi, la diminution du potentiel de membrane mitochondriale est un événement caractéristique des premiers stades de l'apoptose.
Principe de fonctionnement de la sonde JC-1
JC-1 est un colorant fluorescent lipidique cationique, qui peut être utilisé comme indicateur du potentiel transmembranaire mitochondrial. JC-1 existe sous deux états, monomère et multimère. À faible concentration, il existe sous forme de monomère et une fluorescence verte peut être détectée. Lorsqu'il est détecté par un test de flux continu, il se trouve généralement dans le canal FL-1 (le même canal que le FITC). À haute concentration, il existe sous forme de multimère et la lumière rouge peut être détectée, et lorsqu'il est détecté par un test de flux continu, il se trouve généralement dans le canal FL-2 (le même canal que PE). JC-1 peut également être utilisé comme colorant fluorescent lipidique cationique et peut être utilisé comme indicateur de potentiel transmembranaire mitochondrial. et PE même canal). En raison du changement de concentration de JC-1, un processus de transition réversible entre le monomère et le multimère se forme.
Dans les cellules normales, lorsque le potentiel membranaire est normal, JC-1 pénètre dans les mitochondries par la polarité de la membrane mitochondriale et forme des multimères fluorescents rouges en raison de l'augmentation de la concentration, tandis que dans les cellules apoptotiques, le potentiel transmembranaire mitochondrial est dépolarisé et JC-1 est libéré des mitochondries à une concentration réduite et inversé sous la forme de monomère fluorescent vert. Par conséquent, les changements du potentiel membranaire mitochondrial peuvent être détectés en détectant la fluorescence verte et rouge.
Remarque : Images citées sur Internet
Sonde JC-10
JC-10, un dérivé de JC-1, est une sonde dépendante du potentiel utilisée pour déterminer le potentiel transmembranaire mitochondrial par cytométrie de flux, microscopie à fluorescence et dosages de fluorescence sur plaque de microtitration. Dans les cellules saines, JC-10 s'accumule sélectivement dans les mitochondries, générant des agrégats rouges qui présentent un large spectre d'excitation et des valeurs d'émission élevées à 590 nm.Cependant, dans les cellules apoptotiques et nécrotiques à faible potentiel transmembranaire mitochondrial, le JC-10 se diffuse hors des mitochondries et produit des monomères JC-10, ce qui entraîne un déplacement vers l'émission verte (525 nm). Il a été utilisé avec succès comme indicateur du potentiel transmembranaire mitochondrial dans divers types d'échantillons, notamment les myocytes, les neurones, les tissus intacts et les mitochondries isolées.
JC-10 – Remplacement du JC-1
- Stabilité : Le JC-10 présente moins de biais de détection car il présente une solubilité plus élevée et une sensibilité plus élevée dans les milieux aqueux.
- Signal amélioré : le JC-10 a un rapport signal/bruit de fond plus élevé que le JC-1.
- Sensibilité améliorée : le JC-10 est capable de détecter des changements subtils dans la perte de potentiel transmembranaire mitochondrial mieux que le JC-1 dans toutes les lignées cellulaires testées.
- Large application : le JC-10 peut être utilisé dans les hépatocytes primaires de rat.
- Pratique : le JC-10 est compatible avec les marqueurs enzymatiques fluorescents, les imageurs cellulaires et les cytomètres de flux.
Remarques : Les modifications du potentiel de membrane mitochondriale induites par les comédons ont été mesurées dans les cellules Jurkat avec JC-10 et JC-1. Après avoir traité les cellules Jurkat avec de la camptothécine (10 mM) pendant 4 h, des solutions de suréchantillonnage de colorant JC-1 et JC-10 ont été ajoutées aux puits et incubées pendant 30 min. L'intensité de fluorescence des formes agrégées et monomériques de JC-1 et JC-10 a été mesurée à Ex/Em = 490/525 nm et 490/590 nm à l'aide d'un marqueur enzymatique NOVOstar (BMG Labtech).
Analyse des résultats
Lors de la détection du monomère JC-1, la lumière d'excitation peut être réglée à 490 nm et la lumière d'émission à 530 nm ; lors de la détection du polymère JC-1, la lumière d'excitation peut être réglée à 525 nm et la lumière d'émission à 590 nm. L'apoptose a été détectée par cytométrie de flux, la fluorescence verte a été détectée par le canal FL-1 et la fluorescence rouge a été détectée par le canal FL-2. FL-1+, FL-2+ sont des cellules normales et FL-1+, FL-2- sont des cellules apoptotiques.
Remarque : la source de l'image est le site Web des forums de la China Streamline Association
Opérez sans aucun doute
Q : Sonde fluorescente de potentiel de membrane mitochondriale JC-1, ce produit peut-il être utilisé pour colorer des coupes de tissus ?
A : Digérer le tissu vivant en cellules individuelles pour assurer l’activité des cellules avant la coloration.
Q : Puis-je fixer les cellules avant de les colorer avec JC-1 ?
R : Non. Le colorant JC-1 s'accumule dans les mitochondries en fonction du potentiel et peut être utilisé pour détecter des cellules, des tissus ou des potentiels de membrane mitochondriale purifiés. L'immobilisation perturbe le potentiel électrique, ce qui entraîne l'incapacité de la sonde à s'accumuler sur les mitochondries et une perte de spécificité.
Q: Il y a des particules agrégées dans la solution de travail JC-1 et je prévois de les éliminer par centrifugation avant la coloration, existe-t-il des paramètres recommandés pour la centrifugation ?
R : La solution de travail JC-1 peut être centrifugée à 13 000 g pendant environ 1 à 2 minutes.
Informations de commande
| Nom du produit | Numéro d'article | Spécification |
| Sonde fluorescente de potentiel de membrane mitochondriale JC-1 | 40705ES03/08 | 1 mg/5 mg |
| Sonde fluorescente de potentiel de membrane mitochondriale JC-10 | 40707ES03/08 | 1 mg/5 mg |