Introduction à l'apoptose
L'apoptose est un phénomène de mort cellulaire programmée qui se produit pendant le développement d'une cellule ou lorsqu'elle est affectée par certains facteurs, et est déclenchée par la régulation des gènes intracellulaires et de leurs produits. Dans la voie de l'apoptose, les événements se produisent dans un ordre chronologique, un par un, conduisant à la présentation de vésicules apoptotiques, puis à l'apoptose. L'apoptose joue un rôle crucial dans le développement embryonnaire et la morphogenèse, le maintien d'une population stable de cellules normales dans les tissus, les défenses et les réponses immunitaires de l'organisme, les dommages cellulaires causés par la maladie ou l'intoxication, le vieillissement et le développement de tumeurs, et a une valeur thérapeutique potentielle.
Principe de détection
La distribution des phospholipides dans les membranes cellulaires normales est asymétrique. La phosphatidylsérine (PS) est située sur la surface interne de la membrane cellulaire dans les cellules vivantes et, lors de l'apoptose, la membrane cellulaire subit un changement et la PS passe de la surface interne de la membrane cellulaire à la surface externe de la membrane cellulaire. L'annexine V reconnaît spécifiquement la PS à la surface des cellules apoptotiques, tandis que la PS des cellules vivantes est située sur la surface interne de la membrane cellulaire et est incapable de se lier spécifiquement à l'annexine V.
Français Le PS des cellules nécrotiques bascule également de la surface interne de la membrane cellulaire à la surface externe de la membrane cellulaire, et l'Annexine V reconnaît également le PS à la surface des cellules nécrotiques, de sorte que l'Annexine V est incapable de faire la distinction entre les cellules nécrotiques et apoptotiques. En revanche, le colorant PI était capable de se lier à l'ADN intracellulaire et de faire la distinction entre les cellules nécrotiques et les cellules vivantes. La membrane cellulaire des cellules apoptotiques précoces et des cellules vivantes est toujours intacte, et le colorant PI ne peut pas traverser librement la membrane cellulaire pour entrer dans la cellule et se lier à l'ADN, de sorte que le colorant PI ne peut pas marquer les cellules apoptotiques et les cellules vivantes, tandis que le colorant PI est capable de traverser la membrane cellulaire des cellules nécrotiques et de se lier à l'ADN à l'intérieur de la cellule, et le colorant PI dans les cellules nécrotiques émettra une fluorescence rouge après avoir été excité par le laser à 488 nm, qui sera reçue par le canal correspondant. Ainsi, l'Annexine V et le PI peuvent être utilisés simultanément pour faire la distinction entre les cellules vivantes, les cellules apoptotiques précoces et les cellules apoptotiques tardives ou nécrotiques.
Fig. 2 Principe de détection de l'annexine V/PI
Détection par cytométrie de flux
La longueur d'onde d'excitation maximale du FITC est de 488 nm, la longueur d'onde d'émission maximale est de 525 nm et la fluorescence verte du FITC est détectée dans le canal FL1. La longueur d'onde d'excitation maximale du complexe PI-ADN est de 535 nm, la longueur d'onde d'émission maximale est de 615 nm et la fluorescence rouge du PI est détectée dans le canal FL2 ou FL3. L'analyse a été réalisée avec un logiciel tel que CellQuest, et un diagramme de dispersion à deux couleurs a été dessiné avec FITC comme coordonnée horizontale et PI comme coordonnée verticale. Dans les expériences typiques, les cellules peuvent être divisées en trois sous-populations, les cellules vivantes n'ayant qu'une fluorescence de fond de très faible intensité, les cellules apoptotiques précoces n'ayant qu'une forte fluorescence verte et les cellules apoptotiques tardives ayant une double coloration avec fluorescence verte et rouge.
Fig.3 Détection par cytométrie de flux
Questions fréquemment posées
Q : Le test d’apoptose de l’annexine V peut-il être appliqué aux plantes ou aux bactéries (procaryotes) ?
R : Oui, mais il est nécessaire de préparer les protoplastes car les cellules végétales ou les bactéries (procaryotes) contiennent des parois cellulaires. Le dosage spécifique de la solution de coloration ne nécessite que d'immerger les cellules, et le temps de coloration est quelque peu différent pour différentes cellules.
Q : Comment juger le résultat de l’expérience ?
A : Les cellules vivantes (Annexine V-/PI-), les cellules apoptotiques précoces (Annexine V+/PI-), les cellules apoptotiques tardives et les cellules nécrotiques présentent une double positivité (Annexine V+/PI+), les noyaux nus (Annexine V-/PI+).
Q : Quelle est la différence entre l’Annexine V et le TUNEL ?
A : Le marquage des extrémités de la désoxynucléotidyltransférase terminale dUTP (TUNEL) est une méthode de coloration utilisée pour identifier les sites de fragmentation de l'ADN intracellulaire, une caractéristique distinctive de l'apoptose tardive.
La coloration à l'annexine V reconnaît les premiers stades de l'apoptose en se liant aux résidus PS exposés à l'extérieur de la cellule en raison de la perte d'asymétrie de la membrane cellulaire.
Q : Est-il possible d’effectuer le test en utilisant uniquement l’Annexine V-FITC sans détecter de PI ?
R : Oui, c'est possible. Pour des échantillons de test spéciaux, tels que des globules rouges sans noyau ou l'utilisation du médicament Doxorubicine (Adriamycine) qui interfère avec la détection des IP, il est possible d'effectuer le test en utilisant uniquement l'Annexine V-FITC dans les deux cas.
Détails du produit
| Nom du produit | Numéro d'article | Spécification |
| Kit de détection de l'apoptose à l'annexine V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40302ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit de détection de l'apoptose à l'annexine V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40303ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit de détection de l'apoptose Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD | 40313ES60 | 100T |
| 40305ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40304ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| Kit de détection de l'apoptose Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD | 40312ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40306ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40307ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40308ES20/50/60 | 20T/50T/100T |