Dans le processus de culture cellulaire, la digestion cellulaire est souvent nécessaire, donc la trypsine utilisée pour digérer les cellules sera indispensable à la culture cellulaire, et elle est également très importante, ce qui affectera l'état de croissance des cellules.

La trypsine peut être largement divisée en deux types, l'un est la trypsine recombinante et l'autre est la trypsine non recombinante.

• La trypsine non recombinante est issue d'une extraction animale, d'origine animale, et constitue également l'utilisation traditionnelle de la trypsine, que l'on trouve couramment dans le système digestif animal et qui est directement extraite du tissu pancréatique des bovins ou des porcs.
• La trypsine recombinante est produite à l’aide de la technologie de recombinaison génétique et n’est pas d’origine animale.

Présentation et application du produit

Trypsine non recombinante (d'origine animale)

Caractéristiques du produit :

La trypsine non recombinante (également connue sous le nom de trypsine) est une enzyme protéolytique à sérine extraite du pancréas des bovins, des moutons et des porcs, qui peut cliver spécifiquement l'extrémité carboxyle de la lysine et de l'arginine chargées positivement, purifiée par cristallisation multiple, puis préparée par chromatographie et technologie d'ultrafiltration, d'origine animale.

Étant donné que les enzymes pancréatiques peuvent agir sur les protéines transmembranaires et les protéines de la matrice extracellulaire, telles que la cadhérine, l'intégrine, etc., elles sont désormais couramment utilisées pour dissocier les tissus et les cellules monocouches. Bien que la trypsine puisse hydrolyser la protéolyse entre les cellules en cellules distinctes, la réaction de différents tissus ou cellules à la trypsine est différente et l'activité des cellules dispersées est également liée à la concentration de trypsine, à la température et au temps de réaction, et la capacité de la trypsine à disperser les cellules est plus forte dans des conditions de pH de 7 à 9 et de température de 37 °C. L'ajout d'EDTA à la solution de trypsine en tant qu'agent chélateur lie le calcium et le magnésium dans une structure à six dents, ce qui peut affaiblir l'adhésion cellule-cellule et améliorer l'acquisition par la trypsine de liaisons peptidiques ciblées hydrolysées.

Au début, la principale application de la trypsine dans le domaine biopharmaceutique était la production d'insuline, et elle a rapidement été utilisée dans d'autres domaines de la culture cellulaire. Les enzymes pancréatiques animales sont couramment utilisées dans la culture sérique, et la composition et la concentration de trypsine ajoutée aux différentes cellules sont différentes.

Applications

1. production d’insuline et de vaccins inactivés ;
2. Isolement et culture de cellules tissulaires ;
3. Utilisation clinique et chirurgicale ;
4. Auxiliaires technologiques dans l'industrie alimentaire;

Trypsine recombinante (d'origine non animale)

Caractéristiques du produit

La trypsine recombinante est une enzyme produite par génie génétique, qui présente les avantages d'une bonne stabilité, d'une grande pureté et d'une origine non animale. Dans le processus de production de produits biopharmaceutiques modernes, l'utilisation de matières premières d'origine animale peut introduire dans le produit des sources potentielles de virus responsables de maladies zoonotiques, telles que l'ESB de la maladie de la vache folle, le virus de la fièvre aphteuse, etc. Afin de réduire la source de pollution, la trypsine est synthétisée par génie génétique, ce qui résout le risque de contamination virale que peut apporter la trypsine porcine ou bovine traditionnelle.

La trypsine recombinante est principalement exprimée par E. coli recombinant ou par un système de levure et purifiée par chromatographie multi-étapes, sans contamination par hétérozymes comme la chymotrypsine. La trypsine recombinante a les mêmes propriétés que la trypsine extraite naturellement, avec une séquence d'acides aminés homologue à la séquence de trypsine porcine, qui clive spécifiquement les groupes carboxyles dans les résidus de lysine et d'arginine dans la chaîne polypeptidique.En raison de sa pollution d'origine non animale et de sa grande pureté, il a une large gamme d'applications dans le développement pharmaceutique, la recherche biochimique, la protéomique et d'autres domaines.

La trypsine recombinante la plus répandue sur le marché est une trypsine porcine recombinante exprimée dans Escherichia coli ou dans la levure à l'aide de la technologie de recombinaison de l'ADN, et sa séquence d'acides aminés est totalement cohérente avec la trypsine porcine, avec la même activité et la même spécificité que la trypsine naturelle. Elle est composée de 223 acides aminés et contient 6 paires de liaisons disulfures. L'enzyme contient deux formes actives de trypsine : l'α-trypsine et la β-trypsine. Son activité est inhibée par les inhibiteurs de la protéase à sérine tels que PMSF et TLCK, les chélateurs d'ions métalliques tels que l'EDTA, etc. La trypsine recombinante est utilisée dans la culture sans sérum et, comme la trypsine, différentes cellules sont additionnées de différents composants et concentrations de trypsine.

Applications

1. production de vaccins et d’insuline recombinante;
2. Préparation d’échantillons de tissus pour analyse cellulaire ;
3. Thérapie cellulaire immunitaire;
4. Production biopharmaceutique;
5. Recherche sur la séquence, la structure et l'omique des protéines

Comparaison détaillée des produits

produits	Trypsine non recombinante (d'origine animale)	Trypsine recombinante (d'origine non animale)
Article	40123ES（phénol rouge(-), EDTA(+)） 40124ES (rouge de phénol (-), EDTA (-)) 40126ES (rouge de phénol (+), EDTA (-)) 40127ES (rouge de phénol (+), EDTA (+))	40512ES 20416ES (MS-SÉCURITÉ)
Source	Extrait du pancréas de bovins, de porcs et de moutons	colibacillus（40512ES） Pichia pastoris (20416ES)
Sécurité	Contamination par des agents pathogènes potentiels	Aucune contamination virale exogène
Pureté	Plus de 90 % de la solution de trypsine 1:250 est une impureté	Haute pureté (β-trypsine ≥ 70 %, α-trypsine ≤ 20 %）
Type de cellule de digestion	Lignées cellulaires fortement adhérentes les plus contiguës	Lignées cellulaires fortement adhérentes les plus contiguës
Limite de chymotrypsine	Pas plus de 50 unités de chymotrypsine pour 2500 unités de trypsine.	Aucune contamination par la myrosinase et d'autres impuretés enzymatiques
Activité spécifique	≥ 2500 Unités USP/mg de protéines	≥3800 Unités USP/mg de protéines
Effet digestif	instabilité	Digestion forte et faible quantité d'enzymes
Taux d'auto-coupe	Il est facile de s'auto-découper et de produire des fragments auto-découpants, ce qui affecte les résultats de l'analyse par spectrométrie de masse	Il est facile de s'auto-découper et de produire des fragments auto-découpants, ce qui affecte les résultats de l'analyse par spectrométrie de masse
Liquide dissous	Solution HBSS avec ou sans Ca2+, Mg2+	Solution HBSS avec ou sans Ca2+ et Mg2+ (40512ES) ; 1 mM HCL (20416ES)
Survie cellulaire	Normale	Normale
Si le gel-dégel est nécessaire	Oui	Oui

En plus de la trypsine la plus couramment utilisée dans la digestion cellulaire, il existe de nombreux autres types de produits enzymatiques digestifs qui peuvent également être utilisés, tels que les suivants.

À propos du domaine d’application de la collagénase

La collagénase est une endonucléase peptidase qui peut reconnaître spécifiquement la séquence Pro-X-Gly-Pro et cliver la liaison peptidique entre l'acide aminé neutre (X) et la glycine (Gly) dans la séquence, la collagénase est la seule protéase qui peut dégrader les fibrilles de collagène naturel avec une structure superenroulée à trois brins, et peut hydrolyser efficacement d'autres protéines, polysaccharides et lipides dans la matrice extracellulaire du tissu conjonctif et du tissu épithélial, ce qui rend ce produit très approprié pour la digestion des tissus.

1. Collagénase I., couramment utilisée comme préparation de cellules épithéliales, de cellules du foie, des poumons, de la graisse et des tissus surrénaux ;
2. La collagénase II, qui est utilisée pour la préparation de cellules dérivées de tissus tels que le cœur, les os, les muscles, le foie, la thyroïde et le cartilage ;
3. Collagénase III, couramment utilisée dans la préparation des cellules mammaires ;
4. La collagénase IV, couramment utilisée pour la préparation des cellules des îlots pancréatiques ou pour les expériences de préparation cellulaire où l'intégrité du récepteur doit être maintenue.
5. Collagénase V., adaptée à l'isolement des cellules des îlots pancréatiques et des cellules du tissu conjonctif.

À propos du domaine d’application de la trypsine composée

Accutase est un produit de digestion cellulaire qui contient une activité protéolytique et collagénase et constitue un substitut parfait aux produits de digestion trypsine-EDTA pour la digestion des cellules provenant de récipients de culture tissulaire conventionnels et de récipients de culture adhérents. Accutase convient à la dissociation tissulaire et à l'isolement cellulaire, car les cellules isolées conservent des antigènes de surface intacts et ne contiennent aucun composant d'origine animale ou bactérienne, ce qui peut répondre aux exigences des expériences ultérieures telles que le marquage de la surface cellulaire, l'analyse de la croissance virale, la cytométrie de flux et les essais liés aux bioréacteurs.

Domaines d'application des substituts d'enzymes pancréatiques

Les produits enzymatiques PerfCell Tryzyme™ Express sont très purs, endommagent peu les cellules, sont doux pour la digestion et peuvent être stockés de manière stable à température ambiante, ce qui en fait une enzyme digestive idéale pour différentes cultures de lignées cellulaires. Ce type de produit ne nécessite pas l'utilisation d'inhibiteurs de trypsine pour l'inactivation et ne contient pas de produits d'origine animale, ce qui est plus adapté à certaines expériences de croissance de cellules adhérentes sans sérum.

À propos du domaine d'application de Dispase

La dispase II, une métalloprotéinase non spécifique, est couramment utilisée en biologie cellulaire pour isoler des cellules individuelles de différents tissus ou organes, et est utilisée dans les cultures cellulaires ultérieures, telles que l'isolement de cellules primaires, le passage de cellules, etc., et peut également être utilisée pour éliminer l'agrégation cellulaire qui se produit pendant la culture de cellules en suspension. Par rapport à d'autres protéases couramment utilisées en biologie cellulaire (par exemple, la trypsine, la collagénase, la pronase, etc.), cette enzyme présente les avantages suivants :

1. Enzymes de digestion cellulaire rapides, efficaces et douces, avec peu de dommages aux cellules, et peuvent maintenir l'intégrité des membranes cellulaires ;
2. Dérivé de bactéries, pas de contamination par des mycoplasmes ou d'autres virus animaux ;
3. Forte stabilité, non affecté par la température, le pH et les composants du sérum ;
4. Il peut être utilisé pour l’isolement de divers types de tissus et de cellules.

Recommandations de produits associés

Numéro de catalogue	Nom du produit	Taille
40123ES60	PerfCel™l Trypsine-EDTA (0,25 %), rouge de phénol	100 ml
40124ES60	PerfCell™ Trypsine sans EDTA (0,25 %), sans rouge de phénol	100 ml
40126ES60	PerfCell™ Trypsine (0,25 %), rouge de phénol	100 ml
40127ES60	PerfCell™ Trypsine-EDTA (0,25 %), rouge de phénol	100 ml
40101ES25	Trypsine 1:250 (poudre)	25 g
40512ES10/60	Trypsine recombinante PerfCell™ (poudre)	10 mg/100 mg
20416ES60	Trypsine recombinante (MS-SAFE)	100 µg
40134ES60	PerfCell Tryzyme™ Express	100 ml
40135ES60	PerfCell Tryzyme™ Express	100 ml
40506ES60	ACCUSÉ	100 ml
40104ES60/80	Dispase II	100 mg/1 g