Contexte – Qu’est-ce que ROS
Les espèces réactives de l'oxygène (ROS) sont un produit normal du métabolisme cellulaire - une molécule bioactive contenant de l'oxygène, comprenant du peroxyde, du superoxyde, du radical hydroxyle, de l'oxygène singulet et de l'α-oxygène, etc., qui jouent un rôle régulateur important dans les voies de signalisation cellulaire et la transcription, telles que l'apoptose, l'autophagie, le vieillissement, le cancer, etc.
Effet de la concentration en ROS sur les cellules – pourquoi détecter les ROS ?
À de faibles niveaux d'espèces réactives de l'oxygène, les ROS sont impliquées dans la signalisation et la régulation intracellulaires en tant que « messagers redox ». Cependant, en cas de stress environnemental (par exemple, rayonnement ionisant, exposition à la chaleur, rayons ultraviolets, hypoxie, etc.), les niveaux de ROS augmentent considérablement, ce qui peut endommager l'ADN, inhiber l'expression des gènes, conduire à un mauvais repliement des protéines et même affecter la synthèse des protéines, provoquant de graves dommages aux structures cellulaires, ce que l'on appelle le stress oxydatif.
Une fois que les niveaux de ROS dépassent la capacité des défenses antioxydantes endogènes, l’équilibre redox est perturbé, entraînant des changements structurels ou conformationnels dans l’ADN, les lipides, les protéines et, finalement, la mort cellulaire.
Le niveau de ROS est un signal important des dommages cellulaires causés par des fonctions physiologiques normales et des facteurs environnementaux, et la détection du niveau de ROS intracellulaire est d'une grande importance pour comprendre les voies de signalisation et les mécanismes d'action potentiels de certains médicaments. Par conséquent, la sélection de sondes appropriées pour la détection des ROS joue un rôle important dans la recherche sur les mécanismes des maladies et le criblage de médicaments.
Comment fonctionne la détection ROS ?
Le Kit d'analyse des espèces réactives de l'oxygène (CAT# 50101ES01) est la méthode la plus couramment utilisée pour quantifier les niveaux d'espèces réactives de l'oxygène intracellulaires en fonction des changements d'intensité de fluorescence du colorant fluorescent DCFH-DA (2,7-Dichlorodi-hydrofluorescéine diacétate).
Le DCFH-DA lui-même n'a pas de fluorescence et peut traverser librement la membrane cellulaire. Après être entré dans la cellule, il peut être hydrolysé par des estérases intracellulaires pour produire du DCFH. Cependant, le DCFH ne peut pas pénétrer la membrane cellulaire, ce qui facilite le marquage et l'agrégation de la sonde dans la cellule. Les espèces réactives de l'oxygène intracellulaires sont capables d'oxyder le DCFH non fluorescent pour former du DCF fluorescent. L'intensité de la fluorescence verte du DCF est directement proportionnelle au niveau d'espèces réactives de l'oxygène intracellulaire, et le niveau d'espèces réactives de l'oxygène intracellulaire peut être connu en détectant la fluorescence du DCF.
Dans des conditions de longueur d'onde d'excitation de 488 nm et de longueur d'onde d'émission de 525 nm, la fluorescence DCF a été détectée par microscope à fluorescence, microscope confocal laser, spectrophotomètre à fluorescence, lecteur de microplaques à fluorescence, cytomètre de flux, etc., afin de déterminer le niveau d'espèces réactives de l'oxygène intracellulaires.
Littérature publiée par les clients utilisant ce produit (quelques exemples)
En septembre 2022, un total de 164 articles ont été publiés sur le kit de détection d'espèces réactives de l'oxygène ROS (50101ES01), avec un facteur d'impact total de 913,72.
Effet de la production de ROS sur la polarisation des macrophages et la destruction des cellules tumorales （PMID : 35665496 ; PMID : 35301299 ; ID PMC : PMC8931093ID PMC : PMC9353410.
FAQ
Q1 : Quels échantillons conviennent aux tests ROS ?
A1 : Il est généralement utilisé pour la détection de cellules de mammifères et convient uniquement à la détection d'espèces réactives de l'oxygène dans des cellules vivantes ou in vivo.
Q2 : Le kit de test ROS est-il adapté à la détection dans le sérum ou le plasma ?
A2 : Ne convient pas à la détection des ROS dans le sérum ou l'homogénat de tissu. Des suspensions unicellulaires préparées à partir de tissus frais peuvent être essayées.
Q3 : Peut-on détecter des plantes ou des bactéries ?
A3 : Il convient uniquement à la détection des espèces réactives de l'oxygène dans les cellules vivantes ou in vivo, car la demi-vie des radicaux hydroxyles et des radicaux superoxydes de l'oxygène est très courte, et il convient uniquement à la détection des cellules vivantes. Les plantes ou les bactéries, qui peuvent être utilisées pour la détection après la préparation des protoplastes, ce kit ne peut pas détecter les ROS in vivo.
Q4 : Comment puis-je éviter un arrière-plan de fluorescence excessif ?
A4 : Après l’incubation de la sonde, assurez-vous de laver toutes les sondes restantes qui ne sont pas entrées dans la cellule.
Q5 : Puis-je détecter la quantité de ROS dans les cellules normales ?
A5 : La teneur en espèces réactives de l’oxygène dans les cellules normales est très faible et l’effet de détection peut ne pas être très bon.
Q6 : Les valeurs de fluorescence négatives et positives sont les mêmes, que se passe-t-il ?
A6 : Cela peut être dû au fait que la concentration de la sonde ajoutée est trop importante. Il est recommandé de réduire la concentration de la sonde de 5 à 7,5 μM et le temps d'incubation de 15 à 20 min.
Q7 : La fluorescence du contrôle positif est faible, que se passe-t-il ?
A7 : Le témoin positif Rosup était généralement concentré à 100 μM et une augmentation significative des espèces réactives de l'oxygène a été observée 30 min à 4 h après stimulation. L'effet du témoin positif des espèces réactives de l'oxygène peut varier considérablement d'une cellule à l'autre. Si l'augmentation des ROS n'est pas observée dans les 30 minutes suivant la stimulation, le temps d'induction peut être prolongé ou la concentration de Rosup peut être augmentée de manière appropriée.
A8 : La même sonde, non divisée, les 5 premières fois l'effet est très bon, cette fois elle n'est pas teinte, quel est le problème ?
Q8 : 1. L'état cellulaire n'est pas bon, ce qui entraîne une faible efficacité de coloration ; 2. Le temps d'induction du médicament positif est trop court et le niveau d'espèces réactives de l'oxygène peut être considérablement augmenté par incubation à 37 °C dans l'obscurité pendant 30 min à 4 h ; 3. La sonde a été congelée et décongelée plus de 4 fois, l'efficacité de la coloration est réduite et le signal de fluorescence est instable (parfois fort, parfois faible et facile à éteindre). Il est recommandé d'aliquoter les sondes et de les stocker dans un congélateur à -20 °C à l'abri de la lumière pour éviter les cycles répétés de congélation-décongélation.
Q9 : Quels instruments peuvent être utilisés pour les tests ?
A9 : Le microscope à fluorescence, le microscope confocal laser, le spectrophotomètre à fluorescence, le lecteur de microplaques à fluorescence, le cytomètre de flux, etc. peuvent détecter les valeurs de fluorescence.
Publications de recherche scientifique publiées par les clients utilisant ce produit (partiel)
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[2] Zhang M, et al. Conscription de cellules immunitaires par un exosome dérivé de NK activable par la lumière (LASNEO) pour une éradication synergique des tumeurs. Adv Sci (Weinh). 2022 août ;9(22) : e2201135. doi : 10.1002/advs.202201135. Publication en ligne du 4 juin 2022. SI : 16.806
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[4] Jiao D, et al.Les cellules souches mésenchymateuses stimulées par l'oxyde de graphène réduit biocompatible induisent une accélération du remodelage osseux et du mouvement dentaire orthodontique en favorisant l'ostéoclastogenèse et l'angiogenèse. Bioact Mater. 6 février 2022 ; 15 : 409-425. doi : 10.1016/j.bioactmat.2022.01.021. PMID : 35386350 ; PMCID : PMC8958387. SI: 14.593
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[7] Xiaolu Chen, et al. Nanoparticules encapsulées dans des réseaux métal-phénoliques pour l'amplification en cascade et la délivrance de médicaments contre le cancer grâce à une combinaison de famine/chimiothérapie/chimiothérapie. Journal de génie chimique. 2022 août ; 442 : 136221. SI : 13.273
[8] Hao Ding, et al. Cellules souches mésenchymateuses encapsulées dans un hydrogel injectable piégeant les espèces réactives de l'oxygène et générant de l'O2 pour le traitement de l'infarctus du myocarde. Journal de génie chimique. 2022.133511:1385-8947. SI : 13.273
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| Nom du produit | Numéro de catalogue | Taille |
| 50101ES01 | 1 Kit (1000 tests) |