Le clonage moléculaire est utilisé dans presque tous les laboratoires. Les endonucléases de restriction sont un élément crucial des expériences de clonage moléculaire, mais les expériences avec les endonucléases de restriction posent souvent divers problèmes. Les problèmes courants sont les suivants :

• Il existe tellement de types d’endonucléases de restriction qu’il est difficile de choisir.
• Mauvais clivage, clivage aléatoire ou clivage enzymatique incomplet.
• Le rythme de digestion est lent ; cela peut prendre une heure ou même toute la nuit.
• De plus, les expériences de digestion enzymatique multiple doivent également choisir une variété de digestion enzymatique bTo

Pour vous permettre de mieux comprendre les endonucléases de restriction, nous allons brièvement expliquer ce que sont les endonucléases de restriction et comment les différentes endonucléases sont classées en réponse à la première question. La série Yeasen FuniCut™ d'endonucléases de restriction rapides peut facilement résoudre les deuxième à quatrième problèmes grâce à la modulation de la contrainte et à une procédure améliorée !

1. Qu’est-ce qu’une endonucléase de restriction ?
2. Restrictions relatives à la nomenclature des endonucléases
3. Restrictions sur la classification des endonucléases
4. Endonucléases de restriction rapides Yeasen FuniCut™

1. Qu’est-ce qu’une endonucléase de restriction ?

Les endonucléases de restriction sont une classe d'enzymes capables de reconnaître des séquences nucléotidiques spécifiques dans les molécules d'ADN double brin et de couper la liaison phosphodiester dans les chaînes d'ADN à des sites spécifiques.

Différentes endonucléases de restriction reconnaîtront différentes séquences d'ADN. Elles peuvent couper l'ADN à l'intérieur de la séquence de reconnaissance ou à un endroit non loin de la séquence de reconnaissance, ce qui donne divers produits, comme illustré dans la figure 1. BamHI forme des extrémités collantes, KpnI forme des extrémités 3'ticky et EcoRV forme des extrémités franches.

Figure 1. Diagramme schématique de la digestion par BamHI, KpnI, EcoRV

2. Restrictions relatives à la nomenclature des endonucléases

Le nom du genre, le nom de l'espèce, la souche bactérienne ou le sérotype et l'ordre de découverte sont les principaux facteurs utilisés pour nommer les endonucléases de restriction. Les directives de dénomination sont présentées dans le tableau 1 ci-dessous en utilisant BstEII comme exemple :

Tableau 1. Nomenclature des endonucléases restrictives

3.Restrictions sur la classification des endonucléases

Selon la complexité de la structure, le mode d'action et la différence entre les cofacteurs, les enzymes de restriction peuvent être divisées en quatre catégories. Le tableau 2 suivant résume les caractéristiques et les enzymes typiques de chaque catégorie.

Tableau 2. Variations entre plusieurs endonucléases de restriction

Comme indiqué dans le tableau 3 ci-dessous, il peut également être divisé en trois groupes en fonction des similitudes et des différences entre les sites de reconnaissance et de digestion.

Tableau 3.Analyse comparative de l'isoschizomère, du néoschizomère et de l'isocaudarner

Étant donné que certaines endonucléases de restriction sur le marché nécessitent encore une digestion nocturne et que les produits sont sujets à une digestion incorrecte, la nucléase Yeasen Fast Restriction Endoa, un tampon universel, effectue une digestion précise en 5 minutes, permettant à vos expériences de digestion de ne plus avoir de problèmes !

4. Yeasen FuniCut™ Endonucléases de restriction rapides