La technologie d'amplification isotherme des acides nucléiques peut être divisée en plusieurs catégories selon différents principes d'amplification. À l'heure actuelle, la plus courante et la plus utilisée est la technologie d'amplification isotherme à médiation par boucle (LAMP) développée par le chercheur japonais Notomi et al. en 2000. L'ADN polymérase Bst est l'enzyme de base de la technologie d'amplification isotherme. Quelle est la fonction et les performances de l'ADN polymérase Bst dans LAMP ?

1. Quel est le rôle de l'ADN polymérase Bst dans le LAMP ?
2. Qu'est-ce que l'ADN polymérase Bst Plus lyophilisée ?
3. Quelle est la caractéristique du produit Lyophilisé Bst Plus ADN Polymérase (14405ES)?
4. Quelles sont les performances du produit lyophilisé Bst Plus ADN Polymérase (14405ES) ?
5. Produits associés
6. Concernant la lecture

1. Quel est le rôle de l'ADN polymérase Bst dans le LAMP ?

La caractéristique technique de LAMP est de concevoir quatre amorces pour six régions du gène cible et de réaliser la réaction d'amplification à l'aide de l'ADN polymérase BST dans des conditions de température constante de 60 à 65 ℃, ce qui permet d'obtenir une amplification de 109 à 1010 fois en 15 à 60 minutes. L'ADN polymérase Bst présente une forte stabilité thermique, une activité de déplacement de brin et une activité polymérase. Il peut s'agir d'un modèle d'amplification rapide, efficace et spécifique dans des conditions de température constante sans cycle d'amplification par dénaturation thermique par PCR, et de réaliser l'ensemble de l'expérience LAMP en 1 heure.

2. Qu'est-ce que l'ADN polymérase Bst Plus lyophilisée ?

L'ADN polymérase Bst Plus lyophilisée est utilisée pour congeler l'ADN polymérase Bst Plus sans glycérol, ce qui résout le problème de l'instabilité de l'enzyme Bst sans glycérol. En même temps, ce produit a une forte activité d'ADN polymérase 5'-3', une activité de déplacement de brin et une tolérance au dUTP, ce qui est plus adapté à la réaction d'amplification isotherme anti-pollution. Il est pratique pour les clients de l'utiliser dans la production de produits lyophilisés.

Figure 1 : ADN polymérase Bst Plus lyophilisée 14405ES (60 U/μL, sans glycérol)

3. Quelle est la caractéristique du produit lyophilisé Bst Plus ADN Polymérase (14405ES) ?

• L'enzyme sans glycérol, adaptée à la lyophilisation
• Transport à température normale pour réduire les coûts
• Forte activité de déplacement de brin, sensible et stable
• Redissolution rapide et utilisation pratique

4. Quelles sont les performances du produit lyophilisé Bst Plus ADN Polymérase (14405ES) ?

4.1 Forme de poudre lyophilisée : par rapport au moment T0, la forme de la poudre reste inchangée après 45 ℃ - 15 JOURS de lyophilisation.

Figure 2. Forme de la poudre lyophilisée

4.2 Stabilité

Les performances de la poudre lyophilisée après accélération thermique peuvent toujours être cohérentes avec celles du réactif liquide, et la poudre lyophilisée (14405ES) est
universel et peut être utilisé pour la méthode de colorant fluorescent et la méthode d'indicateur de pH.

4.2.1 Méthode du colorant fluorescent —— stabilité

Dans le système d'amplification par colorant fluorescent RT-LAMP, les performances de la poudre lyophilisée Bst sans glycérol après T0, 45℃-7 jours et 45℃ -15 jours d'accélération thermique sont cohérentes avec celles de la version liquide de l'enzyme Bst sans glycérol, et le NTC n'atteint pas de pic.

Conditions expérimentales :

Remarque : Le groupe témoin est une version liquide sans enzyme glycérol Bst de la même concentration.

Figure 3. Résultats de stabilité

4.2.2 Méthode du colorant fluorescent — Performances de l'enzyme Bst après lyophilisation du système RT-LAMP

Dans le système d'amplification par colorant fluorescent RT-LAMP, les performances du produit de la poudre lyophilisée Bst sans glycérol lyophilisée dans le système RT-LAMP après 45 ℃ - 15 jours étaient cohérentes avec celles de la version liquide de l'enzyme Bst sans glycérol. Le taux de détection du produit dans le groupe témoin et dans le système RT-LAMP après lyophilisation était respectivement de 100 % (16/16) et de 94 % (15/16).

Conditions expérimentales :

Remarque : Le groupe témoin est une version liquide sans enzyme glycérol Bst de la même concentration.

Figure 4. Performances de l'enzyme Bst après lyophilisation du système RT-LAMP

4.2.3 Méthode de l'indicateur de pH ——Stabilité

Dans le système d'amplification de l'indicateur de pH RT-LAMP, par rapport au temps T0, le taux de détection de la poudre lyophilisée Bst était de 88 % (7/8) après 45 ℃ - 15 jours d'accélération thermique.

Conditions expérimentales :

Remarque : Le groupe témoin est une version liquide sans enzyme glycérol Bst de la même concentration.

Figure 5. Résultats de stabilité

4.2.4 Méthode de l'indicateur de pH ——Stabilité à la recongélation

Dans le système d'amplification de l'indicateur de pH RT-LAMP, après 45 ℃ - 7 jours de recongélation, les performances sont stables. Le groupe témoin est l'enzyme Bst liquide. Par rapport au groupe témoin, le taux de détection de 14405ES après accélération thermique est de 94 % (30/32).

Conditions expérimentales :

Remarque : Le groupe témoin est une version liquide sans enzyme glycérol Bst de la même concentration.

Figure 6. Résultats de la stabilité à la recongélation

4.3 Spécificité

Dans le système d'amplification par colorant fluorescent RT-LAMP, le NTC à 48 puits n'a pas atteint de pic et la spécificité du 14405ES était de 100 %.

Conditions expérimentales :

Remarque : Le groupe témoin est une version liquide sans enzyme glycérol Bst de la même concentration.

Figure 7. Résultats spécifiques

5. Produits associés

Les produits connexes que Yeasen peut fournir sont présentés dans le tableau 1.

Tableau 1.Produits connexes

6. Concernant la lecture

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