L'ARN circulaire (circRNA) est une classe unique de molécules d'ARN non codantes. Elles sont formées par un mécanisme appelé épissage arrière. Les deux exons de l'ARNm précurseur sont connectés dans une structure en boucle fermée pendant l'épissage, ce qui évite les structures communes de capuchon 5' et de queue 3' trouvées dans les molécules d'ARN linéaires. Cette structure circulaire confère au circRNA une grande stabilité, le rendant moins sensible à la dégradation par les nucléases dans la cellule. Par conséquent, ils ont une demi-vie plus longue dans les cellules, ce qui leur permet d'obtenir des effets à faible dose et durables dans les applications pratiques. De plus, le circRNA présente l’avantage d’un processus de production relativement simple car il ne nécessite pas le nucléotides modifiés le coiffage ou la polyadénylation, faisant de l'ARN circulaire un point chaud dans le développement de médicaments.
Il présente des avantages significatifs dans le développement de médicaments, dont les détails sont principalement répertorié dans ce qui suit :
01 Stabilité accrue
La structure du circRNA le rend résistant à la dégradation par les nucléases, donc il a une demi-vie plus longue et une plus grande stabilité dans les cellules, ce qui est crucial pour l'effet durable des médicaments.
02 Faible immunogénicité
Comparé à l’ARN linéaire, le circRNA présente une immunogénicité plus faible, ce qui réduit la possibilité de réactions immunitaires, rendant le circRNA plus approprié comme vecteur de médicaments.
03 Expression efficace des protéines
Les recherches montrent que les circRNA modifiés peuvent exprimer de manière stable et efficace des protéines dans les cellules eucaryotes, ce qui est particulièrement important pour la thérapie de remplacement des protéines.
04 Applications potentielles du traitement des maladies
Le circRNA a montré un potentiel dans le traitement de diverses maladies, notamment les maladies rares, la thérapie contre le cancer et dans le cadre du développement de vaccins.
05 Système de livraison innovant
Les systèmes de distribution nouvellement développés, tels que les nanoparticules lipidiques (LNP), peuvent délivrer efficacement l'ARNcirc aux cellules cibles, ce qui est crucial pour le ciblage et l'efficacité des médicaments.
06 Développement de vaccins
Les vaccins à ARNcirc ont montré un potentiel dans le développement de vaccins contre la COVID-19, capables d'induire la production d'anticorps plus neutralisants et de réponses efficaces des lymphocytes T, et sont plus stables à température ambiante par rapport à l'ARNm linéaire, ce qui contribue à simplifier les conditions de stockage et de transport.
07 Édition génétique
circRNA présente également un potentiel dans le domaine de l'édition génétique, capable de servir de modèle pour les systèmes d'édition génétique, offrant une expression protéique plus persistante et plus stable.
Le processus de production de circRNA comprend : la préparation du modèle, la transcription in vitro, l'élimination du modèle d'ADN, la circularisation et la purification. Après la circularisation de l'ARN, l'ARN non circularisé doit être digéré avec la ribonucléase R (RNase R) pour enrichir l'ARNcirc.
YEASEN dispose d'une plate-forme de conception rationnelle et d'évolution dirigée d'enzymes moléculaires bidirectionnelles, ainsi que d'une base de production d'enzymes moléculaires spécialement conçue pour les produits de niveau GMP. Développer et produire des produits RNase R de qualité GMP avec une pureté élevée et une forte activité digestive, fournissant un soutien au lancement de nouveaux vaccins/médicaments à ARN.
Figure 1 : Diagramme du processus de production d'ARN circulaire
(Source : Front Immunol 2023 janv. 12:13:1091797. doi: 10.3389/fimmu.2022.1091797. eCollection 2022.)
La RNase R (Ribonuclease R, RNase R) est une exoribonucléase 3'→5' dépendante de Mg2+ provenant de Escherichia coliIl peut digérer tout l'ARN linéaire et a du mal à digérer l'ARN circulaire, l'ARN Lasso, ou des molécules d'ARN double brin comportant moins de 7 nucléotides dépassant à l'extrémité 3'. La RNase R est couramment utilisée pour éliminer les molécules d'ARN linéaires, ce qui permet d'enrichir les ARN non linéaires tels que l'ARN circ et l'ARN lariat.
L'application principale régions sont:
- Recherche sur l’expression génétique;
- Recherche sur l'épissage alternatif ;
- Enrichir le circRNA à partir d’échantillons biologiques ;
- Identifier la structure intronique du lariat de l'ARN ;
- Identifier l'exon circRNA.
Caractéristiques du produit
- Pureté des protéines (SDS-PAGE) ≥95 % ;
- Aucun résidu d’exonucléase ;
- Par rapport aux concurrents, le produit a une capacité équivalente à digérer l’ARN linéaire ;
- Par rapport aux concurrents, le produit a un effet similaire sur l’enrichissement du circRNA.
Démonstration de performance
Pureté des protéines (SDS-PAGE) ≥ 95 %
Figure 2 : Test de pureté des protéines : De gauche à droite, les résultats concernent différents volumes (1 μL, 2 μL, 3 μL) de la même concentration de produit. Les résultats montrent que la pureté protéique de YEASEN Le produit RNase R est ≥ 95 %.
Aucun résidu d'exonucléase
Figure 3 : Détection résiduelle d'exonucléase : ajouter 20 U de YEASEN Digestion de 0,5 μg de λDNA-Hind III par la RNase R, incubation à 37°C pendant 4 heures, puis électrophorèse sur gel d'agarose. Les résultats montrent que les bandes d'ADN n'ont pas changé, ce qui indique qu'il n'y a pas d'exonucléase résiduelle dans le YEASEN Produit de la RNase R.
Comparable au produit RNase R de marque importée A dans la digestion de l'ARN linéaire
Figure 4 : Comparaison de la capacité des produits RNase R de YEASEN et des produits RNase R d'un fabricant importé à digérer l'ARN linéaire : lorsque le YEASEN Le produit RNase R et le produit RNase R d'un fabricant importé A ont été ajoutés à un système de réaction contenant des substrats d'ARN linéaires, les résultats ont montré que lorsque la quantité de produit RNase R ajoutée atteignait 2 à 4 U, les bandes d'ARN devenaient faibles ou même disparaissaient, indiquant que la RNase R a un effet digestif sur les molécules d'ARN linéaires. De plus, la capacité digestive de YEASEN Le produit RNase R et le produit RNase R du fabricant importé A sur les molécules d'ARN linéaires sont comparables.
Équivalent à l'effet d'enrichissement en circRNA du produit RNase R de marque importée d'A
Figure 5 : Comparaison de l'effet d'enrichissement du circRNA par YEASEN Produit RNase R et produit RNase R d'un fabricant importé A : Le système réactionnel contenant des substrats circRNA a été soumis à des réactions avec YEASEN produits et produits RNase R provenant respectivement d'un fabricant importé A.Les résultats ont montré qu'il n'y avait pas de différence significative dans la luminosité des bandes d'ARN après traitement avec le produit RNase R de YEASEN et le produit RNase R du fabricant importé A, indiquant que le circRNA peut résister à la digestion par la RNase R. Les résultats ci-dessus confirment que YEASEN Les produits et les produits RNase R d'un fabricant importé peuvent être utilisés efficacement pour l'enrichissement du circRNA.
Commentaires des clients
YFACILITER La RNase R a de meilleurs effets de clivage sur l'ARN linéaire par rapport aux autres marques.
Figure 6 : Comparaison des effets de la digestion par la RNase R sur les molécules d'ARNm linéaires entre YEASEN produits et fabricants A et B : La réaction a été réalisée en ajoutant le YEASEN Le produit RNase R et les produits RNase R des fabricants A et B à un système de réaction contenant 1 μg de substrat d'ARNm linéaire. Les résultats ont montré que le YEASEN Le produit RNase R avait une meilleure efficacité de digestion sur l'ARN linéaire par rapport aux produits RNase R des fabricants A et B.
Informations sur le produit
| Nom du produit | Code produit | Spécifications du produit |
| 14615ES | 500U/5000U/20KU/200KU | |
| 14616ES | 500 µl/1 mL/5 mL/10 mL/100 mL |
Références
1.Qu L, Yi Z, Shen Y et al. Vaccins circulaires à ARN contre le SRAS-CoV-2 et les variantes émergentes. Cellule. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
2.Chen L, Wang C, Sun H, et al. La boîte à outils bioinformatique pour la découverte et l'analyse de circRNA. Bref Bioinform. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001