L'essence de la quantification de la bibliothèque NGS est la quantification des acides nucléiques (ADN ou ARN). Une analyse précise de la quantification de la bibliothèque NGS est essentielle pour obtenir des données de séquençage de haute qualité. Si la concentration quantitative de la bibliothèque NGS est élevée, le rendement des données de séquençage peut être faible en raison d'un clustering insuffisant. Cependant, une faible concentration quantitative peut provoquer une interférence de signal entre les clusters pour produire des données de mauvaise qualité, et même conduire à un échec de séquençage. De plus, avec l'augmentation du flux de séquençage des séquenceurs, plusieurs bibliothèques NGS sont souvent combinées pour le séquençage. Selon les exigences de taille des données de séquençage, les bibliothèques NGS avec les quantités molaires correspondantes sont mélangées en fonction des résultats quantitatifs pour stabiliser la sortie de la taille de chaque donnée d'échantillon. Par conséquent, une quantification précise des bibliothèques NGS est cruciale.

Actuellement, il existe deux principales méthodes de quantification de la bibliothèque NGS, la méthode d'absorption ultraviolette et la méthode du colorant fluorescent. NanoDrop est un instrument de quantification de l'ADN conçu sur la base du principe d'absorption ultraviolette ; Qubit est un instrument de quantification de l'ADN développé selon le principe du colorant fluorescent. La précision quantitative et le coût de ces deux méthodes sont différents. La méthode qubit est principalement recommandée ici. Alors pourquoi vous recommandons-nous le qubit ? Quelles sont les caractéristiques des produits Qubit fournis par Yeasen ? Veuillez continuer à lire...

1. Pourquoi vous recommandons-nous Qubit ?

2. Quelles sont les caractéristiques des produits Qubit fournis par Yeasen ?

• Comment fonctionne Qubit ?
• Produit populaire fourni par Yeasen
• Caractéristiques du produit

3. Comment choisir un Qubit pour différents échantillons ?

1. Pourquoi vous recommandons-nous Qubit ?

Il ne fait aucun doute que Qubit est meilleur que Nanodrop. Alors pourquoi qubit est-il meilleur que nanodrop ? Quelle est la différence entre qubit et nanodrop ? Tout d'abord, comme mentionné précédemment, ils diffèrent dans le principe de quantification de l'ADN, NanoDrop est conçu sur la base de l'absorption ultraviolette. Le principe de la méthode d'absorption ultraviolette est qu'il y a des bases puriques et pyrimidiques dans les composants d'acide nucléique, et ces bases ont des doubles liaisons conjuguées. Il y a une forte absorption de la lumière à 250-280 nm dans la région UV, et la valeur d'absorption maximale est d'environ 260 nm. Par conséquent, l'absorption UV de l'acide nucléique peut être utilisée pour la quantification de la concentration. NanoDrop est simple et rapide à utiliser, mais il ne peut pas faire la distinction entre l'ADN, l'ARN, les acides nucléiques dégradés, les nucléotides libres et d'autres impuretés. Il n'est pas adapté à l'obtention de données quantitatives précises de la bibliothèque. Mais la quantification Qubit est le meilleur choix pour une quantification précise de la bibliothèque NGS, en particulier pour la quantification de l'ADN. Quelles sont donc les caractéristiques de la quantification de l'ADN par qubit ? Veuillez consulter le tableau suivant :

2. Quelles sont les caractéristiques des produits Qubit fournis par Yeasen ?

Avant de présenter les caractéristiques des produits Qubit fournis par Yeasen, comprenons comment cela fonctionne.

2.1 Comment fonctionne Qubit ?

Le principe de Qubit consiste à utiliser des colorants fluorescents pour se lier aux molécules d'ADN afin d'émettre une fluorescence, puis à mesurer l'intensité de la fluorescence pour obtenir la concentration d'acide nucléique. Les colorants fluorescents ne deviennent fluorescents qu'après s'être liés au double brin d'ADN, et la fluorescence résultante est proportionnelle à la concentration d'ADN.

2.2 Produit populaire fourni par Yeasen

Le 1×dsDNA HS Assay Kit pour Qubit® (Cat#: 12642ES), développé sur la base du Le kit d'analyse d'ADN double brin HS pour le kit Qubit® (réf. : 12640ES) est une solution de prémélange Qubit prête à l'emploi pour prédiluer les colorants concentrés du kit d'origine dans une solution de travail. Lors de l'utilisation, il vous suffit de mélanger le liquide de travail avec l'échantillon à tester pour déterminer la concentration de l'échantillon à l'aide du fluorimètre Qubit®, ce qui est plus pratique à utiliser.

2.3 Caractéristiques du produit

Simple et facile à utiliser : liquide pré-mélangé prêt à l'emploi, pas besoin de préparer le liquide de travail, fonctionnement simple, gain de temps quantitatif ;

Figure 1. Processus du kit d'analyse dsADN HS pour Qubit

Sensibilité ultra-élevée : quantification précise par dilution en gradient 64x, 0,2 à 100 ng dsADN présente une bonne relation linéaire ;

Super spécificité : Détection spécifique dsADN, présente une excellente tolérance à certains polluants conventionnels ;

Vitesse de liaison rapide du colorant : la saturation peut être atteinte en 2 minutes, il n'est donc pas nécessaire d'attendre une lecture rapide de résultats quantitatifs précis ;

Haute stabilité : le signal de fluorescence a duré 3 heures et la précision quantitative n'a pas été affectée après 20 jours à température ambiante.

Figure 1. Le test de stabilité du produit. Les résultats montrent qu'il reste stable après avoir été conservé à température ambiante pendant 2 semaines (l'écart entre la valeur mesurée et la valeur théorique était < 10 %)

Remarque : deux concentrations d'ADNdb ont été sélectionnées, et Thermo#Q33230 stocké à 4 ℃, Yeasen#12642 stocké à 4 ℃ ​​et Yeasen#12642 stocké à température ambiante (environ 25 ℃) ont été utilisés pour déterminer les valeurs de concentration à différents moments, et le taux d'écart entre chaque mesure et la première (indiqué par 0 d) a été calculé.

Figure 2. Test de stabilité du produit. Stabilité exceptionnelle, grande pertinence des résultats du test pendant la période de validité

3. Comment choisir un Qubit pour différents échantillons ?

Qubit, quantification rapide ! L'utilisation de Qubit pour la quantification de bibliothèques présente de nombreux avantages. Son processus de détection est rapide et efficace.Les résultats du séquençage peuvent être obtenus en quelques secondes pour un seul échantillon et la concentration peut être directement générée, ce qui est très intuitif. En même temps, il peut également être compatible avec la plupart des instruments de marquage enzymatique pour la quantification d'échantillons par lots, ce qui constitue le premier choix pour la quantification de bibliothèques conventionnelles et la quantification d'ADN double brin.