La quantification des acides nucléiques, l'une des expériences les plus fondamentales de la biologie moléculaire, affecte directement le résultat des expériences en aval. La précision de la quantification des acides nucléiques est cruciale. À l'heure actuelle, il existe deux principales méthodes de quantification des bibliothèques NGS, la méthode d'absorption ultraviolette et la méthode du colorant fluorescent.

La méthode d'absorption ultraviolette utilise un spectrophotomètre pour mesurer l'absorbance à 260 nm pour la quantification de l'ADN et de l'ARN. Elle estime également la pureté des acides nucléiques en calculant le rapport OD260/OD280. Cependant, les valeurs détectées sont très sensibles aux interférences d'autres contaminants tels que les nucléotides libres, les sels et les composés organiques.

La quantification fluorométrique Qubit utilise des colorants fluorescents qui se lient spécifiquement à l'ADN double brin, à l'ADN simple brin, à l'ARN ou aux protéines. Lors de l'excitation par une source lumineuse d'une longueur d'onde spécifique, les colorants émettent une fluorescence, qui n'est pas affectée par d'autres molécules d'impureté éventuellement présentes dans l'échantillon. L'intensité de la fluorescence est proportionnelle à la concentration des molécules cibles dans l'échantillon.

Tableau 1. Comparaison des méthodes courantes de quantification des acides nucléiques

Cible	UV Abs (nanogoutte)	Qubit ADN HS	Qubit ADN BR	Qubit ARN	Qubit ADN simple brin
Type d'acide nucléique	ADN, ARN	ADN double brin	ADN double brin	ARN	ADN simple brin, oligo
Concentration de l'échantillon (ng/μL)	2 ng/μL-15 μg/μL	10 pg/µL-100 ng/µL	0,1 ng/µL-1000 ng/µL	250 pg/µl-1000 ng/µl	50 pg/μL-200 ng/μL
Avantage	Limite supérieure de quantification	Bonne spécificité	Large gamme de quantification	Hautement sélectif pour l'ARN	Bien toléré
Limites	Faible spécificité	Protéger de la lumière pendant l'utilisation	Protéger de la lumière pendant l'utilisation	Protéger de la lumière pendant l'utilisation	Faible spécificité et se lie également à l'ADN double brin

L'absorption UV et la quantification fluorométrique Qubit présentent chacune leurs avantages et peuvent se compléter. Pour la quantification préliminaire d'échantillons d'acides nucléiques de routine afin de déterminer la concentration, la pureté et la présence de contaminants, la méthode de quantification de l'absorption peut être choisie. La quantification par qubits est plus adaptée aux échantillons précieux à faible concentration ou à la quantification précise requise pour les expériences en aval, telles que le séquençage de nouvelle génération et la PCR quantitative en temps réel.

Yeasen a lancé plusieurs produits de quantification Qubit : kit d'analyse dsADN HS pour Qubit^® (Cat#12640), prêt à l'emploi : 1× kit d'analyse dsADN HS pour Qubit^® (Cat#12642), Kit d'analyse ssADN pour Qubit^® (Cat#12645) et le kit d'analyse dsADN BR (Cat#12643), qui ont été largement salués depuis leur lancement.

Solution 1 Quantification de l'ADN double brin HS à haute sensibilité

Prémélange de quantification d'ADN double brin prêt à l'emploi — 1 kit d'analyse d'ADN double brin HS pour Qubit^®

^{Utilisation facile : prémélange prêt à l’emploi, pas besoin de prémélange ;}

^{Haute sensibilité : concentration détectable aussi faible que 50 pg/μL ;}

^{Bonne stabilité : le signal de fluorescence dure 3 heures et le stockage à température ambiante pendant 20 jours n'affecte pas la précision de la quantification ;}

^{A. Superbe stabilité : le stockage à température ambiante pendant 2 semaines maintient toujours la stabilité (la valeur mesurée s'écarte de la valeur théorique de moins de 10 %).}

Tableau 2. Test de stabilité de différents échantillons à 4°C et à température ambiante par rapport aux concurrents

Réactifs quantitatifs	Déterminé concentration de λADN (ng/μL)
	0j		1j		3d	7j			10j		14j
T* 4℃	0,51		0,496		0,524	0,534			0,495		0,499
Yeasen 4℃	0,51		0,508		0,513	0,475			0,48		0,495
Yeasen température ambiante stockage	0,51		0,517		0,506	0,486			0,506		0,523
Réactifs quantitatifs	Déterminé concentration d'ADN génomique de veau (ng/μL)
	0j	1j		3d			7j	10j		14j
T* 4℃	55.3	53,5		55,40			57,9	55,8		58
Yeasen 4℃	59,4	55,4		57,8			56.1	56.3		59,8
Yeasen température ambiante stockage	59	55,7		61,3			58	58,7		56.1

B. Haute sensibilité, bonne stabilité d'un lot à l'autre

Tableau 3.Test de stabilité de différents lots

Battraper	Échantillon	L*			Yeasen			erreur
		concentration1 (ng/μL)	concentration2 (ng/μL)	Moyenne (ng/μL)	concentration1 (ng/μL)	concentration2 (ng/μL)	Moyenne (ng/μL)
D9801060	λADN	0,3160	0,3250	0,3205	0,320	0,320	0,320	0,16%
D8801050		0,3310	0,3320	0,3315	0,319	0,306	0,3125	5,73%
D7813110		0,345	0,358	0,352	0,334	0,329	0,332	-6,03%

Solution 2 Quantification à large spectre de l'ADN double brin BR

Quantification à large spectre de l'ADN double brin — Kit d'analyse d'ADN double brin BR

Haute sensibilité : concentration détectable aussi faible que 50 pg/μL ;

Excellente linéarité : Bonne linéarité dans la plage de 2 à 1 000 ng ;

Forte tolérance aux contaminants : peut tolérer les contaminants courants.

Tableau 4. Stabilité et tolérance aux contaminants par rapport aux concurrents

Yeasen BR						T* BR
standard	RFU1	RFU2	Moyenne	erreur		standard	RFU1	RFU2	Moyenne	erreur
S1	159,63	160,71	160.17	1%		S1	216.17	211,56	213.865	-2%
S2	24497.0	25078.64	24787.82	2%		S2	20532.46	20452.26	20492.36	0%
mesurage						mesurage
Contaminant	Concentration dans un échantillon de 10 μL	concentration1	concentration2	Moyenne	À tester/contrôler	Contaminant	Concentration dans un échantillon de 10 μL	concentration1	concentration2	Moyenne	À tester/contrôler
Contrôle (H2O)	/	49	48,6	48,8	0,0%	Contrôle (H2O)	/	49,8	48	48,9	0,0%
BSA	1 mg/ml	51,8	52	51,9	6,4%	BSA	1 mg/ml	54	51.2	52,6	7,6%
Éthanol	20%	44,6	44	44.3	-9,2%	Éthanol	20%	44,8	43.4	44.1	-9,8%
chloroforme	4,00%	49,0	49,8	49,4	1,2%	chloroforme	4,00%	50,0	47	48,5	-0,8%
FDS	0,2%	46,6	45,8	46.2	-5,3%	FDS	0,2%	53.2	51,6	52.4	7,2%
Trition-X100	0,20%	41,6	40,6	41.1	-15,8%	Trition-X100	0.20%	53	51	52.0	6,3%
dNTP	2 mM	44.2	45	44,6	-8,6%	dNTP	2 mM	47,8	46.4	47.1	-3,7%

Solution 3 Quantification de l'ADN simple brin

Le choix idéal pour la quantification de l'ADN simple brin — Kit d'analyse d'ADN simple brin à prix élevé pour Qubit^®

^{Haute sensibilité : concentration détectable aussi faible que 50 pg/μL ;
Excellente linéarité : Bonne linéarité dans la plage de 0 à 200 ng ;
Signal stable : un excellent colorant combiné à un tampon optimisé amélioré, peut maintenir une intensité de fluorescence stable à température ambiante et est hautement applicable même dans des environnements de pollution courants tels que les sels, les nucléotides libres, les solvants, les détergents ou les protéines, garantissant une quantification précise ;
Bonne stabilité : Pas de changement significatif des performances après 6 mois de traitement à 4°C ou 25°C ;
Large gamme d'applications : processus de fonctionnement simple, permettant une quantification rapide des oligonucléotides, des amorces, de l'ADN dénaturé, de l'ADN circulaire simple brin, etc.}

A. Bonne répétabilité : quantification dans différents instruments Qubit, différents types d'échantillons utilisant Yeasen plusieurs lots de Cat#12645 testés. Dans la gamme de 0 à 200 ng, bonne répétabilité des mesures à partir de différents instruments Qubit.